Загальна кількістьбілка крові 60-80 г/л. Розрізняють кілька білкових фракцій, що виконують специфічні функції.

1. Альбуміни (40-60 г/л) мають високу колоїдно-осмотичну активність.

2. Глобуліни a, b, g (20-40 г/л) створюють гуморальний імунітет, утворюючи різні антитіла, які називаються імуноглобулінами (IgM, IgG).

3. Фібриноген (2-4 г/л) - головний фактормеханізму зсідання крові.

АНТИГЕНИ(грец. ànti – проти, genos – створювати) – речовини, що мають здатність викликати в організмі утворення антитіл і вступати з ними в реакцію. У мембрану еритроцитів вбудовано низку специфічних полісахаридів - амінокислотних комплексів, які мають антигенними властивостями. Ці комплекси називаються аглютиногенами.

На цей час в еритроцитах людини виявлено понад 400 антигенів, локалізованих у мембрані еритроцитів, 140 з яких об'єднані в 20 генетично контрольованих систем. Інші антигени є загальними чи індивідуальними. Для клінічної практики найбільш важливими є система АВО та резус-система (Rh-система). Виділяють також групи Келл-Челано, Кідд, Лютеран, Даффі, Дієго та ін. Останні мають значення лише при частих переливаннях крові або при вагітності, несумісній по якомусь із цих аглютиногенів. Тому повторно переливати кров від одного і того ж донора не рекомендується.

Антигени еритроцитів з'являються на другому місяці ембріонального розвитку, проте до моменту народження дитини аглютинабельна їхня активність низька і становить 1/5 активності дорослих.

АНТИТІЛА- Речовини, що вступають в реакцію з антигеном. Природні антитіла завжди присутні у плазмі крові та належать до фракції гамма-глобулінів. До них відносяться антитіла системи АВО - a та b аглютинини, які з'являються у людини в перші місяці після народження і досягають максимальної кількості до 5-10 років життя.

РЕАКЦІЯ АГГЛЮТИНАЦІЇ- склеювання та випадання в осад еритроцитів під дією специфічних антитіл - аглютинінів. Вважають, що молекула антитіла двома центрами зв'язування утворює місток між двома еритроцитами. Кожен із цих еритроцитів своєю чергою пов'язується коїться з іншими еритроцитами й у результаті відбувається їх склеювання. При переливанні несумісної кровіаглютинація призводить до гемолізу еритроцитів та звільнення факторів згортання крові. Згустки, що утворюються, закупорюють дрібні судини і тим самим порушують капілярний кровообіг.

Аглютинація виникає при зустрічі однойменних аглютиногенів донора та аглютинінів реципієнта.

Основні положення. Клітини крові та плазма містять величезну кількість антигенів. Так, еритроцити несуть близько 400 антигенів, лейкоцити і тромбоцити на додаток до специфічних їм антигенів — антигени HLA . Білки плазми також характеризуються великою антигенною різноманітністю. Патологічна імунна відповідь на ці антигени лежить в основі патогенезу цілого ряду захворювань.

1. Реакція гемаглютинаціїодин з основних методів, за допомогою якого визначають еритроцитарні антигени. Аглютинація еритроцитів опосередкована антитілами. Швидкість та виразність цього процесу залежать від числа еритроцитів, концентрації антитіл, pH, температури та іонної сили розчину. Аглютинація відбувається, коли сили зв'язування перевищують сили відштовхування, зумовлені негативним зарядом клітинної поверхні еритроцитів. IgM, що несуть 10 ділянок зв'язування, викликають аглютинацію еритроцитів навіть у фізіологічному розчині. IgG не можуть викликати аглютинацію, поки негативний заряд еритроцитів не буде знижений за допомогою будь-якої високомолекулярної речовини (наприклад, бичачого альбуміну) або видалення сіалових кислот (для цього еритроцити обробляють протеазами: фіцином, папаїном, бромеліном або трипси). Аглютинація також залежить від доступності, тобто кількості та локалізації молекул антигену на поверхні еритроциту. Антигени системи AB0 ​​(еритроцитарні антигени A та B) знаходяться на зовнішній поверхні клітинної мембраниі тому легко зв'язуються з антитілами, а антигени системи Rh у її товщі. Доступність таких антигенів підвищується під час обробки еритроцитів ферментами.

2. Проба Кумбса— метод лабораторної діагностики, що ґрунтується на реакції гемаглютинації.

а.Пряма проба Кумбсазастосовується виявлення антитіл чи компонентів комплементу, фіксованих лежить на поверхні еритроцитів. Вона проводиться в такий спосіб.

1) Для отримання антитіл до людських імуноглобулінів (антиглобулінової сироватки) або комплементу (антикомплементарної сироватки) тварину імунізують людською сироваткою, імуноглобулінами або комплементом людини. Отриману від тваринного сироватку очищають від антитіл до інших білків.

2) Еритроцити хворого відмивають фізіологічним розчином для повного видалення сироватки, яка нейтралізує антитіла до імуноглобулінів та комплементу і може стати причиною помилково-негативного результату.

3) Якщо на поверхні еритроцитів фіксовані антитіла або компоненти комплементу, додавання антиглобулінової або антикомплементарної сироватки викликає аглютинацію еритроцитів.

б.Непряма проба Кумбсадозволяє виявити антитіла до еритроцитів у сироватці. Для цього сироватку хворого інкубують з донорськими еритроцитами групи 0, потім проводять пряму пробу Кумбса, як описано вище.

в.Пряму пробу Кумбса

1) Автоімунний гемоліз.

2) Гемолітична хвороба новонароджених.

3) Лікарська імунна гемолітична анемія.

4) Гемолітичні трансфузійні реакції.

м.Непряму пробу Кумбсазастосовують у таких випадках.

1) Визначення індивідуальної сумісності крові донора та реципієнта.

2) Виявлення алоантитіл, включаючи антитіла, що викликають гемолітичні трансфузійні реакції.

3) Визначення поверхневих еритроцитарних антигенів у медичній генетиці та судовій медицині.

4) Підтвердження однояйцеві близнюків при трансплантації кісткового мозку.

Б.Поверхневі антигени еритроцитівділяться на полісахаридні та білкові. До полісахаридних відносяться антигени систем AB0, MNSs, Ii і P, до білкових - антигени систем Rh, Келл, Кідд і Даффі.

1. Полисахаридні антигенимають такі властивості.

а. Стимулюють переважно вироблення IgM.

б. Стимулюють вироблення теплових (реагуючих з антигеном при 37°C), так і холодових (реагуючих з антигеном при 4°C) антитіл.

в. Ізогемаглютиніни спрямовані проти полісахаридних антигенів системи AB0: кров групи A містить антитіла до антигену B, кров групи B – антитіла до антигену A, кров групи 0 – антитіла до антигенів A та B, кров групи AB не містить ізогемагглютинінів.

м. Зв'язування полісахаридних еритроцитів антигенів з антитілами викликає гострі гемолітичні трансфузійні реакції.

2. Білкові антигенистимулюють переважно вироблення теплових антитіл - IgG, які викликають відстрочені гемолітичні трансфузійні реакції.

Антигени груп крові

1. Трансмембранні транспортери (аг системи колтон – це аквапорин, тобто транспортер води; кідд – переносник сечовини)

3. Рецептори та молекули клітинної адгезії

4. Ферменти (аг системи кел та ін.)

5. Структурні білки (аг систем mns, гербіх – глікофорини, що містять велику кількість сіалових кислот, що забезпечують негативний заряд еритроцитів)

Антигени еритроцитів:

1. гетерофільні антигени, що зустрічаються у багатьох видів тварин та бактерій;

2. неспецифічні, або видові антигени, які не зустрічаються в інших видів тварин; але які у еритроцитах всіх людей;

3. специфічні, чи групові антигени – ізоантигени, які у еритроцитах одних індивідуумів і відсутні в інших. У трансфузіології найбільше значеннямають системи АВО та Rh.

Кров кожної людини належить до будь-якої однієї з 4 груп системи АВ0 залежно від наявності на еритроцитах антигенів А і В та відповідних їм природних антитіл-аглютинінів анти-А і анти-В до відсутнього антигену.

Розрізняють: 0(І); 0A, АА (II); 0B, ВР (III); AB (IV)

Існує кілька видів антигенів А - А1, А2, А3, А4 та антигену В: В1, Вх, В3 та ін. При цьому інтенсивність реакцій з відповідними анти-А або анти-В антитілами прогресивно знижується від кожного попереднього до наступного. Так антиген А2 реагує слабше, ніж А1 тощо. Серед осіб із групою крові А(II) частота виявлення аг А1 становить 80% спостережень, для А2 – 15%, інші варіанти зустрічаються значно рідше. При цьому приблизно 1-8% осіб з групою крові А2(II) та 25-35% людей з групою А2В(IY) містять у крові (надлишкові) антитіла А1, які можуть мати природне або імунне походження. Імунні антитіла до антигенів еритроцитів можуть утворюватися при гемотрансфузіях. Це створює труднощі при ідентифікації груп крові, виявляється у пробі на індивідуальну сумісність та вимагає підтвердження спеціальними моноклональними реагентами.

Людям, які мають антитіла проти антигенів А та В, не можна переливати кров осіб з відповідними антигенами. Так, реципієнтам з І групою крові не можна переливати кров людей інших груп, крім О (І). Групові антигени вирізняються високою стабільністю. Вони виявляються в єгипетських муміях, виготовлених до н.

Не менш важлива у трансфузіології система антигенів резус-фактора. Система резус Rh антиген було відкрито Ландштейнером і Вінером 1940г. Головна відмінність системи резус від системи АВО полягає в тому, що кров людини містить тільки аглютиногени при повній відсутності антитіл, подібних до альфа- і бета-аглютинінів системи АВО. Розрізняють 5 основних аг цієї системи: D(RhO), C(rh'), c(hr'), E(rh), e(hr). Ці антигени, перебуваючи на еритроцитах у різних поєднаннях, утворюють 27 груп системи резус.

Антиген Rho(D) - основний у системі резус, він міститься в еритроцитах 85% людей, у решти 15% він відсутній. Це притаманно європейців. У монголоїдної раси він міститься у 95%. У нормі Rh-антитіл у сироватці немає, вони виникають під час вагітності або внаслідок переливання крові резус-позитивної крові резус-негативному пацієнтові. Наслідками сенсибілізації за резус-фактором у вагітної жінки є народження дітей із гемолітичною хворобою або внутрішньоутробна загибель плода. Якщо ж пацієнту, у крові якого містяться такі антитіла, переливається резус-позитивна кров виникає резус-конфлікт з гемолізом еритроцитів, що переливаються. Тому Rh (відр) пацієнтам можна переливати тільки Rh (відр) кров. Крім того, D-антиген має слабкі варіанти, які поєднуються в групу D(week) або D(u). Частота цих варіантів вбирається у 1%. Донори, які мають ці антигени, повинні розглядатися як резус-позитивні, оскільки переливання їх крові резус-негативним пацієнтам може вести до сенсибілізації, а у сенсибілізованих викликати тяжкі трансфузійні реакції. Проте, реципієнти, які мають антиген D(u) повинні розглядатися, як резус-отрицательные, і можна переливати лише резус-отрицательную кров, т.к. нормальний антиген D може призводити до сенсибілізації пацієнта з розвитком конфлікту як у резус-негативних осіб.

Еритроцитарні антигени резус-системи Келл, Кідд, Даффі та ін. порівняно рідко ведуть до сенсибілізації і набувають практичної значущості при багаторазових гемотрансфузіях та повторних вагітностях

Між організмом Rh-негативної матері, що не містить антигени Д і резус-позитивного плода, що містить цей антиген, що призводять до гемолітичної хвороби плода.

Якщо у Rh (відр.) жінки плід успадковував Rh(+) батька, його антигени можуть надходити через плаценту в організм матері, де індукують синтез Rh-антитіл, які проникають через плаценту плода та викликають руйнування його еритроцитів – гемолітична анемія плода.

При вагітності Rh-антигени проникають в організм матері лише в невеликій кількості та високих титрів специф. антитіл не утворюють, тому за першої вагітності у Rh(відр) матері конфлікту немає. Виняток: інфекція, підвищення проникності плаценти.

Т.к. Rh-антигени проникають в організм матері в основному при пологах, то в кожній наступній вагітності кількість антитіл наростає - резус-конфлікт.

Для запобігання резусу конфлікту Rh(отр) жінкам перед пологами вводять сироватку, що блокує Rh-антигени і скасовують продукцію антирезусних антитіл.

Rh-конфлікт може виникнути і при переливанні крові, якщо Rh(відр) пацієнту перелити Rh(+) кров - синтез а/рез. антитіл та при повторних переливаннях - резус-конфлікт.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-64.jpg" alt="Показом до проведення замінних трансфузій служить рівень билим . При наявності">!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-1.jpg" alt="> Імуногематологічні лабораторні дослідження">!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-2.jpg" alt=">Антигени (Аг) еритроцитів людини – структур) поверхні мембрани еритроцитів, що мають"> Антигены (Аг) эритроцитов человека – структурные образования, расположенные на внешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающие способностью взаимодействовать с соответствующими антителами (Ат) и образовывать комплекс антиген-антитело. Антигены эритроцитов - передаются по наследству, - обладают иммуногенностью (вызывают выработку Ат), - взаимодействуют с Ат, образуя комплекс Аг-Ат. При попадании в организм Аг, отсутствующего у данного индивида, создаются предпосылки для выработки Ат и развития аллосенсибилизации. Синтез Ат может наблюдаться в ответ на гемотрансфузии или беременность. При последующих гемотрансфузиях может произойти взаимодействие Аг эритроцитов доноров и Ат реципиента in vivo, что приводит к посттрансфузионному осложнению.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-3.jpg" alt=">У людини на еритроцитах виявлено 236 Аг,2 Але клінічна"> У человека на эритроцитах обнаружено 236 Аг, объединенных в 29 систем. Но клиническая роль антигенов неодинакова. Клиническое значение Аг определяется способностью аллоантител к данным Аг вызывать разрушение эритроцитов в организме реципиента. В связи с этим первостепенное !} клінічне значеннямають Аг систем АВ 0 та Резус. Аллоантитіла-антитіла, що мають специфічність до антигенів еритроцитів, відсутні у індивіда.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-4.jpg" alt="> Аллоантитела містяться в сироватці індивіда, не але"> Аллоантитела содержатся в сыворотке индивида, не взаимодействуют с собственными антигенами эритроцитов, но взаимодействуют с антигенами эритроцитов других индивидов и могут быть выявлены !} спеціальними реагентами. Антитіла до антигенів еритроцитів бувають природні (регулярні) - є вродженими, містяться в сироватці індивідів, які не мають в анамнезі гемотрансфузій або вагітностей і, найчастіше, спрямовані проти антигенів еритроцитів системи АВО. Імунні (нерегулярні) антитіла виробляються як результат імунного стимулу, коли в організм потрапляє антиген, який відсутній у господаря (наприклад, при несумісній гемотрансфузії або вагітності)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-5.jpg" alt="> За здатністю викликати гемоліз при несумісних гемотрансфузіях"> По способности вызывать гемолиз при несовместимых гемотрансфузиях и разрушение эритроцитов плода при иммунологическом конфликте мать-плод, антитела подразделяются на имеющие и не имеющие клиническое значение. Клиническое значение антител – это способность антител вызывать гемолитические посттрансфузионные осложнения или гемолитическую болезнь новорожденного. Клиническое значение имеют естественные антитела системы АВ 0. Среди иммунных антител клиническое значение имеют антитела, активные в прямом антиглобулиновом тесте при +37 о. С (в эту группу входят антитела системы Резус).!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-6.jpg" alt="> Антигени крові АВ 0. Однією з основних систем антигенів"> Антигены крови АВ 0. Одной из основных систем антигенов в иммуногематологии является система антигенов эритроцитов АВ 0, включающая 4 антигена: А, В, А 1. Правило Ландштейнера: здоровые индивиды имеют в сыворотке АВ 0 -антитела к антигенам, отсутствующим на их эритроцитах. По наличию на эритроцитах антигенов А и В, также присутствию в сыворотках анти-А(α), анти-В(β) антител, различают следующие группы крови:!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-7.jpg" alt="> Групи крові Назва, прийнята в клінічній 0(I)"> Группы крови Название, принятое в клинической 0(I) А(II) В(III) АВ(IV) практике Аг на эритроцитах нет А В А+В Ат в сыворотке Анти-А(α) Анти-В(β) Анти-А(α) нет (изогемагглютинины) Анти-В(β) Международное название 0 А В АВ «Старое» название с указанием соответствующих Ат 0αβ(I) Аβ(II) Вα(III) АВо(IV) в сыворотке Частота встречаемости (%) в 35 33 23 9 Санкт-Петербурге!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-8.jpg" alt="> За міжнародними правилами для позначення груп крові використовуються тільки літери ,"> По международным правилам для обозначения групп крови используются только буквы А, В, АВ и 0 и не применяется цифровое обозначение (I), (III), (IV). В настоящее время принято следующее обозначение для антител АВ 0: анти-А, анти-В антитела (взамен α - и β–изогемагглютининов).!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-9.jpg" alt=">Антигени системи АВ 0 розвиваються на еритроцитів даної системи"> Антигены системы АВ 0 развиваются на эритроцитах плода, однако полное созревание антигенов данной системы происходит только через несколько месяцев после рождения. У взрослых на эритроцитах могут присутствовать следующие антигены системы АВ 0: А, В. Кроме того, на эритроцитах присутствует антиген Н (не входит в систему АВО, а принадлежит системе Н). Антиген Н является предшественником антигенов А и В, в большом количестве обнаруживается на поверхности эритроцитов, принадлежащих к группе крови 0 (I). АВН антигены могут присутствовать в растворенном виде в различных секреторных жидкостях организма. Индивиды, чьи жидкие секреты несут групповые вещества, называются выделителями (78% лиц). 22% людей имеют антигены только на эритроцитах и называются невыделителями.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-10.jpg" alt=">У здорових людейвідзначається гетерогенність антигену А. Існує кілька підгруп антигену А: А 1,"> У здорових людей відзначається гетерогенність антигену А. Існує кілька підгруп антигену А: А 1, А 2, Аm, Аx, Аend, Аel, Аy і т.д. Серед європейців 80% індивідів, що належать до групи крові А(II), мають підгрупу А 1, решта 20% належать до А 2 -підгрупи.А2 антиген не існує окремо, а являє собою варіант А антигену.Відмінності між антигенами А1 і А 2 є якісними і кількісними.Сироватка деякої частини А 2В індивідів містить аглютиніни анти-А 1. Дуже рідкісними і слабкими варіанти антигену А є Аm, Аx, Аend, Аel, Аy і т. д. , які традиційними методами, що застосовуються в Для виявлення у реципієнта А 2 антигену поряд зі звичайним реагентом, що виявляє А антиген на еритроцитах, використовується реагент, що містить антитіла тільки до антигенів А 1. Відсутність реакції еритроцитів пацієнта з реагентом, що містить антитіла на наявність А2 антигенів на еритроцитах індивіда.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-11.jpg" alt=">Висновок про визначення групи крові у осіб, що мають А 2 Контро"> Заключение об определении группы крови у лиц, имеющих А 2 -антиген Контро Реагент Заключение об ль исследовании группы Анти- В крови А А 1 - + + - А(II) - + - А 2(II)подгрупповая - + + АВ(IV) - + - + А 2 В(IV)подгрупповая!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-12.jpg" alt=">Слабкі форми В антигену також існують, В 3, , Вm, але вкрай рідкісні"> Слабые формы В антигена также существуют: В 3, Вx, Вw, Вm, но крайне редки среди населения Европы. Чаще встречаются среди населения Китая.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-13.jpg" alt="> Характеристика анти-А і анти-В антитіл Природні анти А, анти-В"> Характеристика анти-А и анти-В антител Естественные антитела анти-А, анти-В принадлежат к иммуноглобулинам класса М (Ig. M). Выработанные в процессе иммунизации А и В антигенами анти-А и анти-В антитела являются иммунными и принадлежат к иммуноглобулинам класса G (Ig. G). Анти-А и анти-В антитела в сыворотках большинства людей представляют собой смесь естественных и иммунных антител (смесь Ig. M и Ig. G). Они вырабатываются в результате полигенного воздействия группоспецифических субстанций А и В на организм человека: инфекционные заболевания, прививки, потребление продуктов животного и !} рослинного походження, гемотрансфузії іногрупної крові, гетероспецифічна вагітність

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-14.jpg" alt=">Визначення групи крові перехресним способом (за допомогою реагентів) А та анти-В антитіла"> Определение группы крови перекрестным способом (при помощи реагентов, содержащих анти-А и анти-В антитела и стандартных эритроцитов) Заключение о групповой принадлежности делают на основании наличия или отсутствия антигенов А и В на эритроцитах, а также присутствия анти-А и анти-В антител в сыворотке(плазме) исследуемой крови. Для исследования используют стандартные эритроциты групп крови 0(I) А(II), В(III), АВ(IV) и цоликлоны – растворы, содержащие моноклональные антитела анти-А, анти-В и анти-А+В. Перед исследованием маркируют пластинку, указывая № исследования, Ф. И. О. пациента и названия реагентов.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-15.jpg" alt=">Оцінка результатів визначення груп крові перехресним способом Цоліни"> Оценка результатов определения групп крови перекрестным способом Цоликлоны Стандартные Исследуемая эритроциты !} кров Анті-ААнти-В Анти- належить до 0 А У групі А+В - - + + 0(I) + - - + А(II) - + + - В(III) + + + - - - АВ(IV)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-16.jpg" alt=">В даний час для одночасного визначення групи АВО і резус-на а також для типування"> В настоящее время для одновременного определения группы АВО и резус-принадлежности, а также для типирования антигенов эритроцитов используются идентификационные карты ID- карты Диа. Мед Выявление антигенов эритроцитов в ID-карте осуществляется методом агглютинации в геле. При добавлении исследуемых эритроцитов в пробирку, содержащую, например, анти-А, при наличии на эритроцитах антигена А, происходит реакция агглютинации. Образующиеся агглютинаты остаются в верхней части пробирки, т. к. не проходят через гель из-за !} великого розміруутворених комплексів АГ+АТ (позитивний результат). За відсутності антигену у досліджуваному зразку еритроцити не утворюють аглютинатів з антисироваткою, легко проходять гель та осідають на дні пробірки (негативний результат)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-17.jpg" alt=">Причини помилок при дослідженні групової приналежності крові. Технічні помилки"> Причини помилок при дослідженні групової належності крові 1. Технічні помилки Неправильне маркування Помилковий порядок нанесення реагентів, неправильна реєстрація результатів Порушення техніки дослідження (недотримання інструкції): а) неправильне співвідношення реагентів та досліджуваної крові (сироватки), зі закінченим терміном придатності, що зберігалися без холодильника і т. п.) в) скорочення часу спостереження за реакцією, г) проведення дослідження при температурі вище +250 С (можливо помилково-негативна реакція) або нижче 150 С (можлива холодова аглютинація)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-18.jpg" alt="> 2. Помилки, обумовлені індивідуальними особливостямиантигенів еритроцитів АВ 0 Кількість і щільність"> 2. Помилки, обумовлені індивідуальними особливостями антигенів еритроцитів АВ 0 Кількість і щільність розташування антигенних детермінантів на еритроцитах різна і є спадковою властивістю. Варіант антигену Число антигенних детермінантів на ери0 00 2 160 000 - 440 000 А 3 40 600 – 118 000 Аm 100 – 1 900 Чим більше антигенних детермінант є присутнім на еритроцитах, тим активніше вони вступають у реакцію з антитілами.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-19.jpg" alt=">Антигени груп крові схильні до впливу довкілляі можуть бути модифіковані при її зміні. Ослаблення"> Антигени груп крові схильні до впливу навколишнього середовища і можуть модифікуватися при її зміні. Ослаблення вираженості або повна втрата антигенних детермінантів на еритроцитах описана у хворих онкологічними захворюваннямита лейкозами. Зміна антигенів АВ 0 спостерігається також за інфекційних процесахвірусної чи бактеріальної природи. Описано випадки утворення В-антигену замість А-антигена на поверхні еритроцитів у осіб з групою А(II) під дією бактеріальних ферментів. Активність придбаного В-антигена значно нижча від звичайного В-антигена, внаслідок чого придбаний В-антиген не здатний аглютинувати з власними анти-В антитілами.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-20.jpg" alt="> Відзначено, що виразність А і В антигенів на ери"> Отмечено, что выраженность А и В антигенов на эритроцитах коррелирует с применением !} гормональних засобів, а також змінюється під час вагітності. Аналіз помилок показує, що найчастіше помилки обумовлені невиявленням антигену А 2 групи крові А(II). Це призводить до помилкової ідентифікації як 0(I). У групі А 2 В(IV) не виявлення антигену А 2 призводить до її помилкової ідентифікації як групи В(III).

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-21.jpg" alt="> Характер утруднень при визначенні груп крові Відхилення від звичайної"> Характер затруднений при определении групп крови Отклонения от обычной агглютинации могут выражаться в отсутствии специфической агглютинации или наличии неспецифической агглютинации, а также несовпадением результатов исследования с цоликлонами и стандартными эритроцитами. Чаще всего затруднения связаны с присутствием в исследуемой крови аутоантител на эритроцитах или аллоантител в сыворотке. Ауто- и аллоантитела могут вступать в реакцию агглютинации с соответствующими антигенами и искажать результаты АВ 0 типирования. Алло- и аутоантитела бывают специфическими (взаимодействующими с соответствующими антигенами эритроцитов с образованием комплекса Аг+Ат) и неспецифическими (реакция агглютинации происходит не за счет образования комплекса Аг+Ат, а при взаимодействии иных химических структур, представленных на эритроцитах)!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-22.jpg" alt=">1. Специфічна та неспецифічна холодова холодова. , присутні"> 1. Специфическая и неспецифическая холодовая агглютинация. Специфические и неспецифические холодовые Ат, присутствующие в сыворотке крови исследуемого образца, могут взаимодействовать со стандартными эритроцитами при использовании перекрестного способа определения групп крови. Показателем присутствия таких Ат является агглютинация сыворотки пациента в эритроцитами 0(I). Неспецифические холодовые АТ присутствуют в сыворотках больных онкологическими и гематологическими заболеваниями. Аутоантитела обнаруживаются у больных аутоиммунными гемолитическими анемиями и тромбоцитопениями. Неспецифическая агглютинация исследуемой крови может быть обусловлена присутствием в сыворотке патологических белков (гипергаммаглобулинемии).!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-23.jpg" alt="> 2. Низька активність 2. Низька активність анти-А та/або анти-В антитіл (ізогемагглютинінів α і β) пацієнта. Відсутня або слабо виражена реакція сироватки пацієнта з відповідними стандартними еритроцитами Спостерігається: У новонароджених В осіб похилого віку За наявності онкологічних та гематологічних захворювань

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-24.jpg" alt="> 3. Холодова аглютинація ери."> 3. Холодовая агглютинация эритроцитов пациента со стандартными сыворотками. Обусловлена присутствием на исследуемых эритроцитах холодовых аутоантител. Последние активны при t 20 о. С и не имеют клинического значения, однако затрудняют проведение исследования. Наблюдаются полиагглютинабельность и положительный аутоконтроль. Полиагглютинабельность – способность эритроцитов агглютинировать со всеми образцами сывороток, не зависимо от их АВ 0 принадлежности. Положительный аутоконтроль – агглютинация эритроцитов в собственной сыворотке больного.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-25.jpg" alt=">4. Присутність у досліджуваній крові А 2 антигену в еритроцитах"> 4. Присутствие в исследуемой крови А 2 антигена При наличии у пациента в эритроцитах антигена А 2 в сыворотке может дополнительно содержаться экстра агглютинин анти А 1 (α 1), взаимодействующий со стандартными эритроцитами группы крови А(II) – см. следующую таблицу. Частота встречаемости экстра агглютининов в группе крови А 2(II) составляет ≈2%, а в группе крови А 2 В(IV) – 30%. Чаще экстра агглютинины принадлежат к Ig. M, активны при комнатной температуре, при нагревании планшеты до +38 -40 о. С исчезают. Считается, что анти-А 1 антитела (экстра агглютинины), присутствующие в крови реципиентов, не выявляются при 37 о. С, поэтому не имеют клинического значения. Однако показана возможность выработки анти-А 1 антител (принадлежащих Ig. G и поэтому имеющих клиническое значение) у реципиентов, в анамнезе которых были трансфузии крови, содержащей А 1 антиген эритроцитов.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-26.jpg" alt=">Визначення групи крові перехресним методом у осіб, які мають А чи осіб А, що мають А чи перехресним методом)"> Определение группы крови перекрестным методом у лиц, имеющих А или А 2 антиген цоликлоны Стандартные Группа крови эритроциты Анти анти Анти 0 А В -А -В А+В А 1 + - + + - - + А(II) + - - - + А 2(II) подгрупповая + + + + - - - АВ(IV) + + + - - - - А 2 В(IV) подгрупповая!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-27.jpg" alt=">Визначення групи крові перехресним методом у осіб, що мають А"> Определение группы крови перекрестным методом у лиц, имеющих А 2 антиген и экстра агглютинины анти-А 1 цоликлоны Стандартные Группа крови эритроциты Анти анти Анти 0 А В -А -В А+В А 1 + - + + - - + А(II) + - - - + А 2(II) подгрупповая + - - + А 2(II) подгрупповая + с экстра агглютининами анти А 1 + + - - - АВ(IV) + + + - - - - А 2 В(IV) подгрупповая + + + - - А 2 В(IV) подгрупповая + с экстра агглютининами анти А 1!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-28.jpg" alt="> Правила, які треба дотримуватися при дослідженні групи крові1. дослідження"> Правила, которые надо соблюдать при исследовании группы крови 1. Использовать для исследования реактивы, в качестве которых нет сомнения 2. Исследование проводить перекрестным способом 3. Кровь для исследования брать до проведения больному гемотрансфузий и переливания плазмозамещающих растворов 4. Обращать внимание на диагноз 5. Проводить ежедневный контроль качества применяемых реактивов!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-29.jpg" alt="> Антигени системи Резус Система антигенів ери0"> Антигены системы Резус Система антигенов эритроцитов была открыта в 1940 г. Ландштейнером и Винером и насчитывает в настоящее время 48 антигенов. Среди антигенов системы резус наибольшее клиническое значение имеет антиген D. Обладая выраженными иммуногенными свойствами, антиген D в 95% случает является причиной гемолитической болезни новорожденных при несовместимости матери и плода, а также !} частою причиноютяжких посттрансфузійних ускладнень. Особ, які мають антиген D, відносять до резус-позитивних, а осіб, які не мають антиген D – до резус негативних.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-30.jpg" alt="> Спадкування антигену D Мати Rh+ Батько Rh+"> Наследование антигена D Мать Rh+ Отец Rh+ D/d DD (Rh+) Dd (Rh+) dd(Rh-)!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-31.jpg" alt="> Комплекс генів, що кодують систему Резус, складається з 3 детермінант:"> Комплекс генов, кодирующих систему Резус, состоит из 3 -х антигенных детерминант: D или отсутствие D («d»), С или с, Е или е в различных комбинациях. Существование антигена d не подтверждено, однако символ d применяется в иммуногематологии для обозначения факта отсутствия антигена D на эритроцитах.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-32.jpg" alt="> Найчастіше зустрічаються фенотипи системи резус Поняття фен"> Наиболее часто встречаемые фенотипы системы резус Понятие фенотип обозначает антигены, присутствующие на эритроцитах индивида (по определению Международного общества переливания крови) фенотип Rh Частота реципиента встречаемости Cc. De Rh+ 34% CDe Rh+ 19. 5% c. DEe Rh+ 12% Cc. DEe Rh+ 14% ce Rh- 13% Cce Rh- 1% c. Ee Rh- 0. 1%!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-33.jpg" alt="> Різновиди антигену D Антиген D складається з структурних одиниць- Епітопів. "> Різновиди антигену D Антиген D складається із структурних одиниць – епітопів. Еритроцити здорових осіб експресують усі епітопи антигену D (нормально виражений антиген D). Еритроцити, що мають знижену експресію антигену D (знижена кількість антигенних детермінант) обумовлюють D слабкий. не знижено, але вони відрізняються якісно, ​​такий D антиген називається варіантним (D варіантний).

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-34.jpg" alt=">В даний час прийнята наступна тактика визначення резус-на потенційних реципієнтів: особи,"> В настоящее время принята следующая тактика определения резус-принадлежности для пациентов - потенциальных реципиентов: лица, имеющие D слабый и D вариантный расцениваются как резус-отрицательные. Применяемые в широкой !} клінічній практиціреагенти для оцінки резус-фактора (цоліклони анти-D) виявляють резус-приналежність D слабкого та D варіантного як негативну. Раніше, тобто до початку широкого застосуванняцоліклонів анти-D, D слабкий і D варіантний визначалися як Du, таким пацієнтам переливали резус-негативну R-масу.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-35.jpg" alt=">Причини помилок при визначенні резус-належ. еритроцитах"> Причины ошибок при определении резус- принадлежности крови 1. Наличие на исследуемых эритроцитах аутоантител (результат сомнительный, слабоположительный). Аутоантитела связываются с компонентами реагента: полюглюкином, желатином, альбумином и п. т.) Действия: провести контроль с реактивом без анти-D антител (поставляется производителем). 2. Ослабление активности антигенов системы Резус при заболеваниях. Наблюдается расхождение с предыдущими определениями резус-фактора у !} даного пацієнта: Раніше визначається Rh+ належність визначається як rh-і навпаки.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-36.jpg" alt="> Хибновід'ємний результат: 1. Порушення методик часу та"> Ложноотрицательный результат: 1. Нарушение методики (неправильное соотношение реактивов, несоблюдение времени и температуры и т. д.) 2. Использование некачественных реактивов (истекший срок годности, нарушение условий хранения, транспортировки и т. д.) 3. Абсорбция на исследуемых эритроцитах большого количества аутоантител может препятствовать взаимодействию D антигена с анти-D антителами реактива.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-37.jpg" alt="> Rh(-) в порівнянні з раніше визначеною позитивною"> Rh(-) по сравнению с ранее определенной положительной контроль - контроль + !} Непряма реакціяповторити дослідження Кумбса з відмитими еритроцитами позитивний тестконтроль+ Rh+ негативний можливий Тест негативний контроль (-) присутність Можлива наявність Rh(-) аутоантитіл, D варіантів дослідити в гелі Діа. Мед поставити прямий тест Кумбса з анти-Ig. G

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-38.jpg" alt="> Rh(+) в порівнянні з раніше визначеною негативною контроль -"> Rh(+) по сравнению с ранее определенной отрицательной контроль – контроль + Rh+ повторить исследование с отмытыми эритроцитами Тест контроль+ отрицательный возможно контроль (-) присутствие Rh (-) аутоантител, исследовать в геле Диа. Мед, поставить прямой тест Кумбса с анти-Ig. G!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-39.jpg" alt="> Антитіла до антигенів системи Резус є імунними"> Антитела к антигенам системы Резус являются иммунными и появляются в результате трансфузий эритроцитов доноров, содержащих антигены, отсутствующие у реципиентов, а также при иммунизации матери эритроцитами плода. Чаще всего антитела к антигенам эритроцитов системы резус являются Ig. G, поэтому не могут вступать в прямую агглютинацию с эритроцитами in vitro. Для проявления агглютинации необходимо добавить усилители агглютинации: желатин, альбумин, полиглюкин или другие коллоиды; провести центрифугирование, создать оптимальный !} температурний режим(+37 -48 о. С), додати протеолітичні ферменти. Найчастіше в крові донорів та реципієнтів виявляють анти-D антитіла, рідше анти-е антитіла. Імуногенність антигенів системи Резус представлена ​​наступним чином: D>с>Е>С>е.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-40.jpg" alt=">Ig. G складається з 4-х підкласів: Ig. 1, Ig.G 2, Ig."> Ig. G состоит из 4 -х подклассов: Ig. G 1, Ig. G 2, Ig. G 3, Ig. G 4. Подклассы существенно отличаются по своим свойствам in vivo: по способности активировать комплемент, взаимодействовать с Fc-рецепторами фагоцитирующих клеток, вызывать гемолиз эритроцитов. Ig. G 1 и Ig. G 3 вызывают гемолиз и ГБН. Ig. G 2 и Ig. G 4 не вызывают гемолиз и ГБН. Ig. G антитела к антигенам эритроцитов системы Резус принадлежат, в основном, к субклассу Ig. G 1 и Ig. G 3. У некоторых лиц антитела являются частично Ig. G 2 и Ig. G 4.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-41.jpg" alt="> Система антигенів еритроцитів К16"> Cистема антигенов эритроцитов Келл Антиген К был открыт Кумбсом в 1946 г. при исследовании гемолитической болезни новорожденного. Сейчас известно 24 антигена эритроцитов системы Келл. Частота встречаемости 7 - 9%. Антитела ко всем антигенам эритроцитов системы Келл являются клинически значимыми, вызывают ПГО (посттрансфузионные гемолитические осложнения) и ГБН (гемолитическую болезнь новорожденного). Большинство образцов антител принадлежит к Ig. G субкласса Ig. G 1. Трансфузионные реакции, вызванные К антигеном, иногда приводят к !} смертельного результату. Гемоліз еритроцитів позасудинний. ГБН, обумовлена ​​анти-К антитілами, має тяжкий перебіг, характеризується анемією плода, а не гемолізом еритроцитів. У найважчих випадках настає внутрішньоутробна смерть плода та мертвонародження.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-42.jpg" alt="> Ускладнення після гемотрансфузій Посттрансфузійними небажані наслідкиПосттрансфузійними реакціями та ускладненнями називаються небажані наслідки, що виникають у реципієнта після трансфузії. Посттрансфузійні реакції – не викликають серйозних та тривалих порушень функцій організму. Посттрансфузійні ускладнення – тяжкі клінічні прояви, що становлять небезпеку для життя хворого. При проведенні гемотрансфузій у реципієнтів можливі реакції та ускладнення імунологічного та неімунологічного типу. Ускладнення імунологічного типу зумовлені імунологічним конфліктом між компонентами крові донора та реципієнта (в основі реакція Аг+Ат). Ускладнення неімунологічного типу обумовлені багатьма причинами: трансфузіями гемолізованих еритроцитів, переливанням інфікованої крові, метаболічними порушеннями, порушенням техніки трансфузії тощо.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-43.jpg" alt=">Негайні ускладнення та реакції виникають в момент трансфузії трансфузії."> Немедленные осложнения и реакции возникают в момент трансфузии или через несколько часов после трансфузии. Отсроченные осложнения возникают через несколько дней, месяцев или лет после трансфузии.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-44.jpg" alt=">Класифікація посттрансфузійних ускладнень"> Классификация посттрансфузионных осложнений иммунологического типа НЕМЕДЛЕННЫЕ ОТСРОЧЕННЫЕ Гемолитические Гемолитические Фебрильные негемолитические Аллоиммунные Крапивница Тромбоцитарно-рефрактерные Анафилактические Болезнь «трансплантат против хозяина» Острая !} легенева недостатність, пов'язана з трансфузією Імуномодуляторні

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-45.jpg" alt="> Гемолітичні негайні та відстрочені обумовлені руйнуванням. них"> Гемолитические немедленные и отсроченные обусловлены разрушением эритроцитов доноров антителами реципиентов. Частота посттрансфузионных гемолитических осложнений от 0, 002% до 0, 2% проведенных гемотрансфузий. Частота посттрансфузионных негемолитических осложнений от 1% до 10% проведенных гемотрансфузий. Фебрильные негемолитические реакции Проявляются подъемом температуры на 10 С и более в течение 8 -24 часов после трансфузии. При диагностике необходимо исключить другие причины подъема температуры (септические реакции, !} застудні захворюваннята ін). Зазвичай безпечні для життя хворого, зустрічаються в одному випадку на 130 - 400 трансфузій крові або в 20% при трансфузіях тромбоцитів. Алергічні реакції– кропив'янка Характеризується висипом, свербінням, зазвичай без підйому температури. Анафілактичні реакції трапляються рідко: одна на 20 000 - 50 000 трансфузій. Супроводжуються кашлем, задишкою, бронхоспазмом, іноді може бути місцева реакція на шкірі та слизовій оболонці. Можливі тяжкі клінічні наслідки – шок, смерть.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-46.jpg" alt=">Руйнування еритроцитів антитілами Початок та картин руйнування еритроцитів антитілами , несумісних з"> Разрушение эритроцитов антителами Начало и картина проявлений ПГО, вызванных переливанием донорских эритроцитов, несовместимых по антигенам системы АВ 0, Резус, Келл и др. зависит от механизма их разрушения: в кровяном русле (внутрисосудистый гемолиз) – при гемотрансфузии, несовместимой по системе АВ 0, Келл и др. в тканях (внесосудистый гемолиз) – например, при гемотрансфузии, несовместимой по системе Резус.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-47.jpg" alt="> Внутрішньосудинний гемоліз Інтенсивність руйнування"> Внутрисосудистый гемолиз Интенсивность разрушения эритроцитов зависит от: Объема перелитых эритроцитов, Уровня содержания Ат. !} Високий рівеньпризведе до швидкого гемолізу до повного гемолізу протягом 1 години. У реципієнта з низьким рівнем Ат на початку клінічні ознаки можуть бути відсутніми, але через кілька днів рівень Ат підвищиться і з'являться ознаки гемолітичного ускладнення, Функціональних властивостей та специфічності АТ (авидності), Кількості антигенних детермінантів на еритроциті, Рівня компонентів комплементу в крові у реципієнта. Здатність АТ фіксувати комплемент визначається присутністю на важких ланцюгах імуноглобулінів зони, що взаємодіє з першим компонентом комплементу. Така зона є у Ig. M та деяких субкласах Ig. G (Ig. G 1 та Ig. G 3). Однак резус-антитіла, будучи імуноглобулінами класу М і G, через особливості власної будови не здатні фіксувати комплемент, отже, не викликають внутрішньосудинний гемоліз еритроцитів.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-48.jpg" alt="> Клінічні наслідки внутрішньосудинного гемолізу: 1. Швидке падіння"> Клінічні наслідки внутрішньосудинного гемолізу: 1. Швидке падіння кров'яного тиску 2. Геморагічний синдром(ДВС-синдром) Лабораторні ознаки: 1. Гемоглобінемія. Виникає внаслідок гемолізу еритроцитів. Порівняти фарбування зразка сироватки або плазми пацієнта, взятої до трансфузії, із зразком, взятим після трансфузії. Виключити механічний гемоліз, викликаний неправильною технікою взяття крові чи підготовки (центрифугування). 2. Гемоглобінурія. У сечі є вільний гемоглобін, але відсутній вільний міоглобін. 3. Білірубінемія. Через 5 -7 годин (іноді через 1 годину) після гемолізу у плазмі реципієнта з'являється продукт деградації гемоглобіну – білірубін. Розвивається жовтяниця. При нормальній функції печінки рівень білірубіну повертається в норму через 24 год. 4. Розвиток гострої ниркової недостатності (сечовина, креатинін, калій)

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-49.jpg" alt="> Несудинне руйнування еритроцитів комплемент (антитіла"> Внесосудистое разрушение эритроцитов Переливание несовместимой крови реципиентам, имеющим антитела, не фиксирующие комплемент (антитела к антигенам системы Резус), вызывает внесосудистое разрушение эритроцитов: Антитела адсорбируются на несовместимых эритроцитах Комплекс Аг+Ат распознается Fc-рецепторами клеток ретикуло- эндотелиальной системы (моноцитов, макрофагов) Фагоцитоз Внутритканевый гемолиз Процесс происходит в селезенке (преимущественно) и в печени. Интенсивность гемолиза зависит от: Объема перелитых эритроцитов Количества антигенных детерминант на эритроцитах Концентрации антител у реципиента Активности макрофагов в связывании комплекса Аг+Ат!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-50.jpg" alt="> Причини гемоглобінемії при позасудинному гемоглобінемії при позасудинному гемоглобінемії"> Причины гемоглобинемии при внесосудистом гемолизе Часть эритроцитов, несущих комплекс Аг+Ат не взаимодействует с макрофагами и возвращается в сосудистое русло, где подвергается лизису. Fc-рецепторы селезенки перенасыщаются, снижается способность утилизовывать гемоглобин. Последний попадает в кровяное русло. NK-лимфоциты, продуцирующие перфорины, эффективно разрушают эритроциты без участия комплемента. Этот процесс стимулируют анти-D антитела, принадлежащие к Ig. G 1 (доказано in vitro). При большой концентрации Ат в сыворотке реципиента, эритроциты, покрытые анти-D, лизируются моноцитами в !} судинному руслі. Процес стимулюється Ig. G3.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-51.jpg" alt=">Клінічні наслідки позасудинного гемолізу, Такі ж"> Клинические последствия внесосудистого гемолиза: Такие же, как при внутрисосудистом, но менее тяжелые: подъем температуры, озноб. ДВС и почечная недостаточность развиваются редко. Осложнения возникают через 1 час или несколько часов после трансфузии и проявляются в виде анемии, иктеричности склер и !} шкірних покривів, збільшення печінки, селезінки, підвищення білірубіну в сироватці, іноді гемоглобінурії, відсутність зростання рівня гемоглобіну після трансфузій.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-52.jpg" alt="> Відстрочені трансфузійні гемолітичні реакції, ОТГР"> Отсроченные трансфузионные гемолитические реакции (ОТГР) Возникает у реципиентов, сенсибилизированных эритроцитарными антигенами (анти-с, анти-Е, анти-С, анти-К и др.) при предшествующих трансфузиях или беременностях. Сенсибилизация приводит к длительному существованию лимфоцитов памяти. Уровень циркулирующих антител может снижаться до невыявляемости, но повторная реиммунизация (например, при переливании R-массы) приводит к быстрому иммунному ответу и повышению титра антител в сыворотке. Концентрация аллоантител в плазме реципиента постепенно повышается и достигает пика на 10 -15 день после трансфузии. Интенсивность гемолиза пропорциональна нарастающей концентрации антител. Наибольший гемолиз наступает в среднем на 5 - 8 день после трансфузии, но может быть и через 1 месяц.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-53.jpg" alt="> Відстрочені трансфузійні гемолітичні реакції (ВІДГРРР)"> Отсроченные трансфузионные гемолитические реакции (ОТГР) встречаются редко и распознаются плохо. Клинические признаки ОТГР: Снижение содержания гемоглобина (анемия с развитием сфероцитоза) Лихорадка Желтуха Гемоглобинурия Почечная недостаточность (редко) Лабораторная диагностика: В образце крови реципиента, взятом после трансфузии, выявляются слабоактивные аллоантитела и аутоантитела на эритроцитах. Прямая реакция Кумбса положительна до полного выведения эритроцитов донора из организма реципиента.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-54.jpg" alt="> Лабораторні дослідження при ПГО (посттрансфузійних)"> Лабораторные исследования при ПГО (посттрансфузионных гемолитических осложнениях) выявляют у реципиента: Гемоглобинемию Гемоглобинурию Гипербилирубинемию (!} непрямий білірубін) Зниження гематокриту Зниження або відсутність гаптоглобіну (білок плазми крові, що специфічно зв'язує гемоглобін, білок гострої фази) Наявність у сироватці антитіл до антигенів еритроцитів Позитивний прямий антиглобуліновий тест(Пряма проба Кумбса) Для дослідження необхідно мати проби крові реципієнта, взяті до і після трансфузії (для оцінки гемолізу, рівня білірубіну і гаптоглобіну). Типування зразка після гемотрансфузії неінформативно, тому що містить еритроцити донора.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-55.jpg" alt="> Для виявлення причини ПГО: 1. Перевірити ще раз групову донора та реципієнта"> Для выявления причины ПГО: 1. Перепроверить групповую и резус-принадлежность донора и реципиента (в образце крови, взятом до трансфузии) 2. Поставить пробу на индивидуальную совместимость крови донора и сыворотки пациента (взятой до трансфузии) обычным методом и с использованием антиглобулинового теста. 3. Провести исследование антител к антигенам эритроцитов в образцах крови, взятых до и после трансфузии. 4. Выполнить прямой антиглобулиновый тест (прямая реакция Кумбса), выявляющий наличие адсорбированных антител на эритроцитах (в образце крови после трансфузии). Положительная реакция – признак иммунологического конфликта, свидетельствующий об адсорбции антител на несовместимых эритроцитах донора (при условии, что реципиент и донор не имели положительный антиглобулиновый тест до трансфузии).!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-56.jpg" alt="> Гемолітична хвороба новонароджених Розвивається при наявності в крові"> Гемолитическая болезнь новорожденных Развивается при наличии в крови у матери антител к антигенам эритроцитов плода, способных проходить через плацентарный барьер в кровоток ребенка, взаимодействовать с его эритроцитами, вызывая их гемолиз. Вероятность появления антител у матери зависит от: Фенотипа плода Иммуногенности антигена Объема ТПК (трансплацентарных кровотечений) Иммунологической способности матери к продуцированию Ат Иммунизация женщин может наступить при беременности и во время родов. Для выработки анти-D антител необходимо от 0, 1 до 250 мл D положительных эритроцитов. Увеличение риска ТПК: Токсикоз беременных, наружное исследование, !} кесарів розтин, мануальне відділення плаценти, аборти, амніоцентез, взяття проб крові плода

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-57.jpg" alt="> Перенесення антитіл плоду Транспорт антитіл через плаценту є"> Перенос антител плоду Транспорт антител через плаценту является физиологическим: антитела матери защищают новорожденного от инфекции, т. к. механизм синтеза иммуноглобулинов у плода не сформирован. Антиэритроцитарные антитела, принадлежащие к Ig. M не вызывают ГБН. Антитела Ig. G (субклассы Ig. G 1 и Ig. G 3) вызывают ГБН. Уровень Ig. G антител и тяжесть ГБН взаимосвязаны. Однако, иногда результаты выявления аутоантител бывают отрицательными при наличии ГБН, т. к. количество Ат, которое необходимо для гемолиза in vivo, может быть гораздо меньшим, чем необходимо для обнаружения антител in vitro в прямом антиглобулиновом тесте. До 24 недель беременности перенос Ig. G медленный, поэтому ГБН до этих сроков наблюдается редко. Уровень переноса Ат на более !} пізніх термінахзбільшується, під час пологів рівень Ig. G плоду стає максимальним, більшим, ніж у матері. Відповідно максимальним стає гемоліз.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-58.jpg" alt=">Гемоліз еритроцитів новонародженого при адекватному лікуванні народження дитини"> Гемолиз эритроцитов новорожденного при адекватном лечении – явление проходящее, так как после рождения ребенка прекращается поступление антител от матери. Прямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса) – выявляет антитела матери, фиксированные на эритроцитах плода и новорожденного.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-59.jpg" alt="> ГБН, обумовлена ​​несумісністю мати-плід по плід еритроцитів"> ГБН, обусловленная несовместимостью мать-плод по антигенам эритроцитов системы Резус Антигены эритроцитов системы Резус хорошо развиты на эритроцитах плода к 30 -45 дням беременности. Антигены эритроцитов системы Резус высокоиммуногенны, даже в малых дозах способны вызывать образование иммунных антител. Среди антигенов эритроцитов системы Резус наиболее иммуногенным является антиген D. За ним по активности следуют с, E, C, e (D> c > E > C > e). Причиной 95% случает тяжелого течения ГБН является антиген D (а также антигены с и Е). Чаще всего антитела к антигенам эритроцитов системы Резус относятся к Ig. G субклассов 1 и 3 (Ig. G 1 и Ig. G 3). Колебания в тяжести ГБ, обусловленной анти-D антителами, различны: 50% новорожденных больны в легкой форме, 25% - требуют активного вмешательства и 25% имеют крайне тяжелое течение, часто погибают внутриутробно.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-60.jpg" alt=">Особливості розвитку імунологічного конфлікту мати-плід анти0 А"> Особенности развития иммунологического конфликта мать-плод по антигенам эритроцитов системы АВ 0 А и В антигены присутствуют в тканях эмбриона уже с 5 - 6 недели беременности. Анти-А и анти-В антитела в сыворотке большинства людей представляют собой смесь естественных и иммунных антител (смесь Ig. M и Ig. G). Образование анти-А и анти-В антител Ig. G класса объясняется иммунизацией А и В подобными антигенами, содержащимися в клеточных стенках бактерий. Вероятно, именно с этим связан более !} високий відсотокураження першонароджених дітей гемолітичною хворобою, обумовленою АВ 0 несумісністю. Рано розвинені антигени АВ 0 на поверхні клітин-попередників еритроцитів, а також в інших ембріональних тканинах, є мішенню для материнських Анти-А і анти-В антитіл класу Ig. G.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-61.jpg" alt=">ГБН, обумовлена ​​антигенами АВ 0 розвивається досить часто цього захворювання зустрічається"> ГБН, обусловленная антигенами АВ 0 развивается довольно часто, хотя тяжелая форма этого заболевания встречается редко. !} Цей фактможна пояснити: Високою концентрацією А і В розчинених антигенів плода в тканинах плаценти, плазмі крові плода, навколоплідних водах, що забезпечує значне інгібування анти-А та анти-В антитіл матері. Структура антигенів А і В новонароджених відрізняється від такої у дорослих індивідів, тому еритроцити плода пов'язують невелику кількість антитіл, навіть якщо багато антитіл багато. У сироватці вагітних переважно містяться Ig. G 2 анти-А та анти-В антитіла, а Fc-рецептори тканин плаценти більш ефективно пов'язують Ig. G1.

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-62.jpg" alt=">Цей факт пояснює, чому в деяких випадках у новонародженого спостерігається антиглобуліновий тест"> Этот факт объясняет, почему в некоторых случаях у новорожденного наблюдается положительный прямой антиглобулиновый тест (ПАГТ), а ГБН отсутствует. С другой стороны, бывают случаи, когда при наличии ГБН прямой АГТ – отрицательный. Это обусловлено присутствием антител анти-А, -В Ig. G 3 субкласса, количество которых может быть ниже, чем уровень, выявляемый с помощью ПАГТ. Прямой тест Кумбса не является информативным при диагностике АВ 0 ГБН. Даже при отрицательном прямом АГТ, элюат с эритроцитов новорожденного активно взаимодействует с А и В эритроцитами доноров.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-63.jpg" alt="> Імуногематологічне обстеження новонародженого для 1. приналежності крові"> Иммуногематологическое обследование новорожденного для диагностики ГБН 1. Определение группы и резус-принадлежности крови новорожденного. 2. Проведение прямого антиглобулинового теста с эритроцитами новорожденного. Положительный результат свидетельствует о присутствии на эритроцитах новорожденного фиксированных аллоантител. 3. Выявление Ig. G антител системы Резус и других клинически значимых групп крови в сыворотке матери и новорожденного. 4. Выявление Ig. G антител анти-А, анти-В в сыворотке крови матери при разногруппности матери и плода по системе АВ 0. 5. Исследование элюата, полученного с эритроцитов новорожденного.!}

Src="https://present5.com/presentation/3/181575498_285939648.pdf-img/181575498_285939648.pdf-64.jpg" alt=">Показом до проведення замінних трансфузій4 л. За наявності"> Показанием к проведению заменных трансфузий служит уровень билирубина сыворотки > 340 мкмоль/л. При наличии !} клінічних ознак ядерної жовтяницізамінні гемотрансфузії проводять при нижчому рівні білірубіну (300 -340 мкмоль/л). Часто оцінюють погодинний приріст білірубіну. Показанням для замінних трансфузій є приріст білірубіну > 76,5 мкмоль/л.

Основні поняття

В еритроцитах людини є 5 основних антигенів системи резус (D, C, c, E, e), з яких найбільш імуногенним є антиген D – Rh(D). Наявність або відсутність цього антигену визначає резус-приналежність крові: особи, що мають D-антиген, належать до групи резус-позитивних (серед осіб білої раси приблизно 85%); особи, які не мають його, відносяться до резус-негативних (їх, відповідно, близько 15%).

Імуногенність інших (мінорних) антигенів системи Rh значно нижча і зменшується в ряду: с>Е>С>е. Визначення мінорних антигенів системи резус, як правило, проводиться при необхідності багаторазових трансфузій, у тих випадках, коли у сироватці реципієнта виявлено імунні антитіладо антигенів системи резус, у тому числі при індивідуальному доборі крові.

Антиген D має слабкі варіанти, що об'єднуються у групу Dweek (Du), частота якої у популяції становить близько 1%. Ці еритроцити слабо або взагалі не аглютинуються повними анти-Rh-антитілами в реакції прямої аглютинації.

Донори, що містять Du, повинні бути віднесені до резус-позитивних, так як, по-перше, переливання їх крові сенсибілізованим до D-антигена резус-негативним реципієнтам може викликати важкі трансфузійні реакції і, по-друге, може викликати імунну відповідь у резус- негативних реципієнтів. Тому кров донорів повинна обов'язково тестуватися на присутність Du і, у разі виявлення вважається резус-позитивной.

Реципієнти, що містять антиген Du, повинні бути віднесені до резус-негативних і їм повинна бути перелита тільки резус-негативна кров, оскільки нормальний антиген D може викликати у таких осіб імунну відповідь. Тому кров реципієнтів необов'язково тестувати на присутність Du.

Резус-приналежність визначається реакції аглютинації за допомогою моноклональних реагентів або ізоімунних антирезусних сироваток, призначених для виявлення Rh(D)-aнтигену в реакції прямої аглютинації (на площині і в пробірковому тесті; в сольовому середовищі; у присутності високоцитів; протеолітичних ферментів) або в непрямому антиглобуліновому тесті (непряма проба Кумбса). Метод визначення залежить від класу антитіл у реагенті: якщо в ньому присутні повні антитіла (класу IgM), реагент використовується для визначення резус-фактора методом прямої аглютинації в сольовому середовищі; якщо в ньому містяться неповні антитіла (класу Ig G), то він використовується в реакції аглютинації у присутності високомолекулярних підсилювачів (альбуміну, желатину та ін), з еритроцитами, обробленими протеолітичними ферментами, у непрямому антиглобуліновому тесті.

Техніка визначення резус-приналежності крові

Реакція аглютинації на площині за допомогою анти-D моноклональних реагентів (повних антитіл)

Визначення проводять у приміщенні з гарним освітленням. Найкращі результати тест дає при використанні високої концентрації еритроцитів і температурі близько +37°, тому бажано використовувати підігріту пластинку. Для дослідження використовують цільну кров, відмиті еритроцити, еритроцити у плазмі, сироватці, консерванті або фізіологічному розчині

Процедура проводиться в наступній послідовності:

1. Наноситься велика крапля (близько 0,1 мл) реагенту на платівку або планшет.

2. Поруч наноситься невелика крапля (близько 0,03 мл) досліджуваної крові (еритроцитів).

3. Ретельно змішується реагент із кров'ю чистою скляною паличкою.

4. Через 10-20 с пластинка м'яко похитується. Незважаючи на те, що чітка аглютинація настає у перші 30 с, результати реакції слід враховувати через 3 хв після змішування.

5. Результати реакції записуються негайно після закінчення.

За наявності аглютинації досліджувана кров маркується як резус-позитивна, якщо аглютинація відсутня – як резус-негативна. Якщо аглютинація набагато слабша, ніж спостерігається з Rh(D)-позитивними еритроцитами, досліджувана кров належить до підгрупи слабких антигенів Rh – Du. Для уточнення належності такого зразка крові до групи Du дослідження проводять з другим реагентом, що містить IgG (неповні) анти-D антитіла (див. гл. 6.2.2.3).

Реакція аглютинації за допомогою неповних анти-D-антитіл (IgG) у присутності високомолекулярних добавок

Реакція проводиться або зі спеціально підготовленим реагентом, що вже містить підсилювач (універсальний реагент з поліглюкіном або альбуміном для площини), або додають підсилювач в процесі проведення реакції (реакція конглютинації з желатином в пробірці).

Техніка постановки реакції аглютинації на площині не відрізняється від описаної в розділі 6.2.2.1. Однак універсальні реагенти можуть давати хибнопозитивну реакціюз резус-негативними еритроцитами за рахунок високомолекулярних речовин, що містяться в них, а також можуть викликати аглютинацію еритроцитів, покритих антитілами іншої (не антирезус) специфічності. Тому необхідно проведення паралельних тестів з контрольним розчином підсилювача, що використовується, але без анти-0-антитіл. Якщо контрольний розчин викликає аглютинацію еритроцитів, результати тестування не достовірні і слід повторити визначення з іншим реагентом, що містить повні антитіла IgM (краще з моноклональними).

Реакції конглютинації із застосуванням желатину. Для проведення цього тесту можуть бути використані моноклональні реагенти та стандартні ізоімунні антирезус сироватки з неповними антитілами.

1. Вносять у пробірку 1 краплю (близько 0,05 мл) досліджуваної крові або суспензії еритроцитів (приблизно 50%) у сироватці.

2. Додають 2 краплі (0,1 мл) 10% розчину желатину, попередньо підігрітого до розрідження за +46...+48°С.

3. Додають 2 краплі (0,1 мл) реагенту анти-D і змішують.

4. Поміщають пробірку в водяну банюз температурою +46 ... +48 ° С на 5-10 хв або в сухоповітряний термостат при тій же температурі на 30 хв.

5. Доливають у пробірку 5-8 мл фізіологічного розчинута обережно 1–2 рази перевертають закриту пробкою пробірку для перемішування.

6. Визначають наявність аглютинатів, переглядаючи пробірку світ неозброєним оком чи через лупу.

7. Негайно записують результати визначення.

Желатинова проба вимагає обов'язкового проведення наступних контролів:

Зі стандартними резус-позитивними еритроцитами;

Зі стандартними резус-негативними еритроцитами;

З досліджуваними еритроцитами та розчином желатину, але без анти-0-антитіл.

При позитивному результатіаглютинати помітні у вигляді агрегатів різної величини на прозорий фон- Кров є резус-позитивною. При негативному результаті в пробірці агрегатів немає, а видно рівномірно забарвлену непрозору завись еритроцитів – кров є резус-негативною. Якщо спостерігається дрібнозерниста аглютинація, що викликає сумнів, то кров необхідно тестувати в непрямому антиглобуліновому тесті (див. гл.6.2.2.3). Результати желатинової проби є достовірними лише у разі, коли желатин сам не викликає аглютинацію досліджуваних еритроцитів, а результати контролю зі стандартними еритроцитами відповідають очікуваним. У разі неадекватних результатів контролю визначення резус-приналежності слід повторити з використанням іншого реагенту або зразка желатину. Якщо желатин викликає сам по собі аглютинацію досліджуваних еритроцитів, то можна припускати наявність на них антиеритроцитарних антитіл антирезус або іншої специфічності (це спостерігається при гемолітичній хворобі новонароджених, аутоімунної гемолітичної анеміїта деяких інфекційних захворюваннях). У цьому випадку кров має бути спрямована на дослідження до спеціальної серологічної лабораторії.

Непрямий антиглобуліновий тест за допомогою неповних анти-0-антитіл (IgG)

1. Приготувати 2–5% завись тричі відмитих у фізіологічному розчині досліджуваних еритроцитів. Для цього помістити в пробірку 5 крапель (близько 0,25 мл) крові, що досліджується, тричі відмити в 5–10 мл фізіологічного розчину; суспендувати осад еритроцитів у 2–3 мл фізіологічного розчину або, переважно, у 2–3 мл розчину LISS, у якому фіксація антитіл на еритроцитах міцніша і відбувається швидше, ніж у фізіологічному розчині.

2. Внести 1 краплю анти-0-реагенту в чисту марковану пробірку.

3. Додати 1 краплю 2-5% суспензії еритроцитів.

4. Інкубувати суміш при +37°С 30–45 хв (якщо еритроцити зважені у фізіологічному розчині) або 10–15 хв (якщо еритроцити зважені у LISS).

5. Відмити еритроцити 1 раз (у разі використання моноклонального реагенту) або 3 рази (у разі використання ізоімунної анти-0-сироватки) великим об'ємом (5–10 мл) фізіологічного розчину. Одноразове відмивання допустиме лише при використанні моноклональних реагентів. Повністю видалити фізіологічний розчин.

6. Додати до осаду 1 краплю антиглобулінового реагенту та ретельно змішати.

7. Центрифугувати 15-20 с при 2000-3000 об./хв.

8. М'яко ресуспендувати осад та візуально визначити наявність аглютинації.

9. Негайно записати результати визначення.

За відсутності аглютинації кров є резус-негативною. При позитивної реакції- резус-позитивною; підгрупи Du можуть викликати слабку аглютинацію навіть у цьому високочутливому тесті. Перш ніж віднести донора Du до резус-позитивних, слід підтвердити висновок контрольним дослідженням антиглобулінової сироватки зі стандартними еритроцитами. Якщо контрольний тест є позитивним, інтерпретація не є достовірною. У цьому випадку реципієнт повинен отримувати тільки резус-негативну кров (еритроцити), а кров такого донора не повинна використовуватися для трансфузій до остаточного з'ясування резус-приналежності.

Аглютинація еритроцитів, оброблених протеолітичними ферментами, за допомогою неповних анти-0-антитіл (IgG)

Неповні антитіла здатні викликати пряму аглютинацію в сольовому середовищі еритроцитів, оброблених бромеліном, папаїном, трипсином та іншими протеазами. Цей метод високочутливий і надійний для виявлення слабких форм D-антигена. Він використовується, головним чином, при автоматичному визначенні груп крові в системах "Gruppomatic", в яких забезпечується стандартність обробки еритроцитів ферментами і спеціально підбирається необхідне розведення реагенту, так як для цього тесту характерний феномен прозони (пригнічення аглютинації надлишком антитіл).

При неавтоматизованому визначенні груп крові метод можна використовувати у спеціалізованих серологічних лабораторіях.