Totale proteine ​​ematiche 60-80 g/l. Esistono diverse frazioni proteiche che svolgono funzioni specifiche.

1. Le albumine (40-60 g/l) hanno un'elevata attività colloido-osmotica.

2. Si creano le globuline a, b, g (20-40 g/l). immunità umorale, formando vari anticorpi chiamati immunoglobuline (IgM, IgG).

3. Fibrinogeno (2-4 g/l) - fattore principale meccanismo di coagulazione del sangue.

ANTIGENI(Greco ànti - contro, genos - creare) - sostanze che hanno la capacità di provocare la formazione di anticorpi nell'organismo e di reagire con essi. Nella membrana degli eritrociti sono incorporati numerosi polisaccaridi specifici, complessi di aminoacidi con proprietà antigeniche. Questi complessi sono chiamati agglutinogeni.

Ad oggi, negli eritrociti umani sono stati scoperti più di 400 antigeni localizzati nella membrana eritrocitaria, 140 dei quali sono combinati in 20 sistemi geneticamente controllati. I restanti antigeni sono comuni o individuali. Per la pratica clinica, i sistemi più importanti sono il sistema ABO e il sistema Rh (sistema Rh). Si distinguono anche i gruppi Kell-Celano, Kidd, Lutheran, Duffy, Diego, ecc. Questi ultimi sono importanti solo in caso di trasfusioni di sangue frequenti o in gravidanza incompatibili per uno di questi agglutinogeni. Pertanto non sono raccomandate trasfusioni ripetute di sangue dallo stesso donatore.

Gli antigeni degli eritrociti compaiono nel secondo mese di sviluppo embrionale, ma al momento della nascita del bambino, la loro attività agglutinabile è bassa e ammonta a 1/5 dell'attività degli adulti.

ANTICORPI- sostanze che reagiscono con l'antigene. Gli anticorpi naturali sono sempre presenti nel plasma sanguigno e appartengono alla frazione delle gamma-globuline. Questi includono gli anticorpi del sistema ABO - agglutinine aeb, che compaiono in una persona nei primi mesi dopo la nascita e raggiungono la quantità massima entro 5-10 anni di vita.

REAZIONE DI AGLUTINAZIONE- incollaggio e sedimentazione dei globuli rossi sotto l'influenza di anticorpi specifici - agglutinine. Si ritiene che la molecola anticorpale con due centri di legame formi un ponte tra due globuli rossi. Ciascuno di questi globuli rossi comunica a sua volta con altri globuli rossi e di conseguenza si uniscono. Durante la trasfusione sangue incompatibile l'agglutinazione porta all'emolisi dei globuli rossi e al rilascio dei fattori della coagulazione. I coaguli risultanti ostruiscono i piccoli vasi e quindi interrompono la circolazione capillare.

L'agglutinazione avviene quando gli agglutinogeni con lo stesso nome del donatore e le agglutinine del ricevente si incontrano.

Disposizioni fondamentali. Le cellule del sangue e il plasma contengono un numero enorme di antigeni. Pertanto, i globuli rossi trasportano circa 400 antigeni, leucociti e piastrine, oltre ai loro antigeni specifici: antigeni HLA. Le proteine ​​plasmatiche sono inoltre caratterizzate da una grande diversità antigenica. Una risposta immunitaria patologica a questi antigeni è alla base della patogenesi di numerose malattie.

1. Reazione di emoagglutinazione- uno dei metodi principali con cui vengono determinati gli antigeni eritrocitari. L'agglutinazione dei globuli rossi è mediata dagli anticorpi. La velocità e la gravità di questo processo dipendono dal numero di globuli rossi, dalla concentrazione di anticorpi, dal pH, dalla temperatura e dalla forza ionica della soluzione. L'agglutinazione si verifica quando le forze di legame superano le forze repulsive a causa della carica negativa sulla superficie cellulare dei globuli rossi. Le IgM, che trasportano 10 siti di legame, provocano l'agglutinazione dei globuli rossi anche in soluzione salina. Le IgG non possono causare agglutinazione finché la carica negativa dei globuli rossi non viene ridotta utilizzando una sostanza ad alto peso molecolare (ad esempio l'albumina bovina) o senza la rimozione degli acidi sialici (per questo i globuli rossi vengono trattati con proteasi: ficina, papaina, bromelina o trypsin). L'agglutinazione dipende anche dalla disponibilità, cioè dal numero e dalla localizzazione, delle molecole antigeniche sulla superficie dell'eritrocito. Gli antigeni del sistema AB0 (antigeni eritrocitari A e B) si trovano sulla superficie esterna membrana cellulare e quindi si legano facilmente agli anticorpi e gli antigeni del sistema Rh si trovano nel suo spessore. La disponibilità di tali antigeni aumenta quando i globuli rossi vengono trattati con enzimi.

2. Prova di Coombs- un metodo diagnostico di laboratorio basato sulla reazione di emoagglutinazione.

UN. Test diretto di Coombsutilizzato per rilevare anticorpi o componenti del complemento fissati sulla superficie dei globuli rossi. Viene eseguito come segue.

1) Per ottenere anticorpi contro le immunoglobuline umane (siero antiglobulina) o il complemento (siero anticomplementare), l'animale viene immunizzato con siero umano, immunoglobuline o complemento umano. Il siero ottenuto dall'animale viene purificato dagli anticorpi verso altre proteine.

2) I globuli rossi del paziente vengono lavati con soluzione salina per rimuovere completamente il siero, che neutralizza gli anticorpi contro le immunoglobuline e il complemento e può causare un risultato falso negativo.

3) Se gli anticorpi o i componenti del complemento vengono fissati sulla superficie dei globuli rossi, l'aggiunta di antiglobulina o di siero anti-complemento provoca l'agglutinazione dei globuli rossi.

B. Test di Coombs indirettoconsente di rilevare gli anticorpi contro i globuli rossi nel siero. Per fare ciò, il siero del paziente viene incubato con globuli rossi di donatori del gruppo 0, quindi viene eseguito un test di Coombs diretto, come descritto sopra.

V. Test di Coombs diretto

1) Emolisi autoimmune.

2) Malattia emolitica dei neonati.

3) Anemia emolitica immunitaria indotta da farmaci.

4) Reazioni trasfusionali emolitiche.

G. Test di Coombs indirettoutilizzato nei seguenti casi.

1) Determinazione della compatibilità individuale del sangue del donatore e del ricevente.

2) Rilevazione di alloanticorpi, compresi gli anticorpi che causano reazioni trasfusionali emolitiche.

3) Determinazione degli antigeni eritrocitari di superficie nella genetica medica e nella medicina legale.

4) Conferma di gemelli identici durante il trapianto di midollo osseo.

B. Antigeni di superficie degli eritrocitidivisi in polisaccaridi e proteine. Gli antigeni polisaccaridici includono gli antigeni dei sistemi AB0, MNS, Ii e P, e gli antigeni proteici includono gli antigeni dei sistemi Rh, Kell, Kidd e Duffy.

1. Antigeni polisaccaridicihanno le seguenti proprietà.

UN. Stimolano prevalentemente la produzione di IgM.

B. Stimolano la produzione di anticorpi sia caldi (reagendo con l'antigene a 37°C) che freddi (reagendo con l'antigene a 4°C).

V. Le isoemoagglutinine sono dirette contro gli antigeni polisaccaridici del sistema AB0: il sangue del gruppo A contiene anticorpi contro l'antigene B, il sangue del gruppo B contiene anticorpi contro l'antigene A, il sangue del gruppo 0 contiene anticorpi contro gli antigeni A e B, il sangue del gruppo AB non contiene isoemoagglutinine.

G. Il legame degli antigeni polisaccaridici degli eritrociti agli anticorpi provoca reazioni trasfusionali emolitiche acute.

2. Antigeni proteicistimolano prevalentemente la produzione di anticorpi caldi - IgG, che causano reazioni trasfusionali emolitiche ritardate.

Antigeni dei gruppi sanguigni

1. Trasportatori transmembrana (ag del sistema Colton è un'acquaporina, cioè un trasportatore di acqua; Kidd è un trasportatore di urea)

3. Recettori e molecole di adesione cellulare

4. Enzimi (sistema ag Kell, ecc.)

5. Proteine ​​strutturali (sistemi AG MNS, Herbich - glicoforine contenenti una grande quantità di acidi sialici, che forniscono una carica negativa degli eritrociti)

Antigeni dei globuli rossi:

1. antigeni eterofili presenti in molte specie di animali e batteri;

2. antigeni non specifici o specie-specifici non riscontrati in altre specie animali; ma contenuto nei globuli rossi di tutte le persone;

3. antigeni specifici o di gruppo: isoantigeni contenuti nei globuli rossi di alcuni individui e assenti in altri. Nella trasfusiologia valore più alto hanno sistemi ABO e Rh.

Il sangue di ogni persona appartiene ad uno dei 4 gruppi del sistema AB0, a seconda della presenza degli antigeni A e B sugli eritrociti e dei corrispondenti anticorpi-agglutinine naturali anti-A e anti-B verso l'antigene mancante.

Sono presenti: 0 (I); 0A,AA(II); 0B, BB(III); AB(IV)

Esistono diversi tipi di antigeni A - A1, A2, A3, A4 e antigene B: B1, Bx, B3, ecc. Allo stesso tempo, l'intensità delle reazioni con i corrispondenti anticorpi anti-A o anti-B diminuisce progressivamente da ciascuno precedente al successivo. Quindi l'antigene A2 reagisce più debole di A1, ecc. Tra le persone con gruppo sanguigno A(II), la frequenza di rilevamento dell'ipertensione A1 è dell'80% dei casi, per A2 - 15%, altre varianti sono molto meno comuni. Inoltre, circa l'1-8% delle persone con gruppo sanguigno A2(II) e il 25-35% delle persone con gruppo sanguigno A2B(IY) contengono anticorpi A1 (in eccesso) nel sangue, che possono essere di origine naturale o immunitaria. Durante le trasfusioni di sangue possono formarsi anticorpi immunitari contro gli antigeni dei globuli rossi. Ciò crea difficoltà nell'identificazione dei gruppi sanguigni; viene rilevato in un test di compatibilità individuale e richiede la conferma con speciali reagenti monoclonali.

Le persone che hanno anticorpi contro gli antigeni A e B non dovrebbero ricevere trasfusioni di sangue da persone con gli antigeni corrispondenti. Pertanto, i destinatari con gruppo sanguigno I non possono essere trasfusi con sangue di persone di altri gruppi tranne O (I). Gli antigeni di gruppo sono altamente stabili. Si trovano nelle mummie egiziane realizzate prima della nostra era.

Non meno importante in trasfusiologia è il sistema dell'antigene del fattore Rh. Il sistema dell'antigene Rh fu scoperto da Landsteiner e Wiener nel 1940. La differenza principale tra il sistema Rh e il sistema ABO è che il sangue umano contiene solo agglutinogeni in completa assenza di anticorpi come le agglutinine alfa e beta del sistema ABO. Ci sono 5 segni principali di questo sistema: D(RhO), C(rh’), c(hr’), E(rh), e(hr). Questi antigeni, presenti sui globuli rossi in varie combinazioni, formano 27 gruppi del sistema Rh.

L'antigene Rho(D) è il principale del sistema Rh, si trova nei globuli rossi dell'85% delle persone; il restante 15% non ne è affetto; Questo è tipico degli europei. Nella razza mongoloide si trova nel 95%. Normalmente non ci sono anticorpi Rh nel siero; si presentano durante la gravidanza o in seguito a una trasfusione di sangue Rh positivo in una paziente Rh negativa. Le conseguenze della sensibilizzazione al fattore Rh in una donna incinta sono la nascita di bambini con malattia emolitica o morte fetale intrauterina. Se un paziente il cui sangue contiene tali anticorpi viene trasfuso con sangue Rh positivo, si verifica un conflitto Rh con emolisi dei globuli rossi trasfusi. Pertanto, i pazienti Rh (neg) possono essere trasfusi solo con sangue Rh (neg). Inoltre, l'antigene D ha varianti deboli raggruppate D(week) o D(u). La frequenza di queste opzioni non supera l'1%. I donatori che hanno questi antigeni dovrebbero essere considerati Rh positivi, poiché la trasfusione del loro sangue in pazienti Rh negativi può portare a sensibilizzazione e causare gravi reazioni trasfusionali in pazienti sensibilizzati. Ma i riceventi che hanno l’antigene D(u) dovrebbero essere considerati Rh negativi e possono essere trasfusi solo con sangue Rh negativo, perché l'antigene D normale può portare alla sensibilizzazione del paziente con sviluppo di conflitti come nei soggetti Rh negativi.

Gli antigeni eritrocitari del sistema Rh Kell, Kidd, Duffy e altri portano relativamente raramente alla sensibilizzazione e acquisiscono significato pratico durante trasfusioni multiple di sangue e gravidanze ripetute

Tra il corpo di una madre Rh negativa che non contiene antigeni D e un feto Rh positivo contenente questo antigene, porta alla malattia emolitica del feto.

Se il feto di una donna Rh (neg.) eredita il padre Rh (+), i suoi antigeni possono entrare nel corpo della madre attraverso la placenta, dove inducono la sintesi di anticorpi Rh, che penetrano nella placenta fetale e provocano la distruzione dei suoi organi. globuli rossi - anemia emolitica del feto.

Durante la gravidanza, gli antigeni Rh entrano nell'organismo della madre solo in piccole quantità e con titoli specifici elevati. non formano anticorpi, quindi durante la prima gravidanza non c'è conflitto in una madre Rh(neg). Eccezione: infezione, aumento della permeabilità della placenta.

Perché Gli antigeni Rh entrano nel corpo della madre principalmente durante il parto, quindi con ogni gravidanza successiva aumenta la quantità di anticorpi: conflitto Rh.

Per prevenire il conflitto Rh (neg), alle donne prima del parto viene somministrato un siero che blocca gli antigeni Rh e annulla la produzione di anticorpi anti-Rh.

Il conflitto Rh può verificarsi anche durante una trasfusione di sangue, se al paziente Rh (neg) viene trasfuso sangue Rh (+) - sintesi di a/res. anticorpi e con trasfusioni ripetute - Conflitto Rh.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-64.jpg" alt="L'indicazione per le trasfusioni di scambio è un livello di bilirubina sierica > 340 µmol/l . In presenza di">!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-1.jpg" alt="> Esami di laboratorio immunoematologici">!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-2.jpg" alt=">Gli antigeni (Ag) degli eritrociti umani sono formazioni strutturali situate sul esterno alla superficie della membrana eritrocitaria, che ha"> Антигены (Аг) эритроцитов человека – структурные образования, расположенные на внешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающие способностью взаимодействовать с соответствующими антителами (Ат) и образовывать комплекс антиген-антитело. Антигены эритроцитов - передаются по наследству, - обладают иммуногенностью (вызывают выработку Ат), - взаимодействуют с Ат, образуя комплекс Аг-Ат. При попадании в организм Аг, отсутствующего у данного индивида, создаются предпосылки для выработки Ат и развития аллосенсибилизации. Синтез Ат может наблюдаться в ответ на гемотрансфузии или беременность. При последующих гемотрансфузиях может произойти взаимодействие Аг эритроцитов доноров и Ат реципиента in vivo, что приводит к посттрансфузионному осложнению.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-3.jpg" alt=">Negli esseri umani, sono stati trovati 236 Ag, combinati in 29 sistemi sugli eritrociti umani. Ma clinico"> У человека на эритроцитах обнаружено 236 Аг, объединенных в 29 систем. Но клиническая роль антигенов неодинакова. Клиническое значение Аг определяется способностью аллоантител к данным Аг вызывать разрушение эритроцитов в организме реципиента. В связи с этим первостепенное !} significato clinico hanno sistemi Ag AB 0 e Rhesus. Gli alloanticorpi sono anticorpi che hanno specificità per gli antigeni dei globuli rossi che non sono presenti nell'individuo.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-4.jpg" alt="> Gli alloanticorpi sono contenuti nel siero dell'individuo, non interagiscono con i loro possedere antigeni dei globuli rossi, Ma"> Аллоантитела содержатся в сыворотке индивида, не взаимодействуют с собственными антигенами эритроцитов, но взаимодействуют с антигенами эритроцитов других индивидов и могут быть выявлены !} reagenti speciali. Gli anticorpi contro gli antigeni eritrocitari sono naturali (regolari): sono congeniti, presenti nel siero di individui senza storia di trasfusioni di sangue o gravidanze e, molto spesso, sono diretti contro gli antigeni eritrocitari del sistema ABO. Gli anticorpi immunitari (irregolari) vengono prodotti come risultato di uno stimolo immunitario quando un antigene che non è presente nell'ospite entra nel corpo (ad esempio, durante una trasfusione di sangue incompatibile o una gravidanza)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-5.jpg" alt="> Dalla capacità di causare emolisi durante trasfusioni di sangue incompatibili e distruzione di globuli rossi fetali"> По способности вызывать гемолиз при несовместимых гемотрансфузиях и разрушение эритроцитов плода при иммунологическом конфликте мать-плод, антитела подразделяются на имеющие и не имеющие клиническое значение. Клиническое значение антител – это способность антител вызывать гемолитические посттрансфузионные осложнения или гемолитическую болезнь новорожденного. Клиническое значение имеют естественные антитела системы АВ 0. Среди иммунных антител клиническое значение имеют антитела, активные в прямом антиглобулиновом тесте при +37 о. С (в эту группу входят антитела системы Резус).!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-6.jpg" alt="> Antigeni del sangue AB 0. Uno dei principali sistemi antigenici in immunoematologia"> Антигены крови АВ 0. Одной из основных систем антигенов в иммуногематологии является система антигенов эритроцитов АВ 0, включающая 4 антигена: А, В, А 1. Правило Ландштейнера: здоровые индивиды имеют в сыворотке АВ 0 -антитела к антигенам, отсутствующим на их эритроцитах. По наличию на эритроцитах антигенов А и В, также присутствию в сыворотках анти-А(α), анти-В(β) антител, различают следующие группы крови:!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-7.jpg" alt="> Gruppi sanguigni Nome accettato in clinica 0(I)"> Группы крови Название, принятое в клинической 0(I) А(II) В(III) АВ(IV) практике Аг на эритроцитах нет А В А+В Ат в сыворотке Анти-А(α) Анти-В(β) Анти-А(α) нет (изогемагглютинины) Анти-В(β) Международное название 0 А В АВ «Старое» название с указанием соответствующих Ат 0αβ(I) Аβ(II) Вα(III) АВо(IV) в сыворотке Частота встречаемости (%) в 35 33 23 9 Санкт-Петербурге!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-8.jpg" alt="> Secondo le regole internazionali, vengono utilizzate solo le lettere A, B designare i gruppi sanguigni,"> По международным правилам для обозначения групп крови используются только буквы А, В, АВ и 0 и не применяется цифровое обозначение (I), (III), (IV). В настоящее время принято следующее обозначение для антител АВ 0: анти-А, анти-В антитела (взамен α - и β–изогемагглютининов).!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-9.jpg" alt=">Gli antigeni del sistema 0 AB si sviluppano sui globuli rossi fetali, ma si completano maturazione degli antigeni di questo sistema"> Антигены системы АВ 0 развиваются на эритроцитах плода, однако полное созревание антигенов данной системы происходит только через несколько месяцев после рождения. У взрослых на эритроцитах могут присутствовать следующие антигены системы АВ 0: А, В. Кроме того, на эритроцитах присутствует антиген Н (не входит в систему АВО, а принадлежит системе Н). Антиген Н является предшественником антигенов А и В, в большом количестве обнаруживается на поверхности эритроцитов, принадлежащих к группе крови 0 (I). АВН антигены могут присутствовать в растворенном виде в различных секреторных жидкостях организма. Индивиды, чьи жидкие секреты несут групповые вещества, называются выделителями (78% лиц). 22% людей имеют антигены только на эритроцитах и называются невыделителями.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-10.jpg" alt=">U persone sane Si nota l'eterogeneità dell'antigene A. Esistono diversi sottogruppi dell'antigene A: A 1,"> Nelle persone sane si nota l'eterogeneità dell'antigene A. Esistono diversi sottogruppi dell'antigene A: A 1, A 2, Am, Ax, Aend. , Ael, Ay, ecc. Tra gli europei, l'80% degli individui appartenenti al gruppo sanguigno A (II) ha il sottogruppo A 1, il restante 20% appartiene al sottogruppo A 2. L'antigene A 2 non esiste separatamente, ma è una variante dell'antigene A. Le differenze tra gli antigeni A 1 e A 2 sono qualitative e quantitative. Il siero di alcuni individui A 2 B contiene agglutinine anti-A 1. Varianti molto rare e deboli dell'antigene A sono Am , Ax, Aend, Ael, Ay, ecc., che sono metodi tradizionali utilizzati nei laboratori sanitari, non vengono rilevati Per rilevare l'antigene A 2 nel ricevente, insieme al consueto reagente che rileva l'antigene A sugli eritrociti, a. viene utilizzato un reagente contenente anticorpi solo contro gli antigeni A 1. L'assenza di una reazione degli eritrociti del paziente con un reagente contenente anticorpi contro l'antigene A 1 indica la presenza di antigeni A2 sui globuli rossi di un individuo.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-11.jpg" alt=">Conclusione sulla determinazione del gruppo sanguigno nelle persone con controllo dell'antigene A 2"> Заключение об определении группы крови у лиц, имеющих А 2 -антиген Контро Реагент Заключение об ль исследовании группы Анти- В крови А А 1 - + + - А(II) - + - А 2(II)подгрупповая - + + АВ(IV) - + - + А 2 В(IV)подгрупповая!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-12.jpg" alt=">Esistono anche forme deboli di antigene B: B 3, Bx, Bw, Bm, ma estremamente raro"> Слабые формы В антигена также существуют: В 3, Вx, Вw, Вm, но крайне редки среди населения Европы. Чаще встречаются среди населения Китая.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-13.jpg" alt="> Caratteristiche degli anticorpi anti-A e anti-B Anticorpi naturali anti - A, anti-B"> Характеристика анти-А и анти-В антител Естественные антитела анти-А, анти-В принадлежат к иммуноглобулинам класса М (Ig. M). Выработанные в процессе иммунизации А и В антигенами анти-А и анти-В антитела являются иммунными и принадлежат к иммуноглобулинам класса G (Ig. G). Анти-А и анти-В антитела в сыворотках большинства людей представляют собой смесь естественных и иммунных антител (смесь Ig. M и Ig. G). Они вырабатываются в результате полигенного воздействия группоспецифических субстанций А и В на организм человека: инфекционные заболевания, прививки, потребление продуктов животного и !} origine vegetale, trasfusioni di sangue estraneo, gravidanza eterospecifica.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-14.jpg" alt=">Determinazione del gruppo sanguigno mediante metodo incrociato (utilizzando reagenti contenenti anti- Anticorpi A e anti-B"> Определение группы крови перекрестным способом (при помощи реагентов, содержащих анти-А и анти-В антитела и стандартных эритроцитов) Заключение о групповой принадлежности делают на основании наличия или отсутствия антигенов А и В на эритроцитах, а также присутствия анти-А и анти-В антител в сыворотке(плазме) исследуемой крови. Для исследования используют стандартные эритроциты групп крови 0(I) А(II), В(III), АВ(IV) и цоликлоны – растворы, содержащие моноклональные антитела анти-А, анти-В и анти-А+В. Перед исследованием маркируют пластинку, указывая № исследования, Ф. И. О. пациента и названия реагентов.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-15.jpg" alt=">Valutazione dei risultati della determinazione dei gruppi sanguigni utilizzando la sezione trasversale metodo Colicoloni Standard"> Оценка результатов определения групп крови перекрестным способом Цоликлоны Стандартные Исследуемая эритроциты !} Sangue anti-A Anti-B Anti- appartiene a 0 A Nel gruppo A+B - - + + 0(I) + - - + A(II) - + + - B(III) + + + - - - AB(IV)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-16.jpg" alt=">Attualmente, per determinare contemporaneamente il gruppo ABO e l'affiliazione Rh, e anche per scrivere"> В настоящее время для одновременного определения группы АВО и резус-принадлежности, а также для типирования антигенов эритроцитов используются идентификационные карты ID- карты Диа. Мед Выявление антигенов эритроцитов в ID-карте осуществляется методом агглютинации в геле. При добавлении исследуемых эритроцитов в пробирку, содержащую, например, анти-А, при наличии на эритроцитах антигена А, происходит реакция агглютинации. Образующиеся агглютинаты остаются в верхней части пробирки, т. к. не проходят через гель из-за !} grande taglia complessi AG+AT formati (risultato positivo). In assenza di antigene nel campione da analizzare, i globuli rossi non formano agglutinati con l'antisiero, passano facilmente attraverso il gel e si depositano sul fondo della provetta (risultato negativo)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-17.jpg" alt=">Cause di errori nello studio del gruppo sanguigno 1. Errori tecnici"> Cause di errori nello studio del gruppo sanguigno 1. Errori tecnici Etichettatura errata Ordine errato di applicazione dei reagenti, registrazione errata dei risultati Violazione della tecnica di ricerca (mancato rispetto delle istruzioni‼): a) rapporto errato tra reagenti e sangue analizzato ( siero), b) utilizzo di reagenti di bassa qualità (scaduti, conservati senza refrigerazione, ecc.) c) riduzione del tempo di osservazione della reazione, d) conduzione dello studio a temperature superiori a +250 C (può verificarsi una reazione falsa negativa) o inferiore a 150 C (è possibile l'agglutinazione a freddo)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-18.jpg" alt="> 2. Errori causati da caratteristiche individuali antigeni eritrocitari AB 0 Numero e densità "> 2. Errori causati dalle caratteristiche individuali degli antigeni eritrocitari AB 0 Il numero e la densità dei determinanti antigenici sugli eritrociti è diverso ed è una proprietà ereditaria. Variante antigenica Numero di determinanti antigenici sull'eritrocita A 1.810.000 - 1.170.000 A 2 160 000 - 440 000 A 3 40 600 – 118 000 Am 100 – 1 900 Quanto più determinanti antigenici sono presenti sui globuli rossi, tanto più attivamente reagiscono con gli anticorpi.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-19.jpg" alt=">Gli antigeni dei gruppi sanguigni sono influenzati da ambiente e può essere modificato quando cambia. Indebolimento "> Gli antigeni dei gruppi sanguigni sono influenzati dall'ambiente e possono essere modificati quando questo cambia. Nei pazienti è stato descritto un indebolimento dell'espressione o la completa perdita dei determinanti antigenici sugli eritrociti malattie oncologiche e leucemia. Si osserva anche un cambiamento negli antigeni AB 0 processi infettivi natura virale o batterica. Sono stati descritti casi di formazione di antigene B invece di antigene A sulla superficie dei globuli rossi in individui del gruppo A (II) sotto l'influenza di enzimi batterici. L'attività dell'antigene B acquisito è significativamente inferiore a quella dell'antigene B normale, per cui l'antigene B acquisito non è in grado di agglutinarsi con i propri anticorpi anti-B.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-20.jpg" alt="> Si nota che l'espressione degli antigeni A e B sugli eritrociti è correlato con"> Отмечено, что выраженность А и В антигенов на эритроцитах коррелирует с применением !} farmaci ormonali, e anche cambiamenti durante la gravidanza. L'analisi degli errori mostra che molto spesso gli errori sono causati dalla mancata rilevazione dell'antigene A 2 nel gruppo sanguigno A (II). Ciò porta alla sua errata identificazione come 0(I). Nel gruppo A 2 B(IV), la mancata rilevazione dell'antigene A 2 porta alla sua errata identificazione come gruppo B(III).

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-21.jpg" alt="> Natura delle difficoltà nella determinazione dei gruppi sanguigni Deviazioni dalla normale agglutinazione"> Характер затруднений при определении групп крови Отклонения от обычной агглютинации могут выражаться в отсутствии специфической агглютинации или наличии неспецифической агглютинации, а также несовпадением результатов исследования с цоликлонами и стандартными эритроцитами. Чаще всего затруднения связаны с присутствием в исследуемой крови аутоантител на эритроцитах или аллоантител в сыворотке. Ауто- и аллоантитела могут вступать в реакцию агглютинации с соответствующими антигенами и искажать результаты АВ 0 типирования. Алло- и аутоантитела бывают специфическими (взаимодействующими с соответствующими антигенами эритроцитов с образованием комплекса Аг+Ат) и неспецифическими (реакция агглютинации происходит не за счет образования комплекса Аг+Ат, а при взаимодействии иных химических структур, представленных на эритроцитах)!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-22.jpg" alt=">1. Agglutinazione a freddo specifica e non specifica. Abs freddo specifico e non specifico , presente"> 1. Специфическая и неспецифическая холодовая агглютинация. Специфические и неспецифические холодовые Ат, присутствующие в сыворотке крови исследуемого образца, могут взаимодействовать со стандартными эритроцитами при использовании перекрестного способа определения групп крови. Показателем присутствия таких Ат является агглютинация сыворотки пациента в эритроцитами 0(I). Неспецифические холодовые АТ присутствуют в сыворотках больных онкологическими и гематологическими заболеваниями. Аутоантитела обнаруживаются у больных аутоиммунными гемолитическими анемиями и тромбоцитопениями. Неспецифическая агглютинация исследуемой крови может быть обусловлена присутствием в сыворотке патологических белков (гипергаммаглобулинемии).!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-23.jpg" alt="> 2. Bassa attività anticorpi anti-A e/o anti-B (isoemoagglutinine α e β) del paziente."> 2. Bassa attività degli anticorpi anti-A e/o anti-B (isoemoagglutinine α e β) del paziente. Assente o debole reazione del siero del paziente con i corrispondenti globuli rossi standard Osservata: Nei neonati Negli anziani In presenza di malattie oncologiche ed ematologiche.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-24.jpg" alt="> 3. Agglutinazione a freddo degli eritrociti del paziente con sieri standard."> 3. Холодовая агглютинация эритроцитов пациента со стандартными сыворотками. Обусловлена присутствием на исследуемых эритроцитах холодовых аутоантител. Последние активны при t 20 о. С и не имеют клинического значения, однако затрудняют проведение исследования. Наблюдаются полиагглютинабельность и положительный аутоконтроль. Полиагглютинабельность – способность эритроцитов агглютинировать со всеми образцами сывороток, не зависимо от их АВ 0 принадлежности. Положительный аутоконтроль – агглютинация эритроцитов в собственной сыворотке больного.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-25.jpg" alt=">4. Presenza di antigene A 2 nel sangue analizzato Se presente nel paziente nei globuli rossi"> 4. Присутствие в исследуемой крови А 2 антигена При наличии у пациента в эритроцитах антигена А 2 в сыворотке может дополнительно содержаться экстра агглютинин анти А 1 (α 1), взаимодействующий со стандартными эритроцитами группы крови А(II) – см. следующую таблицу. Частота встречаемости экстра агглютининов в группе крови А 2(II) составляет ≈2%, а в группе крови А 2 В(IV) – 30%. Чаще экстра агглютинины принадлежат к Ig. M, активны при комнатной температуре, при нагревании планшеты до +38 -40 о. С исчезают. Считается, что анти-А 1 антитела (экстра агглютинины), присутствующие в крови реципиентов, не выявляются при 37 о. С, поэтому не имеют клинического значения. Однако показана возможность выработки анти-А 1 антител (принадлежащих Ig. G и поэтому имеющих клиническое значение) у реципиентов, в анамнезе которых были трансфузии крови, содержащей А 1 антиген эритроцитов.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-26.jpg" alt=">Determinazione del gruppo sanguigno mediante metodo incrociato nelle persone con A o A"> Определение группы крови перекрестным методом у лиц, имеющих А или А 2 антиген цоликлоны Стандартные Группа крови эритроциты Анти анти Анти 0 А В -А -В А+В А 1 + - + + - - + А(II) + - - - + А 2(II) подгрупповая + + + + - - - АВ(IV) + + + - - - - А 2 В(IV) подгрупповая!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-27.jpg" alt=">Determinazione del gruppo sanguigno mediante metodo incrociato in persone con antigene A 2"> Определение группы крови перекрестным методом у лиц, имеющих А 2 антиген и экстра агглютинины анти-А 1 цоликлоны Стандартные Группа крови эритроциты Анти анти Анти 0 А В -А -В А+В А 1 + - + + - - + А(II) + - - - + А 2(II) подгрупповая + - - + А 2(II) подгрупповая + с экстра агглютининами анти А 1 + + - - - АВ(IV) + + + - - - - А 2 В(IV) подгрупповая + + + - - А 2 В(IV) подгрупповая + с экстра агглютининами анти А 1!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-28.jpg" alt="> Regole da seguire quando si studia il gruppo sanguigno 1. Utilizzare per ricerca"> Правила, которые надо соблюдать при исследовании группы крови 1. Использовать для исследования реактивы, в качестве которых нет сомнения 2. Исследование проводить перекрестным способом 3. Кровь для исследования брать до проведения больному гемотрансфузий и переливания плазмозамещающих растворов 4. Обращать внимание на диагноз 5. Проводить ежедневный контроль качества применяемых реактивов!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-29.jpg" alt="> Antigeni del sistema Rhesus Il sistema degli antigeni eritrocitari è stato scoperto in 1940 di Landsteiner"> Антигены системы Резус Система антигенов эритроцитов была открыта в 1940 г. Ландштейнером и Винером и насчитывает в настоящее время 48 антигенов. Среди антигенов системы резус наибольшее клиническое значение имеет антиген D. Обладая выраженными иммуногенными свойствами, антиген D в 95% случает является причиной гемолитической болезни новорожденных при несовместимости матери и плода, а также !} causa comune gravi complicanze post-trasfusionali. Gli individui che hanno l'antigene D sono classificati come Rh positivi, mentre gli individui che non hanno l'antigene D sono classificati come Rh negativi.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-30.jpg" alt="> Ereditarietà dell'antigene D Madre Rh+ Padre Rh+ D/d"> Наследование антигена D Мать Rh+ Отец Rh+ D/d DD (Rh+) Dd (Rh+) dd(Rh-)!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-31.jpg" alt="> Il complesso di geni che codificano per il sistema Rhesus è costituito da 3 determinanti antigenici :"> Комплекс генов, кодирующих систему Резус, состоит из 3 -х антигенных детерминант: D или отсутствие D («d»), С или с, Е или е в различных комбинациях. Существование антигена d не подтверждено, однако символ d применяется в иммуногематологии для обозначения факта отсутствия антигена D на эритроцитах.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-32.jpg" alt="> I fenotipi più comuni del sistema Rh Il concetto di fenotipo si riferisce a gli antigeni presenti"> Наиболее часто встречаемые фенотипы системы резус Понятие фенотип обозначает антигены, присутствующие на эритроцитах индивида (по определению Международного общества переливания крови) фенотип Rh Частота реципиента встречаемости Cc. De Rh+ 34% CDe Rh+ 19. 5% c. DEe Rh+ 12% Cc. DEe Rh+ 14% ce Rh- 13% Cce Rh- 1% c. Ee Rh- 0. 1%!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-33.jpg" alt="> Varietà dell'antigene D L'antigene D è costituito da unità strutturali– epitopi. "> Varietà dell'antigene D L'antigene D è costituito da unità strutturali - epitopi. I globuli rossi di individui sani esprimono tutti gli epitopi dell'antigene D (antigene D normalmente espresso). Globuli rossi con espressione ridotta dell'antigene D (numero ridotto di determinanti antigenici) causa D debole. Se il numero di determinanti antigenici non è ridotto, ma differiscono qualitativamente, allora tale antigene D viene chiamato variante (variante D).

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-34.jpg" alt=">Attualmente, sono accettate le seguenti tattiche per determinare lo stato Rh dei pazienti - potenziali destinatari: persone,"> В настоящее время принята следующая тактика определения резус-принадлежности для пациентов - потенциальных реципиентов: лица, имеющие D слабый и D вариантный расцениваются как резус-отрицательные. Применяемые в широкой !} pratica clinica i reagenti per la valutazione del fattore Rh (colicloni anti-D) rivelano il fattore Rh D debole e la variante D negativa. Prima, cioè prima dell'inizio ampia applicazione i colicloni anti-D, D deboli e D varianti sono stati definiti come Du, tali pazienti sono stati trasfusi con R-mass Rh-negativo.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-35.jpg" alt=">Cause di errori nella determinazione del sangue Rh 1. Presenza di sangue rosso cellule"> Причины ошибок при определении резус- принадлежности крови 1. Наличие на исследуемых эритроцитах аутоантител (результат сомнительный, слабоположительный). Аутоантитела связываются с компонентами реагента: полюглюкином, желатином, альбумином и п. т.) Действия: провести контроль с реактивом без анти-D антител (поставляется производителем). 2. Ослабление активности антигенов системы Резус при заболеваниях. Наблюдается расхождение с предыдущими определениями резус-фактора у !} di questo paziente: un'appartenenza Rh+ precedentemente definita viene definita rh- e viceversa.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-36.jpg" alt="> Risultato falso negativo: 1. Violazione della procedura (rapporto errato di reagenti, tempo di non conformità e"> Ложноотрицательный результат: 1. Нарушение методики (неправильное соотношение реактивов, несоблюдение времени и температуры и т. д.) 2. Использование некачественных реактивов (истекший срок годности, нарушение условий хранения, транспортировки и т. д.) 3. Абсорбция на исследуемых эритроцитах большого количества аутоантител может препятствовать взаимодействию D антигена с анти-D антителами реактива.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-37.jpg" alt="> Rh(-) rispetto al positivo precedentemente determinato"> Rh(-) по сравнению с ранее определенной положительной контроль - контроль + !} Reazione indiretta ripetere lo studio di Coombs con il test dei globuli rossi lavati prova positiva controllo+ Rh+ negativo possibile Test controllo negativo (-) presenza Possibile presenza di autoanticorpi Rh (-), opzioni D esaminate nel gel Dia. Tesoro, fai un test di Coombs diretto con gli anti-Ig. G

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-38.jpg" alt="> Rh(+) rispetto al controllo negativo precedentemente determinato –"> Rh(+) по сравнению с ранее определенной отрицательной контроль – контроль + Rh+ повторить исследование с отмытыми эритроцитами Тест контроль+ отрицательный возможно контроль (-) присутствие Rh (-) аутоантител, исследовать в геле Диа. Мед, поставить прямой тест Кумбса с анти-Ig. G!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-39.jpg" alt="> Gli anticorpi contro gli antigeni del sistema Rhesus sono immuni e compaiono come risultato di trasfusioni"> Антитела к антигенам системы Резус являются иммунными и появляются в результате трансфузий эритроцитов доноров, содержащих антигены, отсутствующие у реципиентов, а также при иммунизации матери эритроцитами плода. Чаще всего антитела к антигенам эритроцитов системы резус являются Ig. G, поэтому не могут вступать в прямую агглютинацию с эритроцитами in vitro. Для проявления агглютинации необходимо добавить усилители агглютинации: желатин, альбумин, полиглюкин или другие коллоиды; провести центрифугирование, создать оптимальный !} regime di temperatura(+37 -48°C), aggiungere enzimi proteolitici. Più spesso, nel sangue dei donatori e dei riceventi vengono rilevati anticorpi anti-D e meno spesso anticorpi anti-E. L'immunogenicità degli antigeni del sistema Rhesus è presentata come segue: D>c>E>C>e.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-40.jpg" alt=">Ig. G è composto da 4 sottoclassi: Ig. G 1, 2, IG."> Ig. G состоит из 4 -х подклассов: Ig. G 1, Ig. G 2, Ig. G 3, Ig. G 4. Подклассы существенно отличаются по своим свойствам in vivo: по способности активировать комплемент, взаимодействовать с Fc-рецепторами фагоцитирующих клеток, вызывать гемолиз эритроцитов. Ig. G 1 и Ig. G 3 вызывают гемолиз и ГБН. Ig. G 2 и Ig. G 4 не вызывают гемолиз и ГБН. Ig. G антитела к антигенам эритроцитов системы Резус принадлежат, в основном, к субклассу Ig. G 1 и Ig. G 3. У некоторых лиц антитела являются частично Ig. G 2 и Ig. G 4.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-41.jpg" alt="> Il sistema antigene dei globuli rossi Kell Antigen K è stato scoperto da Coombs in 1946."> Cистема антигенов эритроцитов Келл Антиген К был открыт Кумбсом в 1946 г. при исследовании гемолитической болезни новорожденного. Сейчас известно 24 антигена эритроцитов системы Келл. Частота встречаемости 7 - 9%. Антитела ко всем антигенам эритроцитов системы Келл являются клинически значимыми, вызывают ПГО (посттрансфузионные гемолитические осложнения) и ГБН (гемолитическую болезнь новорожденного). Большинство образцов антител принадлежит к Ig. G субкласса Ig. G 1. Трансфузионные реакции, вызванные К антигеном, иногда приводят к !} esito fatale. L'emolisi degli eritrociti è extravascolare. L'HDN causata dagli anticorpi anti-K è grave ed è caratterizzata da anemia fetale piuttosto che da emolisi dei globuli rossi. Nei casi più gravi si verificano la morte intrauterina del feto e la nascita di feto morto.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-42.jpg" alt="> Complicazioni dopo trasfusioni di sangue Le reazioni e le complicanze post-trasfusionali sono chiamate conseguenze indesiderabili che si verificano nel ricevente"> Complicanze dopo trasfusioni di sangue Le reazioni e le complicazioni post-trasfusionali sono conseguenze indesiderate che si verificano nel ricevente dopo una trasfusione. Le reazioni post-trasfusionali non causano compromissioni gravi e a lungo termine delle funzioni corporee. Le complicazioni post-trasfusionali sono acuto manifestazioni cliniche mettendo in pericolo la vita del paziente. Quando si eseguono trasfusioni di sangue, i riceventi possono manifestare reazioni e complicazioni di tipo immunologico e non immunologico. Le complicazioni di tipo immunologico sono causate da un conflitto immunologico tra i componenti del sangue del donatore e del ricevente (basato sulla reazione Ag+Ab). Le complicazioni non immunologiche sono causate da molte ragioni: trasfusioni di globuli rossi emolizzati, trasfusione di sangue infetto, disordini metabolici, violazione della tecnica trasfusionale, ecc.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-43.jpg" alt=">Complicanze e reazioni immediate si verificano al momento della trasfusione o dopo diverse ore dopo la trasfusione."> Немедленные осложнения и реакции возникают в момент трансфузии или через несколько часов после трансфузии. Отсроченные осложнения возникают через несколько дней, месяцев или лет после трансфузии.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-44.jpg" alt=">Classificazione delle complicanze post-trasfusionali di tipo immunologico IMMEDIATO RITARDATO Emolitico"> Классификация посттрансфузионных осложнений иммунологического типа НЕМЕДЛЕННЫЕ ОТСРОЧЕННЫЕ Гемолитические Гемолитические Фебрильные негемолитические Аллоиммунные Крапивница Тромбоцитарно-рефрактерные Анафилактические Болезнь «трансплантат против хозяина» Острая !} insufficienza polmonare Immunomodulatori legati alle trasfusioni

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-45.jpg" alt="> L'emolisi immediata e ritardata sono causate dalla distruzione del sangue rosso del donatore cellule da parte degli anticorpi riceventi. La frequenza della post-trasfusione"> Гемолитические немедленные и отсроченные обусловлены разрушением эритроцитов доноров антителами реципиентов. Частота посттрансфузионных гемолитических осложнений от 0, 002% до 0, 2% проведенных гемотрансфузий. Частота посттрансфузионных негемолитических осложнений от 1% до 10% проведенных гемотрансфузий. Фебрильные негемолитические реакции Проявляются подъемом температуры на 10 С и более в течение 8 -24 часов после трансфузии. При диагностике необходимо исключить другие причины подъема температуры (септические реакции, !} raffreddori e così via). Di solito non mettono in pericolo la vita del paziente, si verificano in un caso ogni 130-400 trasfusioni di sangue o nel 20% delle trasfusioni di piastrine. Reazioni allergiche– orticaria Caratterizzata da eruzione cutanea, prurito, solitamente senza febbre. Le reazioni anafilattiche sono rare: una su 20.000-50.000 trasfusioni. Accompagnato da tosse, mancanza di respiro, broncospasmo, a volte può verificarsi una reazione locale sulla pelle e sulle mucose. Sono possibili gravi conseguenze cliniche: shock, morte.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-46.jpg" alt=">Distruzione dei globuli rossi da parte degli anticorpi Inizio e immagine delle manifestazioni di PGO causata dalla trasfusione di globuli rossi di donatore, incompatibile"> Разрушение эритроцитов антителами Начало и картина проявлений ПГО, вызванных переливанием донорских эритроцитов, несовместимых по антигенам системы АВ 0, Резус, Келл и др. зависит от механизма их разрушения: в кровяном русле (внутрисосудистый гемолиз) – при гемотрансфузии, несовместимой по системе АВ 0, Келл и др. в тканях (внесосудистый гемолиз) – например, при гемотрансфузии, несовместимой по системе Резус.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-47.jpg" alt="> Emolisi intravascolare L'intensità della distruzione dei globuli rossi dipende da: volume di trasfuso"> Внутрисосудистый гемолиз Интенсивность разрушения эритроцитов зависит от: Объема перелитых эритроцитов, Уровня содержания Ат. !} Alto livello porterà ad una rapida emolisi fino all'emolisi completa entro 1 ora. Un ricevente con un basso livello di Ab può inizialmente non avere segni clinici, ma dopo pochi giorni il livello di Ab aumenterà e ci saranno segni di complicanza emolitica, Proprietà funzionali e specificità degli Ab (avidità), Numero di determinanti antigenici sul globuli rossi, livello dei componenti del complemento nel sangue del ricevente. La capacità di un anticorpo di fissare il complemento è determinata dalla presenza di una zona sulle catene pesanti delle immunoglobuline che interagisce con il primo componente del complemento. Tale zona è presente in Ig. M e alcune sottoclassi di Ig. G (Ig. G 1 e Ig. G 3). Tuttavia, gli anticorpi Rh, essendo immunoglobuline di classe M e G, a causa delle peculiarità della propria struttura, non sono in grado di fissare il complemento e quindi non provocano emolisi intravascolare dei globuli rossi.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-48.jpg" alt="> Implicazioni cliniche emolisi intravascolare: 1. Caduta rapida"> Conseguenze cliniche dell'emolisi intravascolare: 1. Caduta rapida pressione sanguigna 2. Sindrome emorragica(sindrome DIC) Segni di laboratorio: 1. Emoglobinemia. Si verifica a causa dell'emolisi dei globuli rossi. Confrontare la colorazione del campione di siero o plasma di un paziente raccolto prima della trasfusione con un campione raccolto dopo la trasfusione. Escludere l'emolisi meccanica causata da tecniche di raccolta o preparazione del sangue inadeguate (centrifugazione). 2. Emoglobinuria. L’emoglobina libera è presente nelle urine, ma la mioglobina libera è assente. 3. Bilirubinemia. 5-7 ore (a volte 1 ora) dopo l’emolisi, nel plasma del ricevente appare un prodotto della degradazione dell’emoglobina, la bilirubina. Si sviluppa ittero. Con la normale funzionalità epatica, il livello di bilirubina ritorna normale dopo 24 ore 4. Sviluppo di insufficienza renale acuta (urea, creatinina, potassio).

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-49.jpg" alt="> Distruzione extravascolare dei globuli rossi Trasfusione di sangue incompatibile a destinatari che hanno anticorpi che non fissano il complemento (anticorpi"> Внесосудистое разрушение эритроцитов Переливание несовместимой крови реципиентам, имеющим антитела, не фиксирующие комплемент (антитела к антигенам системы Резус), вызывает внесосудистое разрушение эритроцитов: Антитела адсорбируются на несовместимых эритроцитах Комплекс Аг+Ат распознается Fc-рецепторами клеток ретикуло- эндотелиальной системы (моноцитов, макрофагов) Фагоцитоз Внутритканевый гемолиз Процесс происходит в селезенке (преимущественно) и в печени. Интенсивность гемолиза зависит от: Объема перелитых эритроцитов Количества антигенных детерминант на эритроцитах Концентрации антител у реципиента Активности макрофагов в связывании комплекса Аг+Ат!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-50.jpg" alt="> Cause di emoglobinemia nell'emolisi extravascolare Parte dei globuli rossi che trasportano complesso"> Причины гемоглобинемии при внесосудистом гемолизе Часть эритроцитов, несущих комплекс Аг+Ат не взаимодействует с макрофагами и возвращается в сосудистое русло, где подвергается лизису. Fc-рецепторы селезенки перенасыщаются, снижается способность утилизовывать гемоглобин. Последний попадает в кровяное русло. NK-лимфоциты, продуцирующие перфорины, эффективно разрушают эритроциты без участия комплемента. Этот процесс стимулируют анти-D антитела, принадлежащие к Ig. G 1 (доказано in vitro). При большой концентрации Ат в сыворотке реципиента, эритроциты, покрытые анти-D, лизируются моноцитами в !} letto vascolare. Il processo è stimolato dalle Ig. G3.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-51.jpg" alt=">Conseguenze cliniche dell'emolisi extravascolare: come per l'emolisi intravascolare, Ma"> Клинические последствия внесосудистого гемолиза: Такие же, как при внутрисосудистом, но менее тяжелые: подъем температуры, озноб. ДВС и почечная недостаточность развиваются редко. Осложнения возникают через 1 час или несколько часов после трансфузии и проявляются в виде анемии, иктеричности склер и !} pelle, ingrossamento del fegato, della milza, aumento della bilirubina sierica, talvolta emoglobinuria, nessun aumento dei livelli di emoglobina dopo le trasfusioni.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-52.jpg" alt="> Reazioni emolitiche trasfusionali ritardate (DTHR) Si verificano in riceventi sensibilizzati"> Отсроченные трансфузионные гемолитические реакции (ОТГР) Возникает у реципиентов, сенсибилизированных эритроцитарными антигенами (анти-с, анти-Е, анти-С, анти-К и др.) при предшествующих трансфузиях или беременностях. Сенсибилизация приводит к длительному существованию лимфоцитов памяти. Уровень циркулирующих антител может снижаться до невыявляемости, но повторная реиммунизация (например, при переливании R-массы) приводит к быстрому иммунному ответу и повышению титра антител в сыворотке. Концентрация аллоантител в плазме реципиента постепенно повышается и достигает пика на 10 -15 день после трансфузии. Интенсивность гемолиза пропорциональна нарастающей концентрации антител. Наибольший гемолиз наступает в среднем на 5 - 8 день после трансфузии, но может быть и через 1 месяц.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-53.jpg" alt="> Le reazioni emolitiche trasfusionali ritardate (DTHR) sono rare"> Отсроченные трансфузионные гемолитические реакции (ОТГР) встречаются редко и распознаются плохо. Клинические признаки ОТГР: Снижение содержания гемоглобина (анемия с развитием сфероцитоза) Лихорадка Желтуха Гемоглобинурия Почечная недостаточность (редко) Лабораторная диагностика: В образце крови реципиента, взятом после трансфузии, выявляются слабоактивные аллоантитела и аутоантитела на эритроцитах. Прямая реакция Кумбса положительна до полного выведения эритроцитов донора из организма реципиента.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-54.jpg" alt="> I test di laboratorio per PHO (complicanze emolitiche post-trasfusione) rivelano in il destinatario:"> Лабораторные исследования при ПГО (посттрансфузионных гемолитических осложнениях) выявляют у реципиента: Гемоглобинемию Гемоглобинурию Гипербилирубинемию (!} bilirubina indiretta) Diminuzione dell'ematocrito Riduzione o assenza di aptoglobina (proteina del plasma sanguigno che lega specificamente l'emoglobina, proteina della fase acuta) Presenza di anticorpi contro gli antigeni eritrocitari nel siero Positivo diretto test dell'antiglobulina(test di Coombs diretto) Per lo studio è necessario prelevare campioni di sangue del ricevente prima e dopo la trasfusione (per valutare i livelli di emolisi, bilirubina e aptoglobina). La tipizzazione di un campione dopo la trasfusione di sangue non è informativo, perché contiene globuli rossi del donatore.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-55.jpg" alt="> Per identificare la causa della PGE: 1. Ricontrollare il gruppo e Donatore e ricevente di affiliazione Rh"> Для выявления причины ПГО: 1. Перепроверить групповую и резус-принадлежность донора и реципиента (в образце крови, взятом до трансфузии) 2. Поставить пробу на индивидуальную совместимость крови донора и сыворотки пациента (взятой до трансфузии) обычным методом и с использованием антиглобулинового теста. 3. Провести исследование антител к антигенам эритроцитов в образцах крови, взятых до и после трансфузии. 4. Выполнить прямой антиглобулиновый тест (прямая реакция Кумбса), выявляющий наличие адсорбированных антител на эритроцитах (в образце крови после трансфузии). Положительная реакция – признак иммунологического конфликта, свидетельствующий об адсорбции антител на несовместимых эритроцитах донора (при условии, что реципиент и донор не имели положительный антиглобулиновый тест до трансфузии).!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-56.jpg" alt="> Malattia emolitica dei neonati Si sviluppa quando la madre ha anticorpi contro antigeni nel il suo sangue"> Гемолитическая болезнь новорожденных Развивается при наличии в крови у матери антител к антигенам эритроцитов плода, способных проходить через плацентарный барьер в кровоток ребенка, взаимодействовать с его эритроцитами, вызывая их гемолиз. Вероятность появления антител у матери зависит от: Фенотипа плода Иммуногенности антигена Объема ТПК (трансплацентарных кровотечений) Иммунологической способности матери к продуцированию Ат Иммунизация женщин может наступить при беременности и во время родов. Для выработки анти-D антител необходимо от 0, 1 до 250 мл D положительных эритроцитов. Увеличение риска ТПК: Токсикоз беременных, наружное исследование, !} Taglio cesareo, separazione manuale della placenta, aborto, amniocentesi, prelievo di sangue fetale.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-57.jpg" alt="> Trasferimento di anticorpi al feto Il trasporto di anticorpi attraverso la placenta è fisiologico: anticorpi"> Перенос антител плоду Транспорт антител через плаценту является физиологическим: антитела матери защищают новорожденного от инфекции, т. к. механизм синтеза иммуноглобулинов у плода не сформирован. Антиэритроцитарные антитела, принадлежащие к Ig. M не вызывают ГБН. Антитела Ig. G (субклассы Ig. G 1 и Ig. G 3) вызывают ГБН. Уровень Ig. G антител и тяжесть ГБН взаимосвязаны. Однако, иногда результаты выявления аутоантител бывают отрицательными при наличии ГБН, т. к. количество Ат, которое необходимо для гемолиза in vivo, может быть гораздо меньшим, чем необходимо для обнаружения антител in vitro в прямом антиглобулиновом тесте. До 24 недель беременности перенос Ig. G медленный, поэтому ГБН до этих сроков наблюдается редко. Уровень переноса Ат на более !} Dopo Il livello di Ig aumenta durante il parto. G del feto diventa massimo, maggiore di quello della madre. Di conseguenza, l'emolisi diventa massima.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-58.jpg" alt=">L'emolisi dei globuli rossi neonati con un trattamento adeguato è un fenomeno passeggero , da dopo la nascita di un bambino"> Гемолиз эритроцитов новорожденного при адекватном лечении – явление проходящее, так как после рождения ребенка прекращается поступление антител от матери. Прямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса) – выявляет антитела матери, фиксированные на эритроцитах плода и новорожденного.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-59.jpg" alt="> HDN causata da incompatibilità materno-fetale per gli antigeni eritrocitari del Rhesus sistema Antigeni globuli rossi"> ГБН, обусловленная несовместимостью мать-плод по антигенам эритроцитов системы Резус Антигены эритроцитов системы Резус хорошо развиты на эритроцитах плода к 30 -45 дням беременности. Антигены эритроцитов системы Резус высокоиммуногенны, даже в малых дозах способны вызывать образование иммунных антител. Среди антигенов эритроцитов системы Резус наиболее иммуногенным является антиген D. За ним по активности следуют с, E, C, e (D> c > E > C > e). Причиной 95% случает тяжелого течения ГБН является антиген D (а также антигены с и Е). Чаще всего антитела к антигенам эритроцитов системы Резус относятся к Ig. G субклассов 1 и 3 (Ig. G 1 и Ig. G 3). Колебания в тяжести ГБ, обусловленной анти-D антителами, различны: 50% новорожденных больны в легкой форме, 25% - требуют активного вмешательства и 25% имеют крайне тяжелое течение, часто погибают внутриутробно.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-60.jpg" alt=">Caratteristiche dello sviluppo del conflitto immunologico madre-feto basato sul rosso antigeni delle cellule del sangue del sistema AB 0 A"> Особенности развития иммунологического конфликта мать-плод по антигенам эритроцитов системы АВ 0 А и В антигены присутствуют в тканях эмбриона уже с 5 - 6 недели беременности. Анти-А и анти-В антитела в сыворотке большинства людей представляют собой смесь естественных и иммунных антител (смесь Ig. M и Ig. G). Образование анти-А и анти-В антител Ig. G класса объясняется иммунизацией А и В подобными антигенами, содержащимися в клеточных стенках бактерий. Вероятно, именно с этим связан более !} percentuale elevata lesioni dei primogeniti affetti da malattia emolitica causata da incompatibilità AB 0. Gli antigeni AB 0 sviluppati precocemente sulla superficie delle cellule progenitrici degli eritrociti, così come in altri tessuti embrionali, sono il bersaglio degli anticorpi Ig materni Anti-A e anti-B. G.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-61.jpg" alt=">THN causato da antigeni AB 0 si sviluppa abbastanza spesso, sebbene la forma grave forma questa malattia si verifica"> ГБН, обусловленная антигенами АВ 0 развивается довольно часто, хотя тяжелая форма этого заболевания встречается редко. !} Questo fatto può essere spiegato da: elevate concentrazioni di antigeni fetali disciolti A e B nei tessuti placentari, nel plasma sanguigno fetale e nel liquido amniotico, che forniscono una significativa inibizione degli anticorpi materni anti-A e anti-B. La struttura degli antigeni A e B nei neonati è diversa da quella degli adulti, quindi i globuli rossi del feto legano una piccola quantità di anticorpi, anche se ce ne sono molti. Il siero delle donne incinte contiene prevalentemente Ig. Gli anticorpi G2 anti-A e anti-B ed i recettori Fc del tessuto placentare legano le Ig in modo più efficiente. G1.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-62.jpg" alt=">Questo fatto spiega perché in alcuni casi un neonato ha una positività diretta test dell'antiglobulina"> Этот факт объясняет, почему в некоторых случаях у новорожденного наблюдается положительный прямой антиглобулиновый тест (ПАГТ), а ГБН отсутствует. С другой стороны, бывают случаи, когда при наличии ГБН прямой АГТ – отрицательный. Это обусловлено присутствием антител анти-А, -В Ig. G 3 субкласса, количество которых может быть ниже, чем уровень, выявляемый с помощью ПАГТ. Прямой тест Кумбса не является информативным при диагностике АВ 0 ГБН. Даже при отрицательном прямом АГТ, элюат с эритроцитов новорожденного активно взаимодействует с А и В эритроцитами доноров.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-63.jpg" alt="> Esame immunoematologico di un neonato per la diagnosi di HDN 1. Determinazione di accessori per sangue di gruppo e rhesus"> Иммуногематологическое обследование новорожденного для диагностики ГБН 1. Определение группы и резус-принадлежности крови новорожденного. 2. Проведение прямого антиглобулинового теста с эритроцитами новорожденного. Положительный результат свидетельствует о присутствии на эритроцитах новорожденного фиксированных аллоантител. 3. Выявление Ig. G антител системы Резус и других клинически значимых групп крови в сыворотке матери и новорожденного. 4. Выявление Ig. G антител анти-А, анти-В в сыворотке крови матери при разногруппности матери и плода по системе АВ 0. 5. Исследование элюата, полученного с эритроцитов новорожденного.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-64.jpg" alt=">L'indicazione per le trasfusioni sostitutive è un livello di bilirubina sierica > 340 µmol / l.Se disponibile"> Показанием к проведению заменных трансфузий служит уровень билирубина сыворотки > 340 мкмоль/л. При наличии !} Segni clinici kernittero le trasfusioni di sangue sostitutive vengono effettuate a livelli di bilirubina più bassi (300 -340 µmol/l). Spesso viene valutato l'aumento orario della bilirubina. L'indicazione alla exsanguinotrasfusione è un aumento della bilirubina > 76,5 µmol/l.

Concetti basilari

Gli eritrociti umani contengono 5 antigeni principali del sistema Rh (D, C, c, E, e), di cui il più immunogenico è l'antigene D - Rh(D). La presenza o l'assenza di questo antigene determina la Rh del sangue: le persone con antigene D appartengono al gruppo dei Rh positivi (tra le persone di razza bianca ce ne sono circa l'85%); le persone che non ce l'hanno sono classificate come Rh negative (rispettivamente circa il 15% di loro).

L'immunogenicità degli altri antigeni (minori) del sistema Rh è molto più bassa e diminuisce nell'ordine: c>E>C>e. La determinazione degli antigeni minori del sistema Rh, di norma, viene effettuata quando sono necessarie trasfusioni multiple, nei casi in cui anticorpi immunitari agli antigeni del sistema Rh, compreso durante la selezione individuale del sangue.

L'antigene D ha varianti deboli, combinate nel gruppo Dweek (Du), la cui frequenza nella popolazione è di circa l'1%. Questi globuli rossi vengono agglutinati debolmente o per niente dagli anticorpi anti-Rh completi in una reazione di agglutinazione diretta.

I donatori contenenti Du dovrebbero essere classificati come Rh positivi, poiché, in primo luogo, la trasfusione del loro sangue in riceventi Rh negativi sensibilizzati all'antigene D può causare gravi reazioni trasfusionali e, in secondo luogo, può causare una risposta immunitaria in riceventi Rhesus negativi destinatari. Pertanto, il sangue dei donatori deve essere testato per la presenza di Du e, se rilevato, considerato Rh positivo.

I riceventi contenenti l'antigene Du dovrebbero essere classificati come Rh negativi e dovrebbero ricevere solo trasfusioni di sangue Rh negativo, poiché il normale antigene D può causare una risposta immunitaria in tali individui. Pertanto, non è necessario analizzare il sangue dei riceventi per la presenza di Du.

L'affiliazione Rhesus viene determinata in una reazione di agglutinazione utilizzando reagenti monoclonali o sieri isoimmuni anti-Rhesus progettati per rilevare l'antigene Rh(D) in una reazione di agglutinazione diretta (in aereo e in provetta; in ambiente salino; in presenza di amplificatori ad alto peso molecolare; con enzimi proteolitici trattati sugli eritrociti) o nel test indiretto dell'antiglobulina (test di Coombs indiretto). Il metodo di determinazione dipende dalla classe di anticorpi presenti nel reagente: se contiene anticorpi completi (classe IgM), il reagente viene utilizzato per determinare il fattore Rh mediante agglutinazione diretta in mezzo salino; se contiene anticorpi incompleti (classe Ig G), allora viene utilizzato in una reazione di agglutinazione in presenza di esaltatori di peso molecolare elevato (albumina, gelatina, ecc.), con globuli rossi trattati con enzimi proteolitici, in un test indiretto dell'antiglobulina .

Tecnica per determinare il sangue Rh

Reazione di agglutinazione piana utilizzando reagenti monoclonali anti-D (anticorpi completi)

La determinazione viene effettuata in una stanza con una buona illuminazione. Il test dà i migliori risultati utilizzando un'elevata concentrazione di globuli rossi ed una temperatura di circa +37°C, per cui è consigliabile l'utilizzo di una piastra riscaldata. Per uso di ricerca sangue intero, globuli rossi lavati, globuli rossi nel plasma, siero, conservante o soluzione salina.

La procedura viene eseguita nella seguente sequenza:

1. Applicare una goccia abbondante (circa 0,1 ml) del reagente sulla piastra o sulla piastra.

2. Applicare nelle vicinanze una piccola goccia (circa 0,03 ml) del sangue (eritrociti) da analizzare.

3. Miscelare accuratamente il reagente con il sangue utilizzando una bacchetta di vetro pulita.

4. Dopo 10–20 s, la piastra oscilla leggermente. Nonostante nei primi 30 s si verifichi una chiara agglutinazione, i risultati della reazione dovrebbero essere presi in considerazione 3 minuti dopo la miscelazione.

5. I risultati della reazione vengono registrati immediatamente dopo il completamento.

Se è presente agglutinazione, il sangue da analizzare viene contrassegnato come Rh positivo, se l'agglutinazione è assente, come Rh negativo. Se l'agglutinazione è molto più debole di quella osservata con i globuli rossi Rh(D) positivi, il sangue analizzato appartiene al sottogruppo debole dell'antigene Rh-Du. Per chiarire se un tale campione di sangue appartiene al gruppo Du, il test viene effettuato con un secondo reagente contenente anticorpi anti-D IgG (incompleti) (vedere capitolo 6.2.2.3).

Reazione di agglutinazione utilizzando anticorpi anti-D parziali (IgG) in presenza di additivi ad alto peso molecolare

La reazione viene effettuata o con un reagente appositamente preparato che contiene già un amplificatore (reagente universale con poliglucina o albumina per l'aereo), oppure l'amplificatore viene aggiunto durante la reazione (reazione di conglutinazione con gelatina in una provetta).

La tecnica per eseguire una reazione di agglutinazione su un piano non differisce da quella descritta nel capitolo 6.2.2.1. Tuttavia, i reagenti universali possono dare reazione falsa positiva con eritrociti Rh negativi a causa delle sostanze ad alto peso molecolare che contengono, e può anche causare l'agglutinazione di eritrociti rivestiti con anticorpi di diversa specificità (non anti-Rh). Pertanto è necessario condurre test paralleli con una soluzione di controllo dell'amplificatore utilizzato, ma senza anticorpi anti-0. Se la soluzione di controllo provoca l'agglutinazione dei globuli rossi, i risultati del test non sono affidabili e la determinazione deve essere ripetuta con un altro reagente contenente anticorpi IgM completi (preferibilmente monoclonali).

Reazioni di conglutinazione utilizzando gelatina. Per eseguire questo test è possibile utilizzare reagenti monoclonali e sieri isoimmuni anti-Rhesus standard con anticorpi incompleti.

1. Aggiungere nella provetta 1 goccia (circa 0,05 ml) del sangue da analizzare o una sospensione di globuli rossi (circa il 50%) nel siero.

2. Aggiungere 2 gocce (0,1 ml) di una soluzione di gelatina al 10%, preriscaldata alla liquefazione a +46...+48°C.

3. Aggiungere 2 gocce (0,1 ml) di reagente anti-D e mescolare.

4. Inserisci la provetta bagnomaria con una temperatura di +46...+48°C per 5–10 minuti o in un termostato ad aria secca alla stessa temperatura per 30 minuti.

5. Aggiungere 5–8 ml nella provetta soluzione salina e capovolgere con attenzione la provetta di miscelazione tappata 1–2 volte.

6. Determinare la presenza di agglutinati tenendo la provetta alla luce ad occhio nudo o attraverso una lente di ingrandimento.

7. Registrare immediatamente i risultati della determinazione.

Il test della gelatina richiede i seguenti controlli:

Con globuli rossi standard Rh-positivi;

Con globuli rossi standard Rh-negativi;

Con globuli rossi di prova e soluzione di gelatina, ma senza anticorpi anti-0.

A risultato positivo gli agglutinati sono distinguibili sotto forma di aggregati di diverse dimensioni Sfondo trasparente– il sangue è Rh positivo. Se il risultato è negativo, nella provetta non sono presenti aggregati, ma è visibile una sospensione opaca di globuli rossi di colore uniforme: il sangue è Rh negativo. Se si osserva un'agglutinazione a grana fine e dubbia, il sangue deve essere analizzato con un test antiglobulinico indiretto (vedi capitolo 6.2.2.3). I risultati del test della gelatina sono affidabili solo se la gelatina stessa non provoca l'agglutinazione dei globuli rossi sottoposti a test e i risultati dei controlli con globuli rossi standard corrispondono a quelli attesi. In caso di risultati inadeguati del controllo, il test Rh deve essere ripetuto utilizzando un reagente o un campione di gelatina diverso. Se la gelatina stessa provoca l'agglutinazione degli eritrociti in studio, allora possiamo supporre la presenza su di essi di anticorpi anti-eritrociti anti-Rhesus o altra specificità (questo si osserva nella malattia emolitica dei neonati, nelle malattie autoimmuni anemia emolitica e alcune malattie infettive). In questo caso, il sangue deve essere inviato per l'analisi a uno speciale laboratorio sierologico.

Test antiglobulina indiretto utilizzando anticorpi anti-0 parziali (IgG)

1. Preparare una sospensione al 2–5% dei globuli rossi da testare lavati tre volte in soluzione fisiologica. Per fare ciò porre 5 gocce (circa 0,25 ml) del sangue da analizzare in una provetta, lavarla tre volte in 5–10 ml di soluzione fisiologica; Sospendere il pellet eritrocitario in 2–3 ml di soluzione salina o, preferibilmente, in 2–3 ml di soluzione LISS, in cui la fissazione degli anticorpi sugli eritrociti è più forte e più rapida che in soluzione salina.

2. Aggiungere 1 goccia di reagente anti-O in una provetta pulita ed etichettata.

3. Aggiungere 1 goccia di sospensione di globuli rossi al 2–5%.

4. Incubare la miscela a +37°C per 30–45 minuti (se i globuli rossi sono sospesi in soluzione salina) o 10–15 minuti (se i globuli rossi sono sospesi in LISS).

5. Lavare i globuli rossi 1 volta (nel caso di utilizzo di un reagente monoclonale) o 3 volte (nel caso di utilizzo di siero isoimmune anti-0) con un grande volume (5–10 ml) di soluzione fisiologica. Un lavaggio singolo è consentito solo quando si utilizzano reagenti monoclonali. Rimuovere completamente la soluzione salina.

6. Aggiungere 1 goccia di reagente antiglobulina al sedimento e mescolare accuratamente.

7. Centrifugare per 15–20 secondi a 2.000–3.000 giri/min.

8. Risospendere delicatamente il sedimento e determinare visivamente la presenza di agglutinazione.

9. Annotare immediatamente i risultati della determinazione.

In assenza di agglutinazione il sangue è Rh negativo. A reazione positiva– Rh positivo; I sottogruppi Du possono causare una debole agglutinazione anche in questo test altamente sensibile. Prima di classificare un donatore di Du come Rh positivo, la conclusione dovrebbe essere confermata da un test di controllo del siero antiglobulina con globuli rossi standard. Se il test di controllo è positivo, l'interpretazione non è affidabile. In questo caso, il ricevente dovrebbe ricevere solo sangue Rh negativo (eritrociti) e il sangue di tale donatore non dovrebbe essere utilizzato per trasfusioni fino a quando il suo stato Rh non sarà definitivamente determinato.

Agglutinazione degli eritrociti trattati con enzimi proteolitici utilizzando anticorpi anti-0 parziali (IgG)

Gli anticorpi incompleti possono causare agglutinazione diretta in ambiente salino di eritrociti trattati con bromelina, papaina, trypsin e altre proteasi. Questo metodo è altamente sensibile e affidabile nel rilevare forme deboli di antigene D. Viene utilizzato principalmente per la determinazione automatica dei gruppi sanguigni nei sistemi “Gruppomatic”, in cui è garantito il trattamento standard dei globuli rossi con enzimi e la diluizione richiesta del reagente è appositamente selezionata, poiché questo test è caratterizzato dal fenomeno della prozona ( inibizione dell’agglutinazione da parte di anticorpi in eccesso).

Per la determinazione manuale dei gruppi sanguigni, il metodo può essere utilizzato in laboratori sierologici specializzati.