Tattiche di infezione da HIV per l'esame immunologico. Metodi di laboratorio per la diagnosi dell'AIDS

Infezione da virus dell’immunodeficienza umana - HIV, è una malattia virale. Distrugge gradualmente alcuni globuli bianchi e può causare la sindrome da immunodeficienza acquisita, l'AIDS.

Il virus dell’immunodeficienza umana (HIV) è un tipo di retrovirus.

• Cos'è un retrovirus?
• Diagnosi di laboratorio dell'HIV
• • Fase asintomatica
  • Stadio di insorgenza dell'AIDS
• Metodi diagnostici dell'HIV
• PCR (reazione della polimerasi)
• Test rapidi
• Tempi e costi della diagnosi dell'HIV

Cos'è un retrovirus?

È DNA genomico e memorizza le informazioni genetiche non solo come DNA (la maggior parte degli altri organismi utilizza solo DNA) ma anche come RNA (acido ribonucleico).

Oggi è consuetudine distinguere le seguenti vie di infezione da HIV:

• contatto sessuale senza l'uso di protezioni
• via di infezione perinatale (osservata nei bambini)
• durante la trasfusione di sangue (trasfusione di sangue)
• quando si usano siringhe contaminate (più spesso nei pazienti tossicodipendenti per iniezione)

Quando l’HIV entra nelle cellule umane, rilascia acido ribonucleico e replica (copia) il DNA dall’RNA dell’HIV utilizzando un enzima chiamato trascrittasi inversa.

Il DNA risultante viene incorporato nel DNA delle cellule infette. Questo processo è inverso, poiché coinvolge le cellule umane per replicare RNA e DNA.

Altri virus a RNA (infezioni), come il poliovirus, il virus dell'influenza, il virus del morbillo, a differenza dei retrovirus, non replicano il DNA dopo essere entrati nella cellula. Questi virus producono repliche di acido ribonucleico dell'RNA originale.

Nelle cellule infette da HIV, ogni volta che avviene la divisione cellulare, oltre al DNA della cellula viene replicato anche il DNA dell'HIV integrato.

La replicazione del DNA dell'HIV si trova in uno dei seguenti stati:

• Stato inattivo (nascosto): il virus esiste, ma non ha un effetto dannoso sul corpo umano
• Stato di attivazione: il virus domina la funzione delle cellule infette, produce un gran numero di nuove replicazioni dell'HIV che infettano altre cellule dell'organismo, provocando uno stato di immunodeficienza acquisita persistente

Un aspetto importante dell'intervento terapeutico rimane la diagnosi accurata e tempestiva della malattia.

I primi studi di laboratorio sulla patologia dell'HIV furono condotti più di trentacinque anni fa.

La diagnostica moderna prevede l'uso di metodi immunologici, ematologici e molecolari per rilevare l'agente patogeno virale. I sistemi di test utilizzati nel secolo scorso avevano capacità piuttosto limitate e determinavano il retrovirus di tipo 1.

Le loro capacità tecniche non andavano oltre la determinazione dell'immunoglobulina G.

Con lo sviluppo della diagnostica di laboratorio e il miglioramento dei metodi di ricerca, è diventato possibile rilevare entrambi i tipi di virus.
L’emergere di sistemi di test di terza generazione ha notevolmente ampliato le capacità diagnostiche.

Ora il rilevamento del virus di tipo 1-2 è possibile già poche settimane dopo l'infezione. Tale diagnostica moderna consente di prescrivere rapidamente un trattamento antiretrovirale.

Riduce di dieci volte il rischio di sviluppare uno stadio più grave del virus, l'AIDS. Le invenzioni recenti includono sistemi di test di quarta generazione. Sono metodi di ricerca combinati.

Il sistema viene utilizzato per rilevare gli anticorpi contro entrambi i tipi di HIV e contemporaneamente rilevare l'antigene p24 (proteina della parete dell'estere nucleosidico retrovirale). Tali capacità dei sistemi di test di quarta generazione riducono il tempo della “finestra sierologica” di almeno una settimana. (Questo è il periodo in cui l'HIV è presente nel corpo senza la comparsa di anticorpi).

Diagnosi di laboratorio dell'HIV

L’esecuzione di test di laboratorio è l’aspetto principale della diagnosi della malattia da HIV e della prescrizione di una terapia adeguata. Inoltre, la diagnostica monitora la qualità del trattamento e lo stato di salute del paziente.

Regolari esami di laboratorio permettono di:

• controllare il corso del processo infettivo
• aggiustare il regime terapeutico
• monitorare le reazioni avverse derivanti dall'assunzione di farmaci

Un test HIV standard prevede il test del sangue del paziente.

Il materiale biologico principale è il sangue venoso, che viene raccolto al mattino, prima dei pasti.
Non è richiesta alcuna preparazione preliminare o speciale da parte del paziente.

La preparazione principale è evitare di bere alcolici per diversi giorni. Se possibile, interrompi l'assunzione di antibiotici e antivirali 5-7 giorni prima del test.

L'esame clinico e immunologico può essere effettuato in una clinica pubblica. Ma in questo caso sarà necessaria l'impegnativa del medico di base o del medico di famiglia.

Oggi la diagnosi dell'HIV, dell'AIDS e delle malattie sessualmente trasmissibili viene praticata sempre più in centri di laboratorio indipendenti, dove è possibile sottoporsi al test in modo anonimo.

Durante la diagnosi, al paziente viene assegnato un numero speciale, noto solo a lui e al personale dell'istituto. Tuttavia, in questo caso c'è un certo svantaggio.

I risultati dei test non possono essere trasferiti alla clinica per il successivo ricovero del paziente. Non vengono forniti al ginecologo/venereologo/infettivologo e non possono essere iscritti nel registro delle patologie infettive (ORUIB).

Clinica della malattia: come si manifesta il retrovirus

Il principale metodo di trasmissione della malattia da HIV:

• contatto sessuale
• da madre a figlio (per via transplacentare, attraverso il canale del parto, latte materno)
• durante la procedura di trasfusione di sangue, trapianto di organi
• quando si somministrano farmaci per via endovenosa con una siringa non sterile

In altre parole, finché non c’è contatto con sangue o fluidi corporei, la probabilità di contrarre l’HIV nella vita di tutti i giorni è quasi pari a zero.

La quantità di virus contenuta nei fluidi secretori come la saliva o le lacrime è molto piccola. Anche se il virus è presente in queste secrezioni, non è stata ancora segnalata infezione dalla condivisione di una vasca da bagno o di un asciugamano.

L'HIV è un virus abbastanza “fragile” che viene inattivato non appena lascia il corpo nell'ambiente esterno. Le manifestazioni cliniche del processo patologico dipendono dallo stadio dell'infezione.

Stadio iniziale dell'infezione (fase acuta)

La prima manifestazione dell'infezione si osserva 2-3 settimane dopo l'infezione.

Durante questo periodo, i sintomi dell'HIV sono: febbre, mal di gola, dolori muscolari, eruzioni cutanee, linfoadenopatia, mal di testa, affaticamento, ecc. Compaiono sintomi di influenza o mal di gola (di solito di tipo monocitico).

I primi segni della malattia possono accompagnare il paziente da diversi giorni a un mese o più e in molti casi scompaiono spontaneamente.
La diagnosi della malattia durante questo periodo è considerata la più vantaggiosa per il paziente. Il trattamento con farmaci antiretrovirali nella fase iniziale dell'infezione mostra i risultati più positivi.

Importante! I pazienti con qualsiasi infezione a trasmissione sessuale (sifilide, gonorrea, HPV, clamidia, ecc.) devono sottoporsi a un test HIV. Nei pazienti con retrovirus viene spesso rilevato un decorso parallelo di malattie sessualmente trasmissibili.

Fase asintomatica

La quantità di virus nel sangue, che ha raggiunto il picco a causa della risposta immunitaria (induzione di CTL o produzione di anticorpi) dopo l'infezione, dopo 6-8 mesi diminuisce fino a un certo livello e diventa asintomatica. Questa fase può durare diversi anni.

Dopo di che viene sostituito da periodi di esacerbazione: sintomi influenzali, malessere, linfonodi ingrossati. Durante questo periodo, il paziente è più vulnerabile che mai ad altre patologie infettive: malattie sessualmente trasmissibili, epatite, herpes, tubercolosi.

Stadio di insorgenza dell'AIDS

Senza trattamento anti-HIV dopo l’infezione, l’infezione progredisce e le cellule T CD4-positive diminuiscono rapidamente. Quando la conta dei CD4 è pari o inferiore a 200/mm3, le malattie infettive opportunistiche come la polmonite e la tubercolosi hanno una probabilità del 90% di svilupparsi.

Inoltre, se il numero di linfociti CD4 è inferiore a 50/mm3, esiste un'alta probabilità di sviluppare infezione da citomegalovirus, micobatteriosi atipica (nel 93% dei casi), linfomi primari del sistema nervoso centrale e tumori maligni. I pazienti sperimentano una forte diminuzione dell'appetito, perdita di peso fino all'anoressia, costanti disturbi della defecazione con predominanza di diarrea, debolezza e simili.

Eziologia, patogenesi, epidemiologia: l'HIV è un virus della famiglia dei patogeni contenenti RNA che colpisce le cellule del sistema immunitario, provoca lo sviluppo dell'AIDS, infezioni opportunistiche e oncologia. Secondo le statistiche del 2011, nel mondo ci sono 62 milioni di pazienti con diagnosi di HIV.

Finché il paziente è in terapia antiretrovirale, la carica virale può essere soppressa in misura significativa.
Ma sfortunatamente è impossibile eliminare completamente il virus dal corpo. Pertanto, è estremamente importante diagnosticare la malattia il più rapidamente possibile e iniziare un trattamento adeguato.

Metodi diagnostici dell'HIV

Le misure diagnostiche per rilevare l’infezione da HIV comprendono due fasi:

• identificazione del fatto di infezione (presenza di un retrovirus nel corpo)
• determinare lo stadio del processo (da quanto tempo si è verificata l'infezione e quanto gravemente sono state colpite le cellule del sistema immunitario)

I risultati diagnostici ti permetteranno di decidere le tattiche terapeutiche e di prevedere l'ulteriore decorso della malattia.

Esistono vari metodi sierologici per individuare patologie infettive, virali e batteriche. Quando si diagnostica l'HIV, vengono solitamente utilizzati i seguenti test sierologici.

ELISA (saggio immunoassorbente legato all'enzima)

È l'esame più frequentemente prescritto quando è necessario confermare/smentire la presenza di un retrovirus nell'organismo.

L'analisi si basa sulla determinazione degli anticorpi contro il virus, che si formano quando l'agente patogeno entra nel corpo umano. Il contenuto informativo del metodo diagnostico raggiunge il 96%.

Tuttavia, se lo studio viene condotto nella fase di assenza di anticorpi, si può ottenere un risultato falso positivo. In questo caso, viene prescritto un test ELISA ripetuto dopo 2-3 mesi.
Ma è molto più opportuno condurre un'analisi PCR, in grado di rilevare l'infezione nelle prime fasi.

È inoltre possibile ottenere un risultato falso positivo se il paziente ha:

• patologie autoimmuni
• infezioni croniche
• malattie oncologiche

In un altro caso, questo risultato può essere ottenuto in presenza delle prime fasi della gravidanza.

Immunoblotting (Western Blot)

La specificità dell'analisi è finalizzata all'identificazione delle proteine ​​dell'infezione da HIV.

In genere, la diagnosi viene eseguita come test di conferma. Se il risultato è positivo, permette di fare una diagnosi definitiva di “virus dell’immunodeficienza umana”.

Di norma, l'immunoblotting fornisce tre possibili risultati: positivo, negativo e dubbio. Nei primi due casi la decodifica è semplice: l'HIV è assente/presente.

Una variante discutibile di solito significa la presenza dell'HIV nel corpo. Ma con l'infezione non più di tre mesi fa, quando il corpo non ha avuto il tempo di produrre l'intera gamma di anticorpi.

Inoltre, ottenere un risultato discutibile è tipico dei pazienti affetti da tubercolosi, patologie maligne, che hanno subito ripetute trasfusioni di sangue.

PCR (reazione della polimerasi)

L'essenza del metodo è determinare il DNA del virus e il suo RNA. È il metodo più informativo e accurato per il rilevamento degli agenti patogeni.

Può rilevare l'HIV nelle prime fasi dell'infezione, anche prima della formazione di anticorpi contro il retrovirus. La sensibilità della PCR è del 99%, è quasi impossibile ottenere un risultato falso.

La reazione della polimerasi viene prescritta al paziente allo scopo di:

• indicare la presenza o l'assenza del virus HIV nel corpo umano se i risultati ottenuti in altri test di laboratorio sono discutibili
• identificazione del tipo di retrovirus (HIV-1, HIV-2), nonché per stabilire il carico sul corpo causato dal virus
• stabilire lo status di un bambino nato da una madre malata
• rilevamento di un agente patogeno nel sangue, che verrà successivamente utilizzato per la trasfusione

La PCR è l'analisi più accurata, in grado di rilevare un retrovirus 7-10 giorni dopo l'ingresso nel corpo.
In questo caso, la precisione del risultato in questo momento sarà del 98-99%.

La PCR presenta però alcune peculiarità, per questo motivo può essere prescritta più volte. Grazie alla sua elevata sensibilità, l'analisi è in grado di rispondere non solo ai retrovirus. Ma anche ai processi infettivi più piccoli che si verificano nel corpo. Pertanto, non viene effettuata una diagnosi finale dopo una singola reazione della polimerasi.

La prossima caratteristica della PCR è la necessità di attrezzature moderne e costose. Pertanto, l'analisi non viene effettuata nelle cliniche pubbliche. I test vengono eseguiti in laboratori moderni, dove il costo dell'analisi può partire da 1000 rubli.

Test rapidi

Prescritto in situazioni di emergenza quando è urgentemente richiesto un intervento chirurgico.

Il materiale biologico per la ricerca è l'urina. Il test rapido, secondo alcuni esperti, ha una precisione fino al 96%, ma è comunque un test aggiuntivo. Sulla base dei risultati di questo studio, non viene fatta alcuna diagnosi.

Nei casi obbligatori, viene eseguito ELISA o PCR.

Tempi e costi della diagnosi dell'HIV

Quanto tempo ci vorrà per ottenere un'analisi finita?

Una risposta dal centro di laboratorio sui risultati dell'analisi può essere ricevuta dopo alcuni giorni, a seconda del carico di lavoro dell'istituto.

Inoltre, molti centri dispongono di un servizio aggiuntivo di “test urgenti”, che consente di ottenere i risultati dopo poche ore.

Per quanto riguarda la politica dei prezzi, il costo dipenderà dal laboratorio scelto e dalla metodologia di ricerca.
Quindi, il costo può partire da 500 rubli e raggiungere 10.000-15.000.

Il prezzo del Western Blot parte da 2500 rubli e può raggiungere i 3000-4000. Puoi ottenere il risultato finale dopo 2-5 giorni.

Se viene eseguita la PCR in tempo reale per determinare entrambi i tipi di retrovirus, nonché il loro RNA e DNA, il costo può raggiungere i 5.000 rubli e oltre. La durata della diagnosi va dai 5 ai 10 giorni.

Secondo l'attuale legge della Federazione Russa, gli studi immunologici condotti nelle istituzioni governative sono forniti gratuitamente. Il test HIV è obbligatorio per le pazienti durante la gravidanza, per le pazienti nel periodo preoperatorio e per i donatori di organi o parti di tessuti.

La diagnosi dell'infezione da HIV comprende due fasi: stabilire il fatto reale dell'infezione da HIV e determinare lo stadio della malattia. La determinazione dello stadio segue inestricabilmente il chiarimento della natura del decorso della malattia, quindi la formazione di una prognosi per un dato paziente, nonché la scelta delle tattiche terapeutiche.

Come è noto, la diagnosi di qualsiasi malattia infettiva si basa sul confronto di dati epidemiologici, clinici e di laboratorio e l'esagerazione del significato di uno dei gruppi di questi dati può portare a errori diagnostici.

Criteri epidemiologici per l'infezione da HIV .

Il primo passo nella diagnosi dell'infezione da HIV è la raccolta dell'anamnesi epidemiologica e di altri dati epidemiologici sul paziente esaminato. La mancanza di dati epidemiologici può complicare notevolmente la diagnosi dell’infezione da HIV e ostacolare l’attuazione di misure antiepidemiche.

I criteri epidemiologici possono talvolta essere decisivi per formulare la diagnosi di infezione da HIV, ma possono anche avere un valore ausiliario. Il criterio per un'elevata probabilità di infezione è l'individuazione nella persona esaminata di fattori di rischio di infezione come la trasfusione di sangue di donatore ricevuto da una persona infetta da HIV, la nascita di un bambino infetto da HIV da parte della donna esaminata. Esiste un'alta probabilità di infezione se il soggetto nasce da una madre infetta da HIV, ha rapporti sessuali con una persona infetta da HIV o condivide l'uso di farmaci per via parenterale con una persona infetta da HIV. Un certo rischio di infezione viene rilevato durante interventi parenterali affidabili, che vengono eseguiti con strumenti probabilmente contaminati dall'HIV (cioè nei focolai nosocomiali e simili di infezione da HIV con trasmissione parenterale dell'HIV).

Un notevole rischio di infezione può essere discusso nei casi in cui il soggetto riferisca rapporti sessuali o uso di farmaci per via parenterale in aree in cui l'HIV è significativamente diffuso nella fascia di popolazione a cui appartiene il soggetto.

Allo stesso tempo, i rapporti sessuali e l’uso di droghe in aree con una bassa prevalenza di infezione da HIV non escludono la possibilità di infezione da HIV.

L’assenza di fattori di rischio affidabili per l’infezione da HIV può mettere in dubbio i dati di laboratorio. In questi casi, si consiglia di ripetere i test di laboratorio.

Criteri clinici per l'infezione da HIV.

La diagnosi precoce dell’infezione da HIV garantisce il trattamento tempestivo del paziente e l’adozione di misure preventive durante l’epidemia, impedendo la trasmissione involontaria del virus da una persona infetta a una persona sana. Infine, la diagnosi precoce consente una visita medica tempestiva, assistenza psicologica e riabilitazione sociale. I primi successi nel trattamento dei pazienti consentono, con una diagnosi precoce, di prolungare significativamente la vita dei pazienti e persino di sperare in una cura.

La difficoltà di una diagnosi precoce basata sul quadro clinico risiede nella aspecificità e polimorfismo dei sintomi nello stadio II, per non parlare dell'assenza di segni clinici nello stadio I. Tuttavia in tutti i casi si riscontra stanchezza immotivata, presenza di sudorazione notturna, mal di testa, soprattutto sullo sfondo di febbre a breve termine ( 3-10 giorni) con una temperatura di 38-38,50 C, accompagnata da tonsillite, sindrome da diarrea prolungata, perdita di peso in breve tempo, è necessario prima di tutto escludere l'HIV infezione. La diagnosi in questo periodo è aiutata dall'identificazione di varie eruzioni cutanee (macchie, papule, roseola, pustole) o foruncolosi durante un esame obiettivo. La presenza di linfoadenopatia, anche in caso di ingrossamento di un gruppo di linfonodi, e ancor più in caso di linfoadenopatia generalizzata, con un grado maggiore di probabilità consente di sospettare clinicamente l'infezione da HIV. La malattia è caratterizzata soprattutto dall'ingrossamento dei linfonodi cervicali posteriori, sottomandibolari, sopra e succlavi, ascellari e ulnari. Di norma aumentano di dimensioni fino a 2-5 cm di diametro, sono indolori, hanno una consistenza densa ed elastica e occasionalmente si fondono in un conglomerato. È molto tipico che l'infezione da HIV si allarghi più di un nodo, più di un gruppo (ad eccezione di quelli inguinali), per più di 3 mesi.

Spesso nella fase iniziale della malattia, presenza di sintomi psico-neurologici: ansia, depressione, andatura instabile, diminuzione dell'acuità visiva, convulsioni con segni di danno alla sfera psico-emotiva (compromissione della memoria, dimenticanza, comportamento inappropriato, ottundimento delle emozioni). Ai tratti più caratteristici le prime fasi dell’infezione da HIV includono:

1. Diminuzione del peso corporeo inferiore al 10%;

2. Alterazioni della pelle e delle mucose (dermatite seborroica, follicolite, prurigo, psoriasi, infezioni fungine delle unghie, ulcere orali ricorrenti, gengivite necrotizzante);

3 . Herpes zoster nelle persone di età inferiore ai 50 anni;

4. Infezioni ricorrenti del tratto respiratorio superiore;

IN stadio intermedio Una malattia caratterizzata da un quadro clinico di superinfezione conclamata formata a seguito di immunodeficienza è più caratteristica di:

1 . Perdita progressiva del peso corporeo superiore al 10%;

2 . Diarrea di origine sconosciuta, che dura più di 1 mese;

3 . candidosi orale;

4 . leucoplachia;

5. Tubercolosi polmonare;

6. Neuropatia periferica;

7. Forme localizzate del sarcoma di Kaposi;

8. Herpes zoster diffuso;

9. Infezione batterica grave e ricorrente (polmonite, sinusite, piomiosite).

Per fase avanzata, che consentono di diagnosticare l'infezione da HIV, o comunque di effettuare diagnosi differenziali, comprendono:

1. Polmonite da pneumocystis;

2 . Toxoplasmosi;

3. Criptococcosi;

4. Infezione da CMV;

5. Herpes simplex;

6. Leucoencefalopatia multifocale progressiva;

7. Istoplasmosi;

8. Esofagite da candida;

9. Infezione MAC;

10. Setticemia da Salmonella;

11. Tubercolosi extrapolmonare;

12. Linfoma, sarcoma di Kaposi;

13. cachessia;

14. Encefalopatia da HIV.

Nel 1988, l'OMS ne propose l'esecuzione a fini diagnostici clinici punteggio dei sintomi disponibile in un paziente con sospetta infezione da HIV:

Linfoadenopatia generalizzata persistente 0

Cambiamenti nella pelle e nelle mucose 1

Perdita di peso 1

Grave stanchezza 1

Herpes semplice 2

Diarrea che dura più di 1 mese. 4

Febbre che dura più di 1 mese. 4

Perdita di peso corporeo superiore al 10% 4

Tubercolosi polmonare 5

Infezione batterica ricorrente 5

Leucoplachia orale 5

Stomatite, mughetto orale 5

Sarcoma di Kaposi localizzato 8

Cachessia 12

In questo caso, la somma dei punti da 0 a 3 viene valutata poiché la probabilità di infezione da HIV è molto bassa, 4 -11 punti - la malattia è probabile e da 12 e oltre - molto probabile.

In generale, la diagnosi clinica dell'infezione da HIV è, prima di tutto, la diagnosi dello spettro della patologia associata all'AIDS in un paziente con immunodeficienza secondaria. Poiché le malattie indicative dell’HIV comprendono 23 forme nosologiche, l’approccio sindromico alla diagnosi è il più appropriato. Il paziente ha quasi sempre una sindrome di intossicazione generale (debolezza immotivata, letargia, affaticamento) che si sviluppa sullo sfondo di febbricola prolungata o febbre di origine sconosciuta, spesso notturna e mattutina, accompagnata da sudore abbondante. La sindrome della linfoadenopatia periferica generalizzata immotivata è costante, nel 20% accompagnata da epatosplenomegalia di varia gravità. Una delle principali sindromi della malattia è la sindrome della patologia broncopolmonare, sebbene nei casi avanzati della malattia si sviluppino lesioni profonde del tessuto polmonare sotto forma di polmonite da Pneumocystis, poiché la pneumocystis si sviluppa sullo sfondo di un'immunodeficienza profonda. Ma con una durata superiore a 1 mese, la sindrome della diarrea immotivata è classificata come ad esordio precoce ed è caratterizzata da resistenza alla terapia farmacologica. Una delle sindromi dell'infezione da HIV è l'artralgia ondulatoria di eziologia sconosciuta. Le manifestazioni più caratteristiche della malattia comprendono la sindrome delle lesioni della pelle e delle mucose, manifestata da un rash maculopapulare aspecifico, eczema resistente agli steroidi e impetigine da stafilococco. Le manifestazioni dermatologiche comprendono anche lesioni fungine ricorrenti (micosi, candidosi), batteriche (follicolite, foruncolosi, idrosadenite), virali (herpes) della pelle e delle mucose. Infine, l'infezione da HIV è caratterizzata anche da neoplasie, principalmente sotto forma di sarcoma di Kaposi e linfoma e anche alcuni altri tipi di tumori.

La presenza di almeno due sintomi clinici e due sintomi clinici di laboratorio (leucolyphoneutropenia, ipogammaglobulinemia) tra i sintomi sopra menzionati in un paziente consente di diagnosticare l'infezione da HIV con un alto grado di sicurezza. Ma allo stesso tempo, se due delle sindromi molto comuni riscontrate nei pazienti, come febbre e linfoadenopatia, persistono per un mese o più, diarrea persistente immotivata, diminuzione del peso corporeo superiore al 10%, o profusa sudorazione notturna danno origine alla diagnosi diagnosi e esame di laboratorio approfondito.

IN fase 2a la malattia può essere sospettata solo dal sintomo di linfoadenopatia generalizzata persistente in un paziente a rischio o in presenza di una storia epidemiologica.

IN fase 2b Il benessere somatico (precoce o lieve) e la normale attività sono ancora preservati. Le lesioni della pelle e delle mucose non sono gravi, le infezioni ricorrenti delle vie respiratorie non sono generalizzate, la perdita di peso non supera il 10%.

Secondo le raccomandazioni dell'OMS, una diagnosi clinica affidabile dell'infezione da HIV negli adulti e nei bambini è possibile in presenza di una delle 12 malattie indicatrici dell'AIDS: 1) candidosi dell'esofago, della trachea, dei bronchi e dei polmoni; 2) criptococcosi extrapolmonare; 3) criptosporidiosi con diarrea da più di un mese; 4) infezione da citomegalovirus di qualsiasi organo (ad eccezione e in aggiunta a fegato, milza e linfonodi in un paziente di età superiore a 1 mese); 5) infezione causata dal virus dell'herpes simplex, persistente per più di 1 mese in un paziente di età superiore a 1 mese; 6) Sarcoma di Kaposi in un paziente di età inferiore a 60 anni; 7) linfoma cerebrale in un paziente di età inferiore a 60 anni; 8) polmonite interstiziale linfocitaria in un bambino di età inferiore a 13 anni, 9) infezione disseminata causata da batteri del gruppo Micobacterium avium intracellulare o M. Kansassii; 10) Polmonite da Pneumocystis; 11) leucoencefalopatia multifocale progressiva; 12) toxoplasmosi del sistema nervoso centrale in pazienti di età superiore a 1 mese. La presenza di una di queste malattie consente di diagnosticare l'infezione da HIV in assenza di un test sierologico di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) del sangue o anche in presenza di un risultato sieronegativo.

Non meno difficile è la differenziazione delle fasi della malattia, cioè differenziazione degli stadi secondo criteri clinici. Secondo gli esperti del CDC (USA), il criterio più obiettivo è il numero di cellule T-helper e non le manifestazioni cliniche, poiché molte di queste condizioni si verificano spesso in individui non infetti dall'HIV. Nel 1991, il Centro ha stabilito che una diagnosi di AIDS può essere fatta se: a) la persona infetta ha una delle 23 condizioni associate all'AIDS oppure b) è infetta da HIV e ha meno di 200 cellule CD4+/mm3.

Criteri di laboratorio per l'infezione da HIV.

Dovrebbero essere testati per l’infezione da HIV:

2 . Soggetti con quadro clinico di esofagite candidale, candidosi bronchiale e polmonare, coccidioidomicosi disseminata o extrapolmonare, polmonite da Pneumocystis, criptococcosi extrapolmonare, criptosporidiosi con diarrea per più di 1 mese, danni da citomegalovirus agli organi interni tranne fegato, milza, linfonodi nei pazienti anziani superiore a 6 mesi, retinite da citomegalovirus con perdita della vista, infezione erpetica con ulcere multifocali della durata di oltre 1 mese, bronchite, polmonite o esofagite, herpes zoster ricorrente, istoplasmosi disseminata o extrapolmonare, tubercolosi polmonare o extrapolmonare, isosporiasi con diarrea della durata di oltre 1 mese, diffusa o infezioni extrapolmonari da MAC, leucoencefalopatia multifocale progressiva, toxoplasmosi cerebrale, setticemia da salmonella, sarcoma di Kaposi, linfoma, polmonite interstiziale linfoide (nei bambini)

Attualmente, per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV vengono utilizzati vari metodi per rilevare l'HIV, gli antigeni dell'HIV e il materiale genetico, nonché metodi per rilevare gli anticorpi contro l'HIV. Tutti questi metodi hanno un'efficacia diversa, richiedono attrezzature diverse e diversi livelli di formazione del personale. I risultati di questi studi richiedono un’interpretazione competente.

La diagnosi precoce dell’infezione da HIV è essenziale. Da ciò dipende la complessità della terapia e lo sviluppo di complicanze patologiche. Oggi esistono molti metodi di ricerca innovativi per identificare una diagnosi così terribile. Questo è esattamente ciò di cui parleremo in seguito.

Quali metodi esistono per diagnosticare l’infezione da HIV?

In effetti, esistono molti metodi per diagnosticare l’HIV. In media, sono divisi in sottogruppi: ricerca di laboratorio, esame differenziale e hardware. Inoltre, è necessario tenere conto delle fasi delle misure diagnostiche. Di tutto questo e di altri aspetti parleremo più approfonditamente in seguito.

Diagnostica di laboratorio

Il metodo diagnostico in esame richiede un laboratorio altamente specializzato. In tali condizioni, si possono identificare le seguenti indicazioni:

• Vengono determinati anticorpi, antigeni patogeni e complessi immunitari.
• Quando viene rilevato un virus, viene coltivato e vengono rilevati materiale genomico ed enzimi.
• Viene valutata la funzionalità del sistema immunitario.
• Viene effettuata la sorveglianza epidemiologica e il monitoraggio della prevalenza del virus dell'immunodeficienza umana.
• Si studia la dinamica della distribuzione e si determina la popolazione.
• È possibile determinare la sicurezza del trapianto e della trasfusione di sangue.

Se viene rilevato il corrispondente agente patogeno dell'HIV, il paziente viene inviato per un ulteriore esame. Successivamente, la persona viene registrata per un ulteriore monitoraggio della progressione della malattia.

Diagnosi differenziale

La malattia si differenzia per vari motivi:

• Ai primi sintomi dell'infezione da HIV, che è nella fase acuta, soprattutto se è presente una sindrome simile alla mononucleosi. La diagnosi si basa su patologie come la mononucleosi infettiva, la sifilide, la rosolia, l'adenovirus, la leucemia acuta, la yersiniosi, l'ipercheratosi.
• Se l'HIV entra nello stadio di linfoadenopatia generalizzata di natura persistente, vengono differenziate le malattie in cui i linfonodi si ingrossano. Ad esempio, leucemia linfocitica, sifilide, toxoplasmosi, linfogranulomatosi. In questa fase i sintomi del paziente diventano più pronunciati.
• Se vengono rilevate patologie secondarie, l'immunodeficienza che si è verificata durante l'assunzione di determinati gruppi di farmaci viene differenziata: radioterapia, uso di glucocorticosteroidi e farmaci citostatici. L’immunità è significativamente ridotta anche in malattie come il mieloma, la leucemia linfoide, il cancro, ecc.
• Se l'HIV è localizzato nella cavità orale, le malattie della mucosa orale vengono differenziate.

Diagnostica espressa

Oggi sono stati sviluppati anche test rapidi, grazie ai quali è possibile determinare la presenza dell'infezione da HIV entro 15 minuti. Ce ne sono molti specie:

• Il test più accurato è immunocromatografico. Il test consiste in strisce speciali su cui viene applicato sangue capillare, urina o saliva. Se vengono rilevati anticorpi anti-HIV, la striscia presenta una linea colorata e una linea di controllo. Se la risposta è no, si nota solo la linea.
• Kit per uso domestico "OraSure Technologies1". Sviluppatore - America. Questo test è stato approvato dalla FDA.
• Esistono altri test rapidi, ma non hanno l'approvazione degli specialisti e quindi non sono consigliati per i test.

Se viene rilevata una reazione positiva al virus dell'immunodeficienza umana, è necessario condurre inoltre un esame appropriato in ambito clinico.

Diagnosi precoce

La diagnosi precoce dell'HIV esiste per determinare tempestivamente i rischi di danno immunitario. Grazie a ciò, la malattia viene fermata nelle fasi iniziali, riducendo al minimo l'infezione di altri organi interni.

Per diagnosticare autonomamente la patologia nelle fasi iniziali, prestare attenzione ai sintomi esistenti:

Reazione a catena della polimerasi

La PCR o reazione a catena della polimerasi viene utilizzata per determinare qualsiasi agente patogeno infettivo, compreso il virus HIV. In questo caso viene rilevato il suo RNA e l'agente patogeno può essere rilevato in fasi molto precoci (dopo l'infezione devono trascorrere almeno 10 giorni).

Questa è una diagnosi piuttosto costosa, ma in alcuni casi può dare un risultato falso. Pertanto, quando si esegue il test per l'HIV, vengono utilizzati anche altri metodi.

L'espressione quantitativa della reazione a catena della polimerasi è necessaria per determinare il tasso di sviluppo dell'HIV e delle complicanze come l'AIDS. Ciò consente di determinare tempestivamente la prognosi dell'aspettativa di vita di un paziente con infezione da HIV.

Macchiazione immunitaria

L'immunoblotting è l'ultimo metodo per esaminare un paziente prima di fare una diagnosi accurata. La tecnica si basa sull'uso di una striscia specializzata (nitrocellulosa) con proteine ​​virali. Il medico raccoglie il sangue venoso e poi lo invia all'elaborazione. Dopo questo processo, le proteine ​​del siero di latte vengono separate in una sostanza gelatinosa in base al peso molecolare e alla carica. A tale scopo vengono utilizzate apparecchiature con un campo elettrico attivo. Quindi la suddetta striscia viene posta in questo gel e tamponata, cioè sottoposta a tamponamento. Questo viene fatto in una camera specializzata.

Il risultato è determinato dal legame delle proteine ​​del sangue alle proteine ​​applicate su una striscia di nitrocellulosa. Se l'HIV è presente nel corpo del paziente, appaiono delle linee singole. Esistono alcuni indicatori per identificare le linee che segnalano la presenza dell'HIV. Ma ci sono anche cifre sottostimate. In questo caso, esiste il rischio di sviluppare lo stadio iniziale del virus dell'immunodeficienza umana, la formazione di tumori oncologici, la tubercolosi e la trasfusione di sangue.

Prova ELISA

Il test ELISA è un metodo di screening per sospetta infezione da HIV. La ricerca viene effettuata in condizioni di laboratorio. È lì che vengono create proteine ​​specifiche della malattia in grado di catturare le proteine ​​prodotte dal corpo umano. Quando si interagisce con i reagenti, il colore dell'indicatore cambia. Pertanto, non viene rilevato l’agente patogeno stesso, ma gli anticorpi contro il virus. Questo test può rilevare il virus dell’immunodeficienza umana nelle prime fasi di sviluppo.

Esistono diversi tipi di test ELISA, ma vengono utilizzati solo gli ultimi sviluppi: 3a e 4a generazione. La tecnica si basa sulla raccolta del fluido sanguigno da una vena. C'è una certa preparazione: il paziente non deve mangiare cibo per 8 ore prima del test. Pertanto, il sangue viene raccolto a stomaco vuoto al mattino.

Come viene effettuata la diagnosi durante il periodo di incubazione?

Il periodo di incubazione del virus HIV è di 90 giorni. Durante questo periodo è difficile rilevare la presenza di patologia, ma ciò può essere fatto utilizzando la PCR.

Successivamente, per un anno, la persona è sotto stretta sorveglianza medica e viene sottoposta a numerosi esami. Solo dopo questo periodo si potrà stabilire con certezza la diagnosi di HIV.

Caratteristiche della diagnosi nei bambini

Se un bambino nasce da una donna con diagnosi di virus dell'immunodeficienza umana, il bambino viene esaminato durante i primi 3 anni di vita. Il fatto è che durante questo periodo gli anticorpi della madre possono essere presenti nel fluido sanguigno del bambino. Ma anche gli esami del sangue non confermano l’infezione. Naturalmente, ci sono molti casi in cui la malattia viene diagnosticata immediatamente dopo la nascita. Ulteriori informazioni sulla gravidanza con infezione da HIV.

I primi test HIV vengono prelevati da un bambino il secondo giorno dopo la nascita. Poi dopo aver raggiunto i 2 mesi, poi ogni 4 mesi.

Per rilevare la patologia durante l'infanzia, vengono utilizzati metodi di esame sierologico e PCR. È quest’ultimo tipo di diagnosi della malattia che permette di identificare il DNA e l’RNA del virus nei primi mesi di vita del bambino. Per fare questo viene raccolto il sangue del bambino, che viene successivamente posto in una provetta contenente il conservante EDTA. Il materiale viene poi conservato per 2 giorni ad una temperatura non superiore a 8 gradi. Ma non è consentito congelare il sangue. Può essere utilizzato anche il fluido sanguigno essiccato, ottenuto da sangue intero ed essiccato.

Fasi della diagnostica

Le misure diagnostiche per identificare il virus dell'immunodeficienza umana vengono eseguite in tre fasi principali:

• Smistamento preliminare, noto anche come screening.
• Diagnostica di riferimento.
• Fase di conferma o diagnosi specialistica.

Screening – preselezione

La fase preliminare dell'esame consente di determinare gli anticorpi totali utilizzando un test immunoassorbente legato a un enzima, ovvero ELISA. È possibile ottenere informazioni sulla presenza del virus già 3 mesi dopo l'infezione. Ma ci sono stati casi di rilevamento dell'agente patogeno nelle fasi precedenti, dopo 3 settimane.

Devi sapere che l'ELISA può, in alcune condizioni, dare un risultato falso positivo. Ciò può verificarsi durante la gravidanza, in caso di malattie autoimmuni (psoriasi, reumatismi, lupus, ecc.), della malattia di Epstein-Bar e di altre patologie.

Diagnostica di riferimento

In questa fase vengono utilizzati vari test almeno due volte, massimo tre volte. Se in due casi il risultato è positivo, è necessaria una fase di conferma.

Fase di conferma – esperto

In questa fase, la diagnosi viene effettuata mediante immunoblotting. Gli anticorpi vengono determinati in base a determinate proteine ​​dell'agente patogeno. Il risultato è solitamente accurato, ma ci sono anche casi di falsi positivi. Ciò è possibile nella fase terminale dello sviluppo dell’AIDS e durante la pausa della malattia da HIV. Pertanto, è importante sottoporsi alla procedura anche dopo un certo tempo.

Errori durante la diagnostica

Per quanto paradossale possa sembrare, esiste la possibilità di ottenere un risultato falso positivo. Questo di solito accade con i test domiciliari, soprattutto quando si utilizzano test rapidi. In ambito clinico, questo è possibile solo per alcune malattie o condizioni:

• periodo di gravidanza;
• reazione crociata del corpo;
• disturbi patologici autoimmuni;
• raffreddore nella fase acuta;
• neoplasie oncologiche;
• tubercolosi;
• sclerosi.

La particolarità è che se una persona è infetta da virus e funghi, anche il risultato del test potrebbe essere falso. Ciò è particolarmente vero per le condizioni allergiche.

Preparazione per i test

È molto importante seguire le regole per la preparazione ai test HIV, perché l'accuratezza del risultato dipende da questo:

• Innanzitutto è necessario rivolgersi allo specialista competente affinché possa darvi indicazioni precise sulle attività di preparazione.
• Gli esami del sangue vengono sempre raccolti a stomaco vuoto. Pertanto, non dovresti mangiare nulla prima di andare in clinica. Il tuo ultimo pasto dovrebbe essere consumato entro e non oltre le 21:00.
• È vietato fumare il giorno del test.
• Non dovresti bere alcolici la sera prima.
• Se stai assumendo farmaci, assicurati di consultare il medico in anticipo. Perché è vietato l'uso di molti farmaci prima di fare un test HIV.
• Non è consigliabile condurre un esame ecografico alcuni giorni prima di raccogliere l'analisi.
• Non è consigliabile mangiare cibi eccessivamente grassi o consumare molti dolci uno o due giorni prima della procedura.

Diagnosi dell'infezione da HIV (video)

Puoi saperne di più sui vari metodi diagnostici dell'HIV da specialisti qualificati. Per fare ciò, dovresti guardare il seguente video.

Attualmente, le nuove tecnologie diagnostiche consentono di identificare le cause eziologiche e patogenetiche di molte malattie e di influenzare radicalmente i risultati del trattamento. Forse i risultati più impressionanti derivanti dall’introduzione di queste tecnologie nella pratica clinica sono stati ottenuti nel campo dell’immunologia e della diagnostica delle malattie infettive.

I sistemi di test basati su immunoassorbenti enzimatici e test immunologici a chemiluminescenza possono rilevare anticorpi di varie classi, il che aumenta significativamente il contenuto informativo dei metodi di sensibilità e specificità clinica e analitica per la diagnosi di malattie infettive. Va notato che i progressi più significativi nella diagnosi delle infezioni sono associati all'introduzione nella pratica di laboratorio del metodo della reazione a catena della polimerasi, che è considerato il "gold standard" nella diagnosi e nella valutazione dell'efficacia del trattamento per una serie di malattie infettive malattie.

Vari materiali biologici possono essere utilizzati per la ricerca: siero, plasma sanguigno, raschiamento, biopsia, liquido pleurico o cerebrospinale (CSF). Innanzitutto, i metodi di diagnosi di laboratorio delle infezioni mirano a identificare malattie come l'epatite virale B, C, D, l'infezione da citomegalovirus, le infezioni a trasmissione sessuale (gonorrea, clamidia, micoplasma, ureaplasma), tubercolosi, infezione da HIV, ecc.

L'infezione da HIV è una malattia causata dal virus dell'immunodeficienza umana (HIV), che persiste a lungo nei linfociti, nei macrofagi e nelle cellule del tessuto nervoso, provocando lo sviluppo di un danno lentamente progressivo al sistema immunitario e nervoso del corpo, manifestato da infezioni secondarie, tumori, encefalite subacuta e altre condizioni patologiche.

Gli agenti causali dell'infezione - i virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 e 2 (HIV-1, HIV-2) - appartengono alla famiglia dei retrovirus, una sottofamiglia di virus lenti. I virioni sono particelle sferiche con un diametro di 100-140 nm. La particella virale ha un involucro esterno fosfolipidico, che comprende glicoproteine ​​​​(proteine ​​strutturali) con un certo peso molecolare, misurato in kilodalton. Nell'HIV-1, questi sono gpl60, gpl20, gp41. Il guscio interno del virus, che copre il nucleo, è anche rappresentato da proteine ​​con un peso molecolare noto: p17, p24, p55 (HIV-2 contiene gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

Il genoma dell'HIV contiene RNA e l'enzima trascrittasi inversa (revertasi). Affinché il genoma di un retrovirus si connetta con il genoma della cellula ospite, il DNA viene prima sintetizzato su uno stampo di RNA virale utilizzando la reverseasi. Il DNA provirale viene quindi integrato nel genoma della cellula ospite. L'HIV ha una pronunciata variabilità antigenica, significativamente superiore a quella del virus dell'influenza.

Nel corpo umano, il bersaglio principale dell'HIV sono i linfociti T, che portano sulla loro superficie il maggior numero di recettori CD4. Dopo che l'HIV entra nella cellula utilizzando la reverseasi, il virus sintetizza il DNA a partire dal suo campione di RNA, che viene integrato nell'apparato genetico della cellula ospite (linfociti CD4) e rimane lì per tutta la vita nello stato di provirus. Oltre agli aiutanti dei linfociti T, sono colpiti i macrofagi, i linfociti B, le cellule neurogliali, la mucosa intestinale e alcune altre cellule. La ragione della diminuzione del numero dei linfociti T (cellule CD4) non è solo l'effetto citopatico diretto del virus, ma anche la loro fusione con cellule non infette. Insieme al danno ai linfociti T, i pazienti con infezione da HIV sperimentano l'attivazione policlonale dei linfociti B con un aumento della sintesi di immunoglobuline di tutte le classi, in particolare IgG e IgA, e il successivo depauperamento di questa parte del sistema immunitario. La disregolazione dei processi immunitari si manifesta anche con un aumento del livello di α-interferone, β2-microglobulina e una diminuzione del livello di IL-2. A causa della disfunzione del sistema immunitario, soprattutto quando il numero di linfociti T (CD4) diminuisce a 400 cellule in 1 μl di sangue o meno, si verificano le condizioni per la replicazione incontrollata dell'HIV con un aumento significativo del numero di virioni in vari ambienti del corpo. A causa del danneggiamento di molte parti del sistema immunitario, una persona infetta dall'HIV diventa indifesa contro gli agenti patogeni di varie infezioni.

Sullo sfondo di una crescente immunosoppressione si sviluppano gravi malattie progressive che non si verificano in una persona con un sistema immunitario normalmente funzionante. Si tratta di malattie che l’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) ha definito come malattie che contrassegnano l’AIDS o che definiscono l’AIDS.

Malattie che definiscono l’AIDS

Il primo gruppo - malattie inerenti solo all'immunodeficienza grave (livello CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Il secondo gruppo è costituito da malattie che possono svilupparsi sia sullo sfondo di una grave immunodeficienza, sia in alcuni casi senza di essa.

Pertanto, in questi casi è necessaria la conferma di laboratorio della diagnosi.

Primo gruppo:

• candidosi dell'esofago, della trachea, dei bronchi;
• criptococcosi extrapolmonare;
• criptosporidiosi con diarrea per più di 1 mese;
• lesioni da citomegalovirus di vari organi diversi da fegato, milza o linfonodi in un paziente di età superiore a 1 mese;
• infezione causata dal virus dell'herpes simplex, manifestata da ulcere sulla pelle e sulle mucose che persistono per più di 1 mese, nonché bronchite, polmonite o esofagite di qualsiasi durata, che colpisce un paziente di età superiore a 1 mese;
• sarcoma di Kaposi generalizzato in pazienti di età inferiore a 60 anni;
• linfoma cerebrale (primario) in pazienti di età inferiore a 60 anni;
• polmonite interstiziale linfocitaria e/o displasia linfoide polmonare nei bambini di età inferiore a 12 anni;
• infezione disseminata causata da micobatteri atipici (micobatteri del complesso M. aviumintracellulare) con localizzazione extrapolmonare o localizzazione (oltre ai polmoni) nella pelle, linfonodi cervicali, linfonodi delle radici dei polmoni;
• Polmonite da pneumocystis;
• leucoencefalopatia multifocale progressiva;
• toxoplasmosi cerebrale in pazienti di età superiore a 1 mese.

Secondo gruppo:

• infezioni batteriche, combinate o ricorrenti, nei bambini di età inferiore a 13 anni (più di due casi in 2 anni di osservazione): sepsi, polmonite, meningite, danni alle ossa o alle articolazioni, ascessi causati da Haemophilus influenzae, streptococchi;
• coccidioidomicosi disseminata (localizzazione extrapolmonare);
• Encefalopatia da HIV (demenza da HIV, demenza da AIDS);
• istoplasmosi con diarrea persistente per più di 1 mese;
• isosporosi con diarrea persistente per più di 1 mese;
• Sarcoma di Kaposi a qualsiasi età;
• linfoma cerebrale (primario) in persone di qualsiasi età;
• altri linfomi a cellule B (ad eccezione della malattia di Hodgkin) o linfomi di immunofenotipo sconosciuto: linfomi a piccole cellule (come il linfoma di Burkitt, ecc.); sarcomi immunoblastici (linfomi immunoblastici, a grandi cellule, istiocitici diffusi, linfomi diffusi indifferenziati);
• micobatteriosi disseminata (non tubercolosi) con danni alla pelle, ai linfonodi cervicali o ilari oltre ai polmoni;
• tubercolosi extrapolmonare (che colpisce gli organi interni diversi dai polmoni);
• Setticemia da Salmonella, ricorrente;
• Distrofia da HIV (emaciazione, perdita di peso improvvisa).

La tabella 1 (vedi collegamento alla fonte sopra) elenca le malattie che definiscono l'AIDS e i loro agenti eziologici.

Esistono molte classificazioni dell'AIDS.

Secondo la nuova classificazione proposta dal Center for Disease Control negli USA (Tabella 2 - vedi link alla fonte sopra), la diagnosi di AIDS è stabilita per le persone con una conta di linfociti CD4 inferiore a 200/μl, anche in l’assenza di malattie che definiscono l’AIDS.

La categoria B comprende varie sindromi, le più importanti delle quali sono angiomatosi bacillare, candidosi orofaringea, candidosi vulvovaginale ricorrente, difficile da trattare, displasia cervicale, carcinoma cervicale, porpora trombocitopenica idiopatica, listeriosi, neuropatia periferica.

Anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 nel sangue

Gli anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 sono normalmente assenti nel siero del sangue.

La determinazione degli anticorpi contro l'HIV è il principale metodo di diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV. Il metodo si basa su un test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA): la sensibilità è superiore al 99,5%, la specificità è superiore al 99,8%. Gli anticorpi contro l'HIV compaiono nel 90-95% delle persone infette entro 1 mese dall'infezione, nel 5-9% - dopo 6 mesi, nello 0,5-1% - in un secondo momento. Durante la fase dell'AIDS il numero degli anticorpi può diminuire fino a scomparire completamente.

Il risultato dello studio è espresso qualitativamente: positivo o negativo.

Un risultato negativo del test indica l'assenza di anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 nel siero del sangue. Il laboratorio emette un risultato negativo immediatamente quando è pronto. Se si ottiene un risultato positivo - rilevamento degli anticorpi anti-HIV - per evitare risultati falsi positivi in ​​laboratorio, l'analisi viene ripetuta altre 2 volte.

Immunoblotting per anticorpi contro le proteine ​​virali dell'HIV nel siero del sangue

Gli anticorpi contro le proteine ​​virali dell'HIV sono normalmente assenti nel siero del sangue.

Il metodo ELISA per la determinazione degli anticorpi anti-HIV è un metodo di screening. Quando si ottiene un risultato positivo, per confermarne la specificità, si utilizza il metodo dell'immunoblotting - Western-blot - contro-precipitazione in un gel di anticorpi nel siero del sangue del paziente con varie proteine ​​virali, sottoposto a separazione per peso molecolare mediante elettroforesi e applicato alla nitrocellulosa. Vengono determinati gli anticorpi contro le proteine ​​virali gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17, ecc.

Secondo le raccomandazioni del Centro russo per la prevenzione e il controllo dell'AIDS, il rilevamento di anticorpi contro una delle glicoproteine ​​gp41, gpl20, gpl60 dovrebbe essere considerato un risultato positivo. Se vengono rilevati anticorpi contro altre proteine ​​​​virali, il risultato è considerato dubbio, tale paziente deve essere esaminato due volte - dopo 3 e 6 mesi.

L'assenza di anticorpi contro proteine ​​specifiche dell'HIV significa che il metodo di dosaggio immunoenzimatico ha dato un risultato falso positivo. Allo stesso tempo, nella pratica, nel valutare i risultati della metodica di immunoblotting, è necessario seguire le istruzioni fornite dall'azienda al “Kit Immunoblotting” utilizzato.

Il metodo immunoblotting viene utilizzato per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV.

Antigene p24 nel siero del sangue

L'antigene p24 è normalmente assente nel siero del sangue.

L'antigene p24 è una proteina della parete nucleotidica dell'HIV. Lo stadio delle manifestazioni primarie dopo l'infezione da HIV è una conseguenza dell'inizio del processo di replicazione. L'antigene p24 appare nel sangue 2 settimane dopo l'infezione e può essere rilevato mediante ELISA in un periodo compreso tra 2 e 8 settimane. Dopo 2 mesi dal momento dell'infezione, l'antigene p24 scompare dal sangue. Successivamente, nel decorso clinico dell'infezione da HIV, si osserva un secondo aumento del livello della proteina p24 nel sangue. Cade durante la formazione dell'AIDS. I sistemi di test ELISA esistenti per il rilevamento dell'antigene p24 vengono utilizzati per la diagnosi precoce dell'HIV nei donatori di sangue e nei bambini, per determinare la prognosi del decorso dell'AIDS e per monitorare la terapia nei pazienti affetti da AIDS. L'ELISA ha un'elevata sensibilità analitica, che consente di rilevare l'antigene p24 dell'HIV-1 nel siero del sangue a una concentrazione di 5-10 pkg/ml e l'HIV-2 - inferiore a 0,5 ng/ml e specificità. Tuttavia, va notato che il livello dell’antigene p24 nel sangue è soggetto a variazioni individuali, il che significa che solo il 20-30% dei pazienti può essere rilevato utilizzando questo test nel periodo iniziale dopo l’infezione (Rose N.R. et al., 1997).

Gli anticorpi contro l'antigene p24 delle classi IgM e IgG compaiono nel sangue a partire dalla 2a settimana, raggiungono il picco entro 2-4 settimane e rimangono a questo livello per tempi diversi: anticorpi della classe IgM - per diversi mesi, scompaiono entro un anno dopo l’infezione e gli anticorpi IgG possono persistere per anni.

L'algoritmo per diagnosticare l'infezione da HIV dipende dalla fase della malattia ed è caratterizzato da cambiamenti nella dinamica del rilevamento di anticorpi di varie classi (Fig. 1, 2 - vedere il collegamento alla fonte sopra).

Il risultato dello studio è espresso qualitativamente: positivo o negativo. Un risultato negativo del test indica l'assenza di anticorpi contro l'HIV-1 e l'antigene HIV-2 e p24 nel siero del sangue.

Il laboratorio emette un risultato negativo immediatamente quando è pronto. Se si ottiene un risultato positivo - rilevamento degli anticorpi anti-HIV-1 e HIV-2 e/o antigene p24 - per evitare risultati falsi positivi in ​​laboratorio, l'analisi viene ripetuta altre 2 volte.

Indipendentemente dai risultati dello studio, il campione di sangue del paziente e i risultati di 3 studi vengono inviati dal laboratorio al centro regionale per l’AIDS per confermare un risultato positivo o verificare un risultato indeterminato. In questi casi, la risposta finale su questo studio viene rilasciata dal centro regionale per l'AIDS.

Rilevazione dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi (qualitativa)

Il rilevamento dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi - PCR (qualitativa) viene effettuato allo scopo di:

• risoluzione dei risultati discutibili dell'immunoblotting;
• per la diagnosi precoce dell'infezione da HIV;
• monitorare l'efficacia del trattamento antivirale;
• determinare lo stadio dell'AIDS (transizione dell'infezione in malattia).

Durante l'infezione primaria da HIV, il metodo PCR può rilevare l'RNA dell'HIV nel sangue 10-14 giorni dopo l'infezione.

Il risultato dello studio è espresso qualitativamente: positivo o negativo. Un risultato negativo del test indica l'assenza di HIV RNA nel sangue.

Un risultato positivo - rilevamento dell'RNA dell'HIV - indica che il paziente è infetto.

Rilevazione dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi (quantitativa)

Normalmente non c'è HIV nel sangue.

La quantificazione diretta dell'RNA dell'HIV mediante PCR consente di prevedere in modo più accurato il tasso di sviluppo dell'AIDS nelle persone infette da HIV rispetto alla determinazione del conteggio delle cellule CD4 e quindi di valutare più accuratamente la loro sopravvivenza. Livelli elevati di particelle virali di solito sono correlati a un grave deterioramento immunitario e a un basso numero di cellule CD4. Bassi livelli di particelle virali generalmente sono correlati a un migliore stato immunitario e a una conta di cellule CD4 più elevata. Il contenuto dell'RNA virale nel sangue ci consente di prevedere il passaggio della malattia allo stadio clinico. Quando il contenuto di HIV RNA-1 è >74.100 copie/ml, quasi tutti i pazienti sviluppano il quadro clinico dell'AIDS (Senior D., Holden E., 1996).

La probabilità di sviluppare l’AIDS è 10,8 volte più alta negli individui con livelli ematici di HIV-1 >10.000 copie/ml rispetto agli individui con livelli ematici di HIV-1<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Un gruppo di esperti statunitensi ha sviluppato indicazioni per il trattamento dei pazienti affetti da HIV. Il trattamento è indicato nei pazienti con una bassa conta di cellule CD4 nel sangue<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20.000 copie/ml (PCR). I risultati della terapia antiretrovirale nelle persone infette da HIV vengono valutati riducendo il livello sierico di HIV RNA.

Con un trattamento efficace, il livello di viremia dovrebbe diminuire di 10 volte durante le prime 8 settimane ed essere inferiore al limite di sensibilità del metodo (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.

Pertanto, oggi, molti metodi di ricerca sono stati introdotti e utilizzati nella pratica clinica per diagnosticare l'infezione da HIV, come per tutte le altre infezioni virali. Tra questi, il ruolo principale è dato agli studi sierologici. I principali metodi per diagnosticare le infezioni da HIV sono presentati nella Tabella 3 (vedi collegamento alla fonte sopra), dove sono divisi in quattro livelli a seconda dell'importanza di ciascun metodo per rilevare i virus:

• A - il test viene solitamente utilizzato per confermare la diagnosi;
• B - il test è utile in determinate circostanze per diagnosticare alcune forme di infezione;
• C - test viene utilizzato raramente a scopo diagnostico, ma riveste grande importanza per le indagini epidemiologiche;
• Il test D non viene generalmente utilizzato dai laboratori per scopi diagnostici.

Poiché per la diagnosi delle infezioni virali, oltre alla scelta del metodo di analisi ottimale, è altrettanto importante la corretta identificazione e raccolta del biomateriale per la ricerca, la Tabella 4 (vedere il collegamento alla fonte sopra) fornisce raccomandazioni per la scelta del biomateriale ottimale per lo studio Infezione da HIV.

Per monitorare le persone infette da HIV, si dovrebbero sfruttare le possibilità di uno studio completo dello stato immunitario - determinazione quantitativa e funzionale di tutti i suoi collegamenti: immunità umorale, cellulare e resistenza non specifica in generale.

Nelle moderne condizioni di laboratorio, il principio a più stadi della valutazione dello stato immunologico comprende la determinazione della sottopopolazione di linfociti e immunoglobuline del sangue. Nel valutare gli indicatori, si dovrebbe tenere conto del fatto che l'infezione da HIV è caratterizzata da una diminuzione del rapporto cellule T CD4/CD8 inferiore a 1. L'indice CD4/CD8 di 1,5-2,5 indica uno stato normergico, superiore a 2,5 indica iperattività, inferiore a 1,0 - indica immunodeficienza. Inoltre, il rapporto CD4/CD8 può essere inferiore a 1 nei casi gravi di processo infiammatorio.

Questo rapporto è di fondamentale importanza nella valutazione del sistema immunitario nei pazienti affetti da AIDS, perché l'HIV infetta e distrugge selettivamente i linfociti CD4, per cui il rapporto CD4/CD8 diminuisce fino a valori significativamente inferiori a 1.

La valutazione dello stato immunologico si basa anche sull'identificazione di difetti generali o “grossolani” del sistema immunitario cellulare e umorale: ipergammaglobulinemia (aumento delle concentrazioni di IgA, IgM, IgG) o ipogammaglobulinemia in fase terminale; aumento della concentrazione di complessi immuni circolanti; diminuzione della produzione di citochine; indebolimento della risposta dei linfociti agli antigeni e ai mitogeni.

La violazione del rapporto delle popolazioni nel pool generale dei B-linfociti è caratteristica dell'insufficienza dell'immunità umorale. Tuttavia, questi cambiamenti non sono specifici dell’infezione da HIV e possono verificarsi anche in altre malattie. In una valutazione completa di una serie di altri parametri di laboratorio, si dovrebbe tenere presente che l'infezione da HIV è caratterizzata anche da: anemia, linfopenia e leucopenia, trombocitopenia, aumento dei livelli di β2-microglobulina e proteina C-reattiva e aumento delle transaminasi. attività nel siero del sangue.

... la diagnosi di qualsiasi malattia infettiva si basa sul confronto di dati epidemiologici, clinici e di laboratorio e l'esagerazione del significato di uno dei gruppi di questi dati può portare a errori diagnostici.

La diagnosi dell’infezione da HIV comprende due fasi:
IO palcoscenico - stabilire il fatto reale dell’infezione da HIV ;
II palcoscenico - determinazione dello stadio della malattia .

STABILIRE IL FATTO DELL'INFEZIONE DA HIV

Stabilire il fatto reale dell'infezione da HIV (cioè identificare le persone infette da HIV), a sua volta, comprende anche due fasi:
Fase I- test immunoassorbente collegato(ELISA): il metodo ELISA è un metodo di screening (selezione) - la selezione di individui presumibilmente infetti, ovvero il suo obiettivo è identificare individui sospetti ed eliminare individui sani; Gli anticorpi contro l'HIV vengono rilevati utilizzando altri anticorpi contro gli anticorpi desiderati (anticorpi contro altri anticorpi). Questi anticorpi “aiutanti” sono etichettati con un enzima. Tutti i test di screening devono essere altamente sensibili per non perdere un paziente. Per questo motivo, la loro specificità non è molto elevata, cioè l'ELISA può dare una risposta positiva (“probabilmente malata”) in persone non infette (ad esempio, in pazienti con malattie autoimmuni: reumatismi, lupus eritematoso sistemico, ecc.). La frequenza dei risultati falsi positivi quando si utilizzano vari sistemi di test varia dallo 0,02 allo 0,5%. Se il test ELISA di una persona dà un risultato positivo, è necessario un ulteriore esame per confermare il fatto dell’infezione da HIV. Quando si esegue l'ELISA, sono possibili risultati falsi negativi nel 3-5% dei casi - se l'infezione si è verificata relativamente di recente e il livello di anticorpi è ancora molto basso, o nella fase terminale della malattia, caratterizzata da gravi danni al sistema immunitario con una profonda interruzione del processo di formazione degli anticorpi. Pertanto, se vi è evidenza di contatto con persone infette dall'HIV, gli studi vengono solitamente ripetuti dopo 2 - 3 mesi.
Fase II - immunoblotting(Western Blot modificato, Western Blot): è un metodo più complesso e serve a confermare il fatto dell'infezione. Questo metodo non rileva anticorpi complessi contro l'HIV, ma anticorpi contro le sue singole proteine ​​strutturali (p24, gp120, gp41, ecc.). I risultati dell'immunoblotting sono considerati positivi se vengono rilevati anticorpi contro almeno tre proteine, una delle quali è codificata dai geni env, l'altra dai geni gag e la terza dai geni pol. Se vengono rilevati anticorpi contro una o due proteine, il risultato è considerato discutibile e richiede conferma. Nella maggior parte dei laboratori, la diagnosi di infezione da HIV viene fatta se vengono rilevati contemporaneamente anticorpi contro le proteine ​​p24, p31, gp4l e gpl20/gp160. L'essenza del metodo: il virus viene distrutto in componenti (antigeni), che consistono in residui di aminoacidi ionizzati, e quindi tutti i componenti hanno un'origine diversa l'uno dall'altro; quindi, utilizzando l'elettroforesi (corrente elettrica), gli antigeni vengono distribuiti sulla superficie della striscia: se il siero del test contiene anticorpi anti-HIV, interagiranno con tutti i gruppi di antigeni e questo potrà essere rilevato.

Dovrebbe essere ricordato che gli anticorpi dell'HIV compaiono nel 90-95% delle persone infette entro 3 mesi dall'infezione, nel 5-9% delle persone infette gli anticorpi dell'HIV compaiono dopo 6 mesi e nello 0,5-1% delle persone infette gli anticorpi dell'HIV compaiono più tardi. Durante la fase dell'AIDS il numero degli anticorpi può diminuire fino a scomparire completamente.

In immunologia esiste un concetto come "finestra sierologica" - il periodo che intercorre tra l'infezione e la comparsa di una quantità di anticorpi tale da poter essere rilevata. Per l'HIV, questo periodo dura solitamente da 2 a 12 settimane, in rari casi più a lungo. Durante la “finestra sierologica”, secondo i test, una persona è sana, ma in realtà è infettata dall'HIV. È stato accertato che il DNA dell'HIV può rimanere nel genoma umano per almeno tre anni senza segni di attività e che gli anticorpi dell'HIV (marcatori dell'infezione da HIV) non compaiono.

Durante questo periodo (“finestra sierologica”) è possibile identificare una persona infetta da HIV e anche 1-2 settimane dopo l’infezione utilizzando reazione a catena della polimerasi(PCR). Questo è un metodo estremamente sensibile: teoricamente è possibile rilevare 1 DNA per 10 ml di terreno. L'essenza del metodo è la seguente: utilizzando la reazione a catena della polimerasi, si ottengono molte copie di un acido nucleico (un virus è un acido nucleico - DNA o RNA - in un guscio proteico), che vengono poi identificate utilizzando enzimi o isotopi marcati , nonché dalla loro struttura caratteristica. La PCR è un metodo diagnostico costoso, quindi non viene utilizzata per lo screening o di routine.

DETERMINARE LO STADIO DELLA MALATTIA

Lo sviluppo dell'AIDS si basa su, prima di tutto, la distruzione dei linfociti T-aiutanti, contrassegnati da anticorpi monoclonali - cluster di differenziazione - come CD4. A questo proposito, la diagnosi e il monitoraggio della progressione della malattia sono impossibili senza il monitoraggio della sottopopolazione di cellule T helper, operazione che viene eseguita più comodamente utilizzando un laser cell sorter.

Per una lieve infezione da HIV Il numero di linfociti T è un indicatore estremamente variabile. In generale, si riscontra una diminuzione della conta delle cellule CD4 (assoluta e relativa) negli individui la cui infezione da HIV si è verificata almeno un anno fa. D'altra parte, nelle prime fasi dell'infezione si verifica spesso un forte aumento del numero di cellule T soppressori (CD8) sia nel sangue periferico che nei linfonodi ingrossati.

Con un grave AIDS La maggioranza assoluta dei pazienti presenta un numero totale ridotto di linfociti T (meno di 1.000 in 1 μl di sangue, compresi i linfociti CD4 - meno di 22 in 1 μl, mentre il valore assoluto del contenuto di CD8 rimane entro limiti normali). Di conseguenza, il rapporto CD4/CD8 diminuisce drasticamente. Le risposte delle cellule T in vitro agli antigeni standard e ai mitogeni sono ridotte in stretta conformità con la conta relativamente ridotta dei CD4.

Per gli stadi avanzati dell'AIDS Caratterizzato da linfopenia generale, neutropenia, trombocitopenia (rispettivamente, diminuzione del numero di linfociti, neutrofili e piastrine), anemia. Questi cambiamenti possono essere una conseguenza dell'inibizione centrale dell'ematopoiesi dovuta al danno agli organi ematopoietici da parte del virus, nonché alla distruzione autoimmune delle sottopopolazioni cellulari nella periferia. Inoltre, l'AIDS è caratterizzato da un moderato aumento della quantità di gammaglobuline con un aumento dominante del contenuto di IgG. I pazienti con sintomi gravi di AIDS hanno spesso livelli elevati di IgA. In alcune fasi della malattia, il livello dei marcatori dell'AIDS come 1-microglobulina, interferone acido-stabile e 1-timosina aumenta in modo significativo. Lo stesso accade con la secrezione della neopterina libera, un metabolita dei macrofagi. Non è ancora possibile valutare l'importanza relativa di ciascuno dei test elencati, il cui numero è in costante aumento. Pertanto, dovrebbero essere considerati in interazione con i marcatori dell'infezione da HIV, sia immunovirologici che citologici. Un esame del sangue clinico è caratterizzato da leucopenia e linfopenia (rispettivamente, una diminuzione del numero di leucociti e linfociti).

Fase 1 - " fase di incubazione» - non sono stati ancora rilevati anticorpi contro l'HIV; la diagnosi di infezione da HIV in questa fase viene effettuata sulla base di dati epidemiologici e deve essere confermata in laboratorio mediante il rilevamento del virus dell’immunodeficienza umana, dei suoi antigeni e degli acidi nucleici dell’HIV nel siero del paziente;
Fase 2 - " stadio delle manifestazioni primarie» - in questo periodo si ha già la produzione di anticorpi:;
Fase 2A - “ asintomatico» - L'infezione da HIV si manifesta solo con la produzione di anticorpi;
Fase 2B - “ infezione acuta da HIV senza malattie secondarie» - linfociti a plasma largo: nel sangue dei pazienti possono essere rilevate "cellule mononucleate" e spesso si osserva una diminuzione transitoria del livello dei linfociti CD4 (un'infezione clinica acuta si osserva nel 50-90% degli individui infetti nei primi 3 mesi dopo l'infezione; l'inizio del periodo di infezione acuta, di regola, precede la sieroconversione, cioè la comparsa di anticorpi contro l'HIV);
Fase 2B - “ infezione acuta da HIV con malattie secondarie» - sullo sfondo di una diminuzione del livello dei linfociti CD4 e della conseguente immunodeficienza, compaiono malattie secondarie di varia eziologia (angina, polmonite batterica e da Pneumocystis, candidosi, infezione erpetica, ecc.);
Fase 3 - " latente» - in risposta alla progressione dell'immunodeficienza, si verifica una modifica della risposta immunitaria sotto forma di riproduzione eccessiva delle cellule CD4, seguita da una diminuzione graduale del livello dei linfociti CD4, in media ad una velocità di 0,05-0,07x109/l per anno; gli anticorpi contro l'HIV vengono rilevati nel sangue;
Fase 4 - " stadio delle malattie secondarie» - deplezione dei linfociti della popolazione CD4, la concentrazione di anticorpi contro il virus diminuisce in modo significativo (a seconda della gravità delle malattie secondarie, si distinguono gli stadi 4A, 4B, 4B);
Fase 5 - " fase terminale» - tipicamente una diminuzione del numero di cellule CD4 al di sotto di 0,05x109/l; la concentrazione di anticorpi contro il virus diminuisce in modo significativo oppure gli anticorpi potrebbero non essere rilevati.