Taktika infekce HIV pro imunologické vyšetření. Laboratorní metody diagnostiky AIDS

Infekce virem lidské imunodeficience - HIV, je virové onemocnění. Postupně ničí některé bílé krvinky a může způsobit syndrom získané imunodeficience – AIDS.

Virus lidské imunodeficience (HIV) je typ retroviru.

Co je retrovirus?
Laboratorní diagnostika HIV
- Asymptomatická fáze
- Fáze nástupu AIDS
HIV diagnostické metody
PCR (polymerázová reakce)
Expresní testování
Načasování a náklady na diagnostiku HIV

Co je retrovirus?

Je to genomová DNA a uchovává genetickou informaci nejen jako DNA (většina ostatních organismů používá pouze DNA), ale také jako RNA (ribonukleová kyselina).

Dnes je obvyklé rozlišovat následující cesty infekce HIV:

sexuální kontakt bez použití ochrany
perinatální cesta infekce (pozorovaná u dětí)
během krevní transfuze (transfuze krve)
při použití kontaminovaných injekčních stříkaček (častěji u pacientů závislých na injekčních drogách)

Když HIV vstoupí do lidských buněk, uvolňuje ribonukleovou kyselinu a replikuje (kopíruje) DNA z HIV RNA pomocí enzymu zvaného reverzní transkriptáza.

Výsledná DNA je inkorporována do DNA infikovaných buněk. Tento proces je obrácený, protože zahrnuje lidské buňky k replikaci RNA a DNA.

Jiné RNA viry (infekce), jako je poliovirus, virus chřipky, virus spalniček, na rozdíl od retrovirů nereplikují DNA po vstupu do buňky. Tyto viry produkují repliky ribonukleové kyseliny původní RNA.

V buňkách infikovaných HIV se pokaždé, když dojde k buněčnému dělení, vedle vlastní DNA buňky replikuje také DNA integrovaného HIV.

Replikace DNA HIV je v jednom z následujících stavů:

Neaktivní (skrytý) stav: virus existuje, ale nemá škodlivý účinek na lidské tělo
Stav aktivace: virus ovládá funkci infikovaných buněk, produkuje velké množství nových replikací HIV, které infikují další buňky těla, což vyvolává stav přetrvávající získané imunodeficience

Důležitým aspektem terapeutické intervence zůstává přesná a včasná diagnostika onemocnění.

První laboratorní studie patologie HIV byly provedeny před více než pětatřiceti lety.

Moderní diagnostika zahrnuje využití imunologických, hematologických a molekulárních metod k průkazu virového patogenu. Testovací systémy používané v minulém století měly dosti omezené možnosti a určovaly retrovirus 1. typu.

Jejich technické možnosti nepřesáhly stanovení imunoglobulinu G.

S vývojem laboratorní diagnostiky a zdokonalováním výzkumných metod bylo možné detekovat oba typy viru.
Vznik testovacích systémů třetí generace výrazně rozšířil diagnostické možnosti.

Detekce viru typu 1-2 je nyní možná jen několik týdnů po infekci. Taková moderní diagnostika umožňuje rychle předepsat antiretrovirovou léčbu.

Desetinásobně snižuje riziko rozvoje těžšího stadia viru – AIDS. Nedávné vynálezy zahrnují testovací systémy 4. generace. Jsou to kombinované výzkumné metody.

Systém slouží k detekci protilátek proti oběma typům HIV a současné detekci antigenu p24 (protein stěny retrovirového nukleosidového esteru). Tyto schopnosti testovacích systémů 4. generace zkracují dobu „sérologického okna“ nejméně o týden. (Toto je období, kdy je HIV přítomen v těle bez výskytu protilátek).

Laboratorní diagnostika HIV

Provádění laboratorních testů je hlavním aspektem diagnostiky onemocnění HIV a předepisování adekvátní terapie. Diagnostika navíc sleduje kvalitu léčby a zdravotní stav pacienta.

Pravidelné laboratorní testy umožňují:

kontrolovat průběh infekčního procesu
upravit režim terapie
sledovat nežádoucí účinky užívání léků

Standardní test na HIV zahrnuje testování krve pacienta.

Hlavním biologickým materiálem je žilní krev, která se odebírá ráno, před jídlem.
Od pacienta není vyžadována žádná předběžná ani speciální příprava.

Hlavní přípravou je vyhnout se pití alkoholu po několik dní. Pokud je to možné, přestaňte užívat antibiotika a antivirotika 5-7 dní před testem.

Klinické a imunologické vyšetření lze provádět ve veřejné ambulanci. Ale v tomto případě bude vyžadováno doporučení od praktického nebo rodinného lékaře.

Dnes je diagnostika HIV, AIDS a pohlavně přenosných chorob stále více praktikována v nezávislých laboratorních centrech, kde je možné se nechat anonymně otestovat.

Při diagnostice je pacientovi přiděleno speciální číslo, známé pouze jemu a personálu ústavu. V tomto případě však existuje určitá nevýhoda.

Výsledky testů nelze přenést na kliniku k následné hospitalizaci pacienta. Nejsou poskytovány gynekologovi/venerologovi/infektologovi a nelze je zapsat do registru infekčních patologií (ORUIB).

Klinika nemoci: jak se retrovirus projevuje

Hlavní způsob přenosu onemocnění HIV:

sexuální kontakt
z matky na dítě (transplacentárně, porodními cestami, mateřským mlékem)
během procedury krevní transfuze, transplantace orgánů
při podávání nitrožilních léků nesterilní injekční stříkačkou

Jinými slovy, pokud nedochází ke kontaktu s krví nebo tělesnými tekutinami, je pravděpodobnost nákazy HIV v každodenním životě téměř nulová.

Množství viru obsaženého v sekrečních tekutinách, jako jsou sliny nebo slzy, je velmi malé. I když je virus v těchto sekretech přítomen, nebyla dosud hlášena infekce ze sdílení vany nebo ručníku.

HIV je poměrně „křehký“ virus, který je inaktivován, jakmile opustí tělo do vnějšího prostředí. Klinické projevy patologického procesu závisí na stadiu infekce.

Počáteční fáze infekce (akutní fáze)

První projev infekce je pozorován 2-3 týdny po infekci.

V tomto období jsou příznaky HIV: horečka, bolest v krku, bolest svalů, vyrážka, lymfadenopatie, bolest hlavy, únava atd. Objevují se příznaky chřipky nebo angíny (obvykle monocytárního typu).

Časné příznaky onemocnění mohou pacienta provázet několik dní až měsíc i déle, v mnoha případech spontánně vymizí.
Diagnostika onemocnění v tomto období je pro pacienta považována za nejpřínosnější. Léčba antiretrovirovými léky v počáteční fázi infekce vykazuje nejpozitivnější výsledky.

Důležité! Pacienti s jakoukoli sexuálně přenosnou infekcí (syfilis, kapavka, HPV, chlamydie atd.) jsou povinni podstoupit test na HIV. U pacientů s retroviry je často detekován paralelní průběh STD.

Asymptomatická fáze

Množství viru v krvi, které dosáhlo vrcholu v důsledku imunitní odpovědi (indukce CTL nebo produkce protilátek) po infekci, po 6-8 měsících klesá na určitou úroveň a stává se asymptomatickým. Tato fáze může trvat několik let.

Poté je nahrazen obdobími exacerbace: příznaky chřipky, malátnost, zduření lymfatických uzlin. Během tohoto období je pacient zranitelnější než kdy jindy vůči jiným infekčním patologiím: STD, hepatitida, herpes, tuberkulóza.

Fáze nástupu AIDS

Bez anti-HIV léčby po infekci infekce postupuje a CD4-pozitivní T buňky rychle ubývají. Když je počet CD4 200/mm3 nebo méně, oportunní infekční onemocnění, jako je pneumonie, tuberkulóza, mají 90% šanci na rozvoj.

Navíc, pokud je počet CD4 lymfocytů pod 50/mm3, existuje vysoká šance na rozvoj cytomegalovirové infekce, atypické mykobakteriózy (v 93 % případů), primárních lymfomů CNS a maligních nádorů. U pacientů dochází k prudkému poklesu chuti k jídlu, hubnutí až nechutenství, neustálým poruchám vyprazdňování s převahou průjmů, slabostí a podobně.

Etiologie, patogeneze, epidemiologie: HIV je virus z rodiny patogenů obsahujících RNA, který postihuje buňky imunitního systému, vyvolává rozvoj AIDS, oportunních infekcí a onkologie. Podle statistik za rok 2011 je na celém světě 62 milionů pacientů s diagnózou HIV.

Dokud je pacient na antiretrovirové terapii, může být virová zátěž do značné míry potlačena.
Ale bohužel je nemožné úplně odstranit virus z těla. Proto je nesmírně důležité diagnostikovat onemocnění co nejrychleji a zahájit vhodnou léčbu.

HIV diagnostické metody

Diagnostická opatření k detekci infekce HIV zahrnují dvě fáze:

identifikace faktu infekce (přítomnost retroviru v těle)
určení fáze procesu (jak dlouho k infekci došlo a jak silně byly postiženy buňky imunitního systému)

Výsledky diagnostiky vám umožní rozhodnout o taktice léčby a předpovědět další průběh onemocnění.

Pro detekci infekčních, virových a bakteriálních patologií existují různé sérologické metody. Při diagnostice HIV se obvykle používají následující sérologické testy.

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)

Je to nejčastěji předepisovaný test, kdy je potřeba potvrdit/vyvrátit přítomnost retroviru v těle.

Analýza je založena na stanovení protilátek proti viru, které se tvoří při vstupu patogenu do lidského těla. Informační obsah diagnostické metody dosahuje 96 %.

Pokud se však studie provádí ve fázi nepřítomnosti protilátek, lze získat falešně pozitivní výsledek. V tomto případě je po 2-3 měsících předepsán opakovaný test ELISA.
Mnohem vhodnější je však provést analýzu PCR, která dokáže detekovat infekci v nejranějších fázích.

Můžete také získat falešně pozitivní výsledek, pokud má pacient:

autoimunitní patologie
chronické infekce
onkologická onemocnění

V jiném případě lze tento výsledek získat za přítomnosti raných stádií těhotenství.

Imunitní blotování (Western Blot)

Specifičnost analýzy je zaměřena na identifikaci proteinů HIV infekce.

Diagnóza se obvykle provádí jako potvrzující test. Pokud je výsledek pozitivní, umožňuje stanovit konečnou diagnózu „viru lidské imunodeficience“.

Imunoblotting standardně poskytuje tři možné výsledky: pozitivní, negativní a pochybný. V prvních dvou případech je dekódování jednoduché – HIV chybí/přítomno.

Pochybná varianta většinou znamená přítomnost HIV v těle. Ale s infekcí ne více než před třemi měsíci, kdy tělo nemělo čas produkovat celou škálu protilátek.

Také získání pochybného výsledku je typické pro pacienty s tuberkulózou, maligními patologiemi, kteří podstoupili opakované transfuzní postupy.

PCR (polymerázová reakce)

Podstatou metody je stanovení DNA viru a jeho RNA. Je to nejinformativnější a nejpřesnější metoda detekce patogenů.

Dokáže detekovat HIV v raných fázích infekce, ještě před tvorbou protilátek proti retroviru. Citlivost PCR je 99 %, získat falešný výsledek je téměř nemožné.

Polymerázová reakce je pacientovi předepsána za účelem:

indikují přítomnost nebo nepřítomnost viru HIV v lidském těle, pokud jsou výsledky získané v jiných laboratorních testech sporné
identifikaci typu retroviru (HIV-1, HIV-2), jakož i ke stanovení zátěže organismu způsobené virem
stanovení postavení dítěte narozeného matce s nemocí
detekce patogenu v krvi, který bude později použit pro transfuzi

PCR je nejpřesnější analýza, schopná detekovat retrovirus 7-10 dní po vstupu do těla.
V tomto případě bude přesnost výsledku v tomto okamžiku 98-99%.

PCR má však některé zvláštnosti, z tohoto důvodu může být předepsána několikrát. Díky vysoké citlivosti je analýza schopna reagovat nejen na retroviry. Ale také k těm nejzávažnějším infekčním procesům probíhajícím v těle. Po jednorázové polymerázové reakci se tedy konečná diagnóza nestanoví.

Dalším rysem PCR je potřeba moderního a drahého vybavení. Proto se analýza neprovádí na veřejných klinikách. Testování se provádí v moderních laboratořích, kde náklady na analýzu mohou začít od 1 000 rublů.

Expresní testování

Předepsáno v nouzových situacích, kdy je naléhavě vyžadován chirurgický zákrok.

Biologickým materiálem pro výzkum je moč. Rychlý test má podle některých odborníků přesnost až 96 %, nicméně je to doplňkový test. Na základě výsledků této studie není stanovena žádná diagnóza.

V povinných případech se provádí ELISA nebo PCR.

Načasování a náklady na diagnostiku HIV

Jak dlouho bude trvat dokončení analýzy?

Odpověď z laboratorního centra o výsledcích analýzy může být obdržena po několika dnech, v závislosti na pracovním vytížení instituce.

Mnoho center má také další službu „urgentního testování“, která vám umožní získat výsledky po několika hodinách.

Pokud jde o cenovou politiku, cena bude záviset na zvolené laboratoři a metodologii výzkumu.
Náklady tedy mohou začít od 500 rublů a dosáhnout 10 000-15 000.

Cena Western Blot začíná od 2500 rublů a může dosáhnout 3000-4000. Konečný výsledek můžete získat po 2-5 dnech.

Pokud se provádí PCR v reálném čase k určení obou typů retrovirů, stejně jako jejich RNA a DNA, náklady mohou dosáhnout 5 000 rublů a více. Doba trvání diagnózy je od 5 do 10 dnů.

Podle platného zákona Ruské federace jsou imunologické studie prováděné ve vládních institucích poskytovány zdarma. HIV test je povinný pro pacientky v těhotenství, pacientky v předoperačním období a dárce orgánů nebo částí tkání.

Diagnóza infekce HIV zahrnuje dvě fáze: zjištění skutečného faktu infekce HIV a určení stadia onemocnění. Stanovení stadia neodmyslitelně navazuje na objasnění podstaty průběhu onemocnění a následně na tvorbu prognózy pro daného pacienta a také na volbu léčebné taktiky.

Jak je známo, diagnostika jakéhokoli infekčního onemocnění je založena na srovnání epidemiologických, klinických a laboratorních údajů a přehánění významu jedné ze skupin těchto údajů může vést k diagnostickým chybám.

Epidemiologická kritéria pro infekci HIV .

Prvním krokem při diagnostice infekce HIV je sběr epidemiologické anamnézy a dalších epidemiologických údajů o vyšetřovaném pacientovi. Nedostatek epidemiologických dat může významně zkomplikovat diagnostiku HIV infekce a bránit realizaci protiepidemických opatření.

Epidemiologická kritéria mohou být někdy rozhodující pro stanovení diagnózy infekce HIV, ale mohou mít i pomocnou hodnotu. Kritériem vysoké pravděpodobnosti infekce je detekce u vyšetřované osoby takových rizikových faktorů infekce, jako je transfuze dárcovské krve přijatá od HIV infikované osoby, narození HIV infikovaného dítěte vyšetřovanou ženou. Existuje vysoká pravděpodobnost infekce, pokud se subjekt narodí matce infikované HIV, má sexuální kontakt s osobou infikovanou HIV nebo sdílí parenterální užívání drog s osobou infikovanou HIV. Určité riziko infekce je zjištěno při spolehlivých parenterálních zákrocích, které jsou prováděny nástroji pravděpodobně kontaminovanými HIV (tj. v nozokomiálních a podobných ohniscích infekce HIV s parenterálním přenosem HIV).

O znatelném riziku infekce lze diskutovat v případech, kdy subjekt uvádí pohlavní styk nebo parenterální užívání drog v oblastech, kde je HIV významně rozšířeno mezi populační skupinou, ke které subjekt patří.

Pohlavní styk a užívání drog v oblastech s nízkou prevalencí HIV infekce zároveň nevylučuje možnost infekce HIV.

Absence spolehlivých rizikových faktorů pro infekci HIV může zpochybnit laboratorní údaje. V takových případech se doporučuje opakovat laboratorní testy.

Klinická kritéria pro infekci HIV.

Včasná diagnostika HIV infekce zajišťuje včasnou léčbu pacienta a nasazení preventivních opatření v ohnisku nákazy zamezující nechtěnému přenosu viru z nakažené osoby na zdravého člověka. Včasná diagnóza umožňuje včasné lékařské vyšetření, psychologickou pomoc a sociální rehabilitaci. První úspěchy v léčbě pacientů umožňují při včasné diagnóze výrazně prodloužit život pacientů a dokonce doufat v vyléčení.

Obtížnost včasné diagnostiky na základě klinického obrazu spočívá v nespecifitě a polymorfismu příznaků ve stadiu II, nemluvě o absenci klinických příznaků ve stadiu I. Ve všech případech je však přítomna nemotivovaná únava, přítomnost nočního pocení, přítomnost nočního pocení, přítomnost nočního pocení, neinvazivní onemocnění. bolesti hlavy, zejména na pozadí krátkodobé horečky (3-10 dní) s teplotou 38-38,50 C, doprovázené tonzilitidou, prodlouženým průjmovým syndromem, ztrátou hmotnosti v krátké době, je nutné především vyloučit HIV infekce. Diagnózu v tomto období napomáhá identifikace různých kožních vyrážek (fleky, papuly, roseola, pustuly) nebo furunkulózy při objektivním vyšetření. Přítomnost lymfadenopatie, a to i v případech zvětšení jedné skupiny lymfatických uzlin, a ještě více v případě generalizované lymfadenopatie, s větší mírou pravděpodobnosti umožňuje klinické podezření na infekci HIV. Onemocnění je zvláště charakterizováno zvětšením zadních krčních, submandibulárních, nadklíčkových a podklíčkových, axilárních a ulnárních lymfatických uzlin. Zpravidla se zvětšují na 2-5 cm v průměru, jsou nebolestivé, mají hustou elastickou konzistenci a občas se spojují do slepence. Pro infekci HIV je velmi typické zvětšení více než jedné uzliny, více než jedné skupiny (s výjimkou tříselných), trvající déle než 3 měsíce.

Často v rané fázi onemocnění přítomnost psycho-neurologických příznaků: úzkost, deprese, nestabilita chůze, snížená zraková ostrost, záchvaty se známkami poškození psycho-emocionální sféry (porucha paměti, zapomnětlivost, nevhodné chování, otupení). emocí). K nejcharakterističtějším rysům Mezi počáteční stadia infekce HIV patří:

1. Snížení tělesné hmotnosti o méně než 10 %;

2. Změny na kůži a sliznicích (seboroická dermatitida, folikulitida, prurigo, psoriáza, plísňové infekce nehtů, recidivující vředy v ústech, nekrotizující gingivitida);

3 . Herpes zoster u lidí mladších 50 let;

4. Opakované infekce horních cest dýchacích;

V mezistupeň Onemocnění charakterizované klinickým obrazem plně rozvinuté superinfekce vzniklé v důsledku imunodeficience je nejcharakterističtější pro:

1 . Progresivní ztráta tělesné hmotnosti nad 10 %;

2 . Průjem neznámého původu, trvající déle než 1 měsíc;

3 . orální kandidóza;

4 . leukoplakie;

5. Plicní tuberkulóza;

6. periferní neuropatie;

7. Lokalizované formy Kaposiho sarkomu;

8. Šíření pásového oparu;

9. Závažná, recidivující bakteriální infekce (pneumonie, sinusitida, pyomyositida).

Pro pozdní fáze, které umožňují diagnostikovat infekci HIV nebo v každém případě provést diferenciální diagnostiku, zahrnují:

1. Pneumocystis pneumonie;

2 . toxoplazmóza;

3. kryptokokóza;

4. CMV infekce;

5. Herpes simplex;

6. Progresivní multifokální leukoencefalopatie;

7. histoplazmóza;

8. Kandidová ezofagitida;

9. infekce MAC;

10. Salmonella septikémie;

11. mimoplicní tuberkulóza;

12. Lymfom, Kaposiho sarkom;

13. kachexie;

14. HIV encefalopatie.

V roce 1988 WHO navrhla pro klinické diagnostické účely provést skóre symptomů dostupné u pacienta s podezřením na infekci HIV:

Přetrvávající generalizovaná lymfadenopatie 0

Změny na kůži a sliznicích 1

Hubnutí 1

Silná únava 1

Herpes simplex 2

Průjem trvající déle než 1 měsíc. 4

Horečka trvající déle než 1 měsíc. 4

Ztráta tělesné hmotnosti o více než 10 % 4

Plicní tuberkulóza 5

Opakované bakteriální infekce 5

Orální leukoplakie 5

Stomatitida, ústní drozd 5

Lokalizovaný Kaposiho sarkom 8

Kachexie 12

V tomto případě se součet bodů od 0 do 3 hodnotí jako pravděpodobnost infekce HIV velmi nízká, 4 -11 bodů - onemocnění je pravděpodobné a 12 a více bodů - velmi pravděpodobné.

Obecně platí, že klinická diagnóza infekce HIV je především diagnóza spektra patologie související s AIDS u pacienta se sekundární imunodeficiencí. Vzhledem k tomu, že HIV-indikativní onemocnění zahrnují 23 nosologických forem, je nejvhodnější syndromický přístup k diagnostice. Pacient má téměř vždy syndrom celkové intoxikace (nemotivovaná slabost, letargie, únava) rozvíjející se na pozadí déletrvající nízké horečky nebo horečky neznámého původu, často v noci a ráno, doprovázené vydatným potem. Syndrom nemotivované generalizované periferní lymfadenopatie je konstantní, ve 20 % doprovázen hepatosplenomegalií různé závažnosti. Jedním z předních syndromů onemocnění je syndrom bronchopulmonální patologie, ačkoli hluboké léze plicní tkáně ve formě pneumocystové pneumonie se vyvíjejí v pokročilých případech onemocnění, protože pneumocystis se vyvíjí na pozadí hluboké imunodeficience. Ale s trváním delším než 1 měsíc je syndrom nemotivovaného průjmu klasifikován jako s časným nástupem a je charakterizován rezistencí na lékovou terapii. Jedním ze syndromů infekce HIV je vlnovitá artralgie neznámé etiologie. Mezi nejcharakterističtější projevy onemocnění patří syndrom lézí kůže a sliznic, projevující se nespecifickou makulopapulární vyrážkou, steroid-rezistentní ekzém a stafylokokové impetigo. K dermatologickým projevům patří i recidivující mykózy (mykózy, kandidózy, bakteriální (folikulitida, furunkulóza, hidradenitida), virové (herpes) léze kůže a sliznic.V neposlední řadě je infekce HIV charakterizována také novotvary, především ve formě Kaposiho sarkomu a lymfom a také některé další typy nádorů.

Přítomnost alespoň dvou klinických a dvou klinických laboratorních (leukolyphoneutropenie, hypogamaglobulinémie) výše uvedených symptomů u pacienta umožňuje diagnostikovat infekci HIV s vysokou mírou spolehlivosti. Ale zároveň, pokud dva z velmi častých syndromů zjištěných u pacientů, jako je horečka a lymfadenopatie, přetrvávající měsíc nebo déle, přetrvávající nemotivovaný průjem, pokles tělesné hmotnosti o více než 10 % nebo hojné noční pocení způsobují vést k diagnóze diagnózy a důkladnému laboratornímu vyšetření.

V etapa 2a na onemocnění lze podezření pouze podle příznaku perzistující generalizované lymfadenopatie u rizikového pacienta nebo v přítomnosti epidemiologické anamnézy.

V etapa 2b(časná nebo mírná) somatická pohoda a normální aktivita jsou stále zachovány. Léze kůže a sliznic nejsou závažné, recidivující infekce dýchacích cest nejsou generalizované, úbytek hmotnosti nepřesahuje 10 %.

Podle doporučení WHO je spolehlivá klinická diagnóza infekce HIV u dospělých a dětí možná za přítomnosti jednoho z 12 indikátorových onemocnění AIDS: 1) kandidóza jícnu, průdušnice, průdušek a plic; 2) mimoplicní kryptokokóza; 3) kryptosporidióza s průjmem po dobu delší než jeden měsíc; 4) cytomegalovirová infekce jakéhokoli orgánu (s výjimkou a kromě jater, sleziny a lymfatických uzlin u pacienta staršího než 1 měsíc); 5) infekce způsobená virem herpes simplex, přetrvávající déle než 1 měsíc u pacienta staršího než 1 měsíc; 6) Kaposiho sarkom u pacienta mladšího 60 let; 7) mozkový lymfom u pacienta mladšího 60 let; 8) lymfocytární intersticiální pneumonie u dítěte do 13 let, 9) diseminovaná infekce způsobená bakteriemi skupiny Micobacterium avium intracellulare nebo M. Kansassii; 10) Pneumocystis pneumonie; 11) progresivní multifokální leukoencefalopatie; 12) toxoplazmóza centrálního nervového systému u pacientů starších 1 měsíce. Přítomnost jednoho z těchto onemocnění umožňuje diagnostikovat infekci HIV v nepřítomnosti sérologického enzymového imunosorbentního testu (ELISA) krve nebo dokonce v přítomnosti séronegativního výsledku.

Neméně obtížné je rozlišení fází onemocnění, tzn. diferenciace stádií podle klinických kritérií. Podle odborníků z CDC (USA) je nejobjektivnějším kritériem počet pomocných T-buněk, nikoli klinické projevy, protože řada z těchto stavů se často vyskytuje u osob neinfikovaných HIV. V roce 1991 Centrum stanovilo, že diagnózu AIDS lze stanovit, pokud: a) infikovaná osoba má jeden z 23 stavů souvisejících s AIDS nebo b) je infikována HIV a má méně než 200 CD4+ buněk/mm.

Laboratorní kritéria pro infekci HIV.

Následující testy by měly být testovány na infekci HIV:

2 . Osoby s klinickým obrazem kandidové ezofagitidy, bronchiální a plicní kandidózy, diseminované nebo mimoplicní kokcidioidomykózy, Pneumocystis pneumonie, mimoplicní kryptokokózy, kryptosporidiózy s průjmem delším než 1 měsíc, cytomegalovirem poškození vnitřních orgánů kromě jater, sleziny více než 6 měsíců, cytomegalovirová retinitida se ztrátou zraku, herpetická infekce s multifokálními vředy trvající déle než 1 měsíc, bronchitida, pneumonie nebo ezofagitida, recidivující pásový opar, diseminovaná nebo extrapulmonární histoplazmóza, plicní nebo mimoplicní tuberkulóza, isosporiáza s průjmem trvajícím déle než 1 měsíc, nebo mimoplicní infekce MAC, progresivní multifokální leukoencefalopatie, cerebrální toxoplazmóza, salmonelová septikémie, Kaposiho sarkom, lymfom, lymfoidní intersticiální pneumonie (u dětí)

V současné době se pro laboratorní diagnostiku infekce HIV používají různé metody detekce HIV, HIV antigenů a genetického materiálu a také metody detekce protilátek proti HIV. Všechny tyto metody mají různou účinnost, vyžadují různé vybavení a různé úrovně školení personálu. Výsledky těchto studií vyžadují kompetentní interpretaci.

Včasná diagnóza infekce HIV je zásadní. Na tom závisí složitost terapie a vývoj patologických komplikací. Dnes existuje mnoho inovativních výzkumných metod pro identifikaci tak hrozné diagnózy. Právě o tom bude řeč dále.

Jaké metody existují pro diagnostiku infekce HIV?

Ve skutečnosti existuje mnoho metod pro diagnostiku HIV. V průměru se dělí na podskupiny – laboratorní výzkum, diferenciální vyšetření a hardware. Kromě toho je nutné vzít v úvahu fáze diagnostických opatření. O tom všem a dalších aspektech si povíme podrobněji později.

Laboratorní diagnostika

Uvažovaná diagnostická metoda vyžaduje vysoce specializovanou laboratoř. V takových podmínkách lze identifikovat následující indikace:

Stanoví se protilátky, antigeny patogenů a imunitní komplexy.
Když je virus detekován, je kultivován a detekován genomový materiál a enzymy.
Posuzuje se funkčnost imunitního systému.
Provádí se epidemiologický dozor a sledování prevalence viru lidské imunodeficience.
Studuje se dynamika distribuce a určuje se populace.
Lze určit bezpečnost transplantace a krevní transfuze.

Pokud je detekován odpovídající patogen HIV, je pacient odeslán na další vyšetření. Poté je osoba registrována pro další sledování progrese onemocnění.

Diferenciální diagnostika

Nemoc se rozlišuje z různých důvodů:

Při prvních příznacích infekce HIV, která je v akutní fázi, zvláště pokud se jedná o syndrom podobný mononukleóze. Diagnóza je založena na patologiích, jako je infekční mononukleóza, syfilis, zarděnky, adenovirus, akutní leukémie, yersinióza, hyperkeratóza.
Pokud HIV vstoupí do stádia generalizované lymfadenopatie přetrvávající povahy, pak se rozlišují onemocnění, při kterých se lymfatické uzliny zvětšují. Například lymfocytární leukémie, syfilis, toxoplazmóza, lymfogranulomatóza. V této fázi se symptomy pacienta stávají výraznějšími.
Pokud jsou zjištěny sekundární patologie, rozlišuje se imunodeficience, která vznikla při užívání určitých skupin léků - radiační terapie, použití glukokortikosteroidů a cytostatik. Imunita je také výrazně snížena u nemocí, jako je myelom, lymfoidní leukémie, rakovina atd.
Pokud je HIV lokalizován v ústní dutině, pak se rozlišují onemocnění ústní sliznice.

Expresní diagnostika

Dnes jsou dokonce vyvinuty rychlotesty, díky kterým lze přítomnost HIV infekce zjistit do 15 minut. Je jich několik druh:

Nejpřesnější test je imunochromatografický. Test se skládá ze speciálních proužků, na které se nanáší kapilární krev, moč nebo sliny. Pokud jsou detekovány protilátky proti HIV, má proužek barevnou linku a kontrolní linku. Pokud je odpověď ne, je patrná pouze čára.
Sady pro domácí použití "OraSure Technologies1". Vývojář - Amerika. Tento test byl schválen FDA.
Existují další rychlé testy, které však nemají schválení specialistů, a proto se nedoporučují k testování.

Pokud je zjištěna pozitivní reakce na virus lidské imunodeficience, je nutné dodatečně provést příslušné vyšetření v klinickém prostředí.

Včasná diagnóza

Existuje včasná diagnóza HIV, aby bylo možné rychle určit rizika poškození imunity. Díky tomu je onemocnění v počátečních fázích zastaveno, v důsledku čehož se infekce dalších vnitřních orgánů sníží na minimum.

Chcete-li nezávisle diagnostikovat patologii v raných stádiích, věnujte pozornost příznakům, které existují:

Polymerázová řetězová reakce

PCR nebo polymerázová řetězová reakce se používá k určení jakéhokoli infekčního patogenu, včetně viru HIV. V tomto případě je detekována jeho RNA a patogen může být detekován ve velmi raných stádiích (po infekci musí uplynout alespoň 10 dní).

Jedná se o poměrně nákladnou diagnózu, ale v některých případech může poskytnout falešný výsledek. Proto se při testování na HIV navíc používají další metody.

Kvantitativní exprese polymerázové řetězové reakce je potřebná pro stanovení rychlosti rozvoje HIV a komplikací, jako je AIDS. To umožňuje včas určit prognózu délky života pacienta infikovaného HIV.

Imunitní blotting

Imunitní blotting je poslední metodou vyšetření pacienta před stanovením přesné diagnózy. Technika je založena na použití specializovaného proužku (nitrocelulóza) s virovými proteiny. Lékař odebere žilní krev a poté ji odešle ke zpracování. Po tomto procesu se syrovátkové proteiny rozdělí na gelovitou látku na základě molekulové hmotnosti a náboje. K tomuto účelu slouží zařízení s aktivním elektrickým polem. Potom se výše uvedený proužek umístí do tohoto gelu a blotuje, to znamená, že se blotuje. To se provádí ve specializované komoře.

Výsledek je určen vazbou krevních bílkovin na bílkoviny aplikované na nitrocelulózový proužek. Pokud je HIV přítomen v těle pacienta, objeví se jednotlivé čáry. Existují určité indikátory pro identifikaci linií, které signalizují přítomnost HIV. Existují ale i podhodnocená čísla. V tomto případě existuje riziko rozvoje počátečního stadia viru lidské imunodeficience, vzniku onkologických nádorů, tuberkulózy a krevní transfuze.

ELISA test

Test ELISA je screeningová metoda pro podezření na infekci HIV. Výzkum probíhá v laboratorních podmínkách. Právě tam vznikají specifické chorobné proteiny, které jsou schopny zachytit proteiny produkované lidským tělem. Při interakci s činidly se barva indikátoru změní. Nedetekuje se tedy samotný patogen, ale protilátky proti viru. Tento test dokáže detekovat virus lidské imunodeficience v raných fázích vývoje.

Existuje několik typů testů ELISA, ale používá se pouze nejnovější vývoj - 3. a 4. generace. Technika je založena na odběru krevní tekutiny ze žíly. Existuje určitá příprava - pacient by neměl jíst jídlo 8 hodin před testem. Proto se krev odebírá ráno nalačno.

Jak probíhá diagnostika během inkubační doby?

Inkubační doba viru HIV je 90 dní. Během tohoto období je obtížné detekovat přítomnost patologie, ale to lze provést pomocí PCR.

Poté je člověk po dobu jednoho roku pod pečlivým dohledem lékařů a podstupuje několik vyšetření. Teprve po tomto období lze s jistotou stanovit diagnózu HIV.

Vlastnosti diagnostiky u dětí

Pokud se ženě s diagnózou viru lidské imunodeficience narodí dítě, je dítě vyšetřeno během prvních 3 let života. Faktem je, že v tomto období mohou být v krevní tekutině dítěte přítomny mateřské protilátky. Ale ani krevní testy nepotvrdí infekci. Samozřejmě existuje mnoho případů, kdy je nemoc diagnostikována hned po narození. Přečtěte si více o těhotenství s infekcí HIV.

První testy na HIV se odebírají dítěti druhý den po narození. Poté po dosažení 2 měsíců, poté každé 4 měsíce.

K detekci patologie v dětství se používají sérologické vyšetřovací metody a PCR. Právě druhý typ diagnózy onemocnění umožňuje identifikovat DNA a RNA viru v prvních měsících života dítěte. K tomu se odebírá krev dítěte, která se následně umístí do zkumavky obsahující konzervant EDTA. Materiál se poté skladuje 2 dny při teplotě nepřesahující 8 stupňů. Ale zmrazení krve také není přípustné. Lze použít i sušenou krevní tekutinu, která se získává z plné krve a suší se.

Etapy diagnostiky

Diagnostická opatření k identifikaci viru lidské imunodeficience se provádějí ve třech hlavních fázích:

Předběžné třídění, známé také jako prosévání.
Referenční diagnostika.
Konfirmační stadium nebo odborná diagnóza.

Třídění – předtřídění

Předběžná fáze vyšetření umožňuje stanovit celkové protilátky pomocí enzymatického imunosorbentního testu, tedy ELISA. Informace o přítomnosti viru můžete získat do 3 měsíců po infekci. Ale vyskytly se případy detekce patogenu v dřívějších stádiích - po 3 týdnech.

Musíte vědět, že ELISA může za určitých podmínek poskytnout falešně pozitivní výsledek. To se může stát během těhotenství, s autoimunitními onemocněními (psoriáza, revmatismus, lupus atd.), Epstein-Barovou chorobou a dalšími patologiemi.

Referenční diagnostika

V této fázi se používají různé testy minimálně dvakrát, maximálně třikrát. Pokud je ve dvou případech výsledek pozitivní, je vyžadován krok potvrzení.

Etapa potvrzení – expert

V této fázi se diagnostika provádí pomocí imunoblotu. Protilátky se stanovují podle určitých proteinů patogenu. Výsledek bývá přesný, ale existují i případy falešných poplachů. To je možné s terminálním stádiem rozvoje AIDS a v době klidu onemocnění HIV. Proto je důležité po určité době zákrok podstoupit dodatečně.

Chyby během diagnostiky

Jakkoli se to může zdát paradoxní, existuje možnost získání falešně pozitivního výsledku. To se obvykle děje při domácím testování, zejména při použití rychlých testů. V klinickém prostředí je to možné pouze u určitých onemocnění nebo stavů:

období těhotenství;
zkřížená reakce těla;
autoimunitní patologické poruchy;
nachlazení v akutním stadiu;
onkologické novotvary;
tuberkulóza;
skleróza.

Zvláštností je, že pokud je člověk infikován viry a plísněmi, pak může být výsledek testu také falešný. To platí zejména pro alergické stavy.

Příprava na testy

Je velmi důležité dodržovat pravidla pro přípravu na testy HIV, protože na tom závisí přesnost výsledku:

Nejprve musíte navštívit příslušného specialistu, aby vám dal přesné pokyny k přípravným činnostem.
Krevní testy se odebírají vždy nalačno. Před odchodem na kliniku byste proto neměli nic jíst. Vaše poslední jídlo by mělo být nejpozději do 21:00.
V den testování je zakázáno kouření.
Večer předtím byste neměli pít alkohol.
Pokud užíváte nějaké léky, určitě se předem poraďte s lékařem. Protože mnoho léků je zakázáno před provedením testu na HIV.
Několik dní před odběrem analýzy se nedoporučuje provádět ultrazvukové vyšetření.
Den až dva před zákrokem není vhodné jíst nadměrně tučná jídla nebo konzumovat hodně sladkostí.

Diagnóza infekce HIV (video)

Více o různých diagnostických metodách HIV se můžete dozvědět od kvalifikovaných odborníků. Chcete-li to provést, měli byste se podívat na následující video.

V současné době nové diagnostické technologie umožňují identifikovat etiologické a patogenetické příčiny řady onemocnění a radikálně ovlivnit výsledky léčby. Snad nejpůsobivějších výsledků zavádění těchto technologií do klinické praxe bylo dosaženo v oblasti imunologie a diagnostiky infekčních onemocnění.

Testovací systémy založené na enzymatickém imunosorbentu a chemiluminiscenční imunoanalýze dokážou detekovat protilátky různých tříd, což významně zvyšuje informační obsah klinických a analytických metod senzitivity a specificity pro diagnostiku infekčních onemocnění. Je třeba poznamenat, že nejvýznamnější pokroky v diagnostice infekcí jsou spojeny se zavedením metody polymerázové řetězové reakce do laboratorní praxe, která je považována za „zlatý standard“ v diagnostice a hodnocení účinnosti léčby řady infekčních onemocnění. nemocí.

Pro výzkum lze použít různé biologické materiály: sérum, krevní plazmu, seškrab, biopsii, pleurální nebo mozkomíšní mok (CSF). Nejprve jsou metody laboratorní diagnostiky infekcí zaměřeny na identifikaci onemocnění, jako je virová hepatitida B, C, D, cytomegalovirová infekce, sexuálně přenosné infekce (kapavka, chlamydie, mykoplazma, ureaplasma), tuberkulóza, infekce HIV atd.

Infekce HIV je onemocnění způsobené virem lidské imunodeficience (HIV), který dlouhodobě přetrvává v lymfocytech, makrofázích a buňkách nervové tkáně, což má za následek rozvoj pomalu progresivního poškození imunitního a nervového systému těla, projevující se sekundárními infekcemi, nádory, subakutní encefalitidou a dalšími patologickými stavy.

Původci infekce - viry lidské imunodeficience typu 1 a 2 (HIV-1, HIV-2) - patří do rodiny retrovirů, podrodiny pomalých virů. Viriony jsou kulovité částice o průměru 100-140 nm. Virová částice má vnější fosfolipidový obal, který zahrnuje glykoproteiny (strukturální proteiny) s určitou molekulovou hmotností, měřenou v kilodaltonech. U HIV-1 jsou to gpl60, gpl20, gp41. Vnitřní obal viru, pokrývající jádro, představují také proteiny o známé molekulové hmotnosti - p17, p24, p55 (HIV-2 obsahuje gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

Genom HIV obsahuje RNA a enzym reverzní transkriptázu (revertázu). Aby se genom retroviru spojil s genomem hostitelské buňky, je DNA nejprve syntetizována na virovém RNA templátu pomocí reverzní fáze. Provirová DNA je pak integrována do genomu hostitelské buňky. HIV má výraznou antigenní variabilitu, která výrazně převyšuje variabilitu viru chřipky.

V lidském těle jsou hlavním cílem HIV T-lymfocyty, které na svém povrchu nesou největší počet CD4 receptorů. Poté, co HIV vstoupí do buňky pomocí reverzní fáze, virus syntetizuje DNA na základě svého vzorku RNA, která je integrována do genetického aparátu hostitelské buňky (CD4 lymfocyty) a zůstává zde po celý život ve stavu proviru. Kromě pomocníků T-lymfocytů jsou postiženy makrofágy, B-lymfocyty, neurogliové buňky, střevní sliznice a některé další buňky. Důvodem poklesu počtu T-lymfocytů (CD4 buněk) je nejen přímý cytopatický účinek viru, ale také jejich fúze s neinfikovanými buňkami. Spolu s poškozením T-lymfocytů dochází u pacientů s infekcí HIV k polyklonální aktivaci B-lymfocytů se zvýšením syntézy imunoglobulinů všech tříd, zejména IgG a IgA, a následnému vyčerpání této části imunitního systému. Dysregulace imunitních procesů se projevuje i zvýšením hladiny α-interferonu, β2-mikroglobulinu a snížením hladiny IL-2. V důsledku dysfunkce imunitního systému, zejména při poklesu počtu T lymfocytů (CD4) na 400 buněk v 1 μl krve nebo méně, vznikají podmínky pro nekontrolovanou replikaci HIV s výrazným zvýšením počtu virionů v různých prostředí těla. V důsledku poškození mnoha částí imunitního systému se člověk infikovaný HIV stává bezbranným vůči patogenům různých infekcí.

Na pozadí zvyšující se imunosuprese se rozvíjejí těžká progresivní onemocnění, která se u člověka s normálně fungujícím imunitním systémem nevyskytují. Jde o nemoci, které Světová zdravotnická organizace (WHO) definovala jako nemoci označující AIDS nebo nemoci definující AIDS.

Nemoci definující AIDS

První skupina - onemocnění spojená pouze s těžkou imunodeficiencí (úroveň CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Druhou skupinou jsou onemocnění, která se mohou vyvinout jak na pozadí těžké imunodeficience, tak v některých případech i bez ní.

Proto je v těchto případech nutné laboratorní potvrzení diagnózy.

První skupina:

kandidóza jícnu, průdušnice, průdušek;
mimoplicní kryptokokóza;
kryptosporidióza s průjmem delším než 1 měsíc;
cytomegalovirové léze různých orgánů jiných než játra, slezina nebo lymfatické uzliny u pacienta staršího 1 měsíce;
infekce způsobená virem herpes simplex, projevující se vředy na kůži a sliznici, které přetrvávají déle než 1 měsíc, dále bronchitida, pneumonie nebo ezofagitida jakéhokoli trvání, postihující pacienta staršího 1 měsíce;
generalizovaný Kaposiho sarkom u pacientů mladších 60 let;
mozkový lymfom (primární) u pacientů mladších 60 let;
lymfocytární intersticiální pneumonie a/nebo plicní lymfoidní dysplazie u dětí mladších 12 let;
diseminovaná infekce způsobená atypickými mykobakteriemi (mykobakteriemi komplexu M. aviumintracellulare) s mimoplicní lokalizací nebo lokalizací (kromě plic) v kůži, krčních lymfatických uzlinách, lymfatických uzlinách kořenů plic;
Pneumocystis pneumonie;
progresivní multifokální leukoencefalopatie;
cerebrální toxoplazmóza u pacientů starších 1 měsíce.

Druhá skupina:

bakteriální infekce, kombinované nebo recidivující, u dětí do 13 let (více než dva případy během 2 let sledování): sepse, zápal plic, meningitida, poškození kostí nebo kloubů, abscesy způsobené Haemophilus influenzae, streptokoky;
diseminovaná kokcidioidomykóza (mimopulmonální lokalizace);
HIV encefalopatie (HIV demence, AIDS demence);
histoplazmóza s průjmem přetrvávajícím déle než 1 měsíc;
isosporóza s průjmem přetrvávajícím déle než 1 měsíc;
Kaposiho sarkom v jakémkoli věku;
mozkový lymfom (primární) u lidí jakéhokoli věku;
jiné B-buněčné lymfomy (kromě Hodgkinovy choroby) nebo lymfomy neznámého imunofenotypu: malobuněčné lymfomy (jako je Burkittův lymfom atd.); imunoblastické sarkomy (imunoblastické, velkobuněčné, difuzní histiocytární, difuzní nediferencované lymfomy);
diseminovaná mykobakterióza (nikoli tuberkulóza) s poškozením kůže, krčních nebo hilových lymfatických uzlin kromě plic;
mimoplicní tuberkulóza (postihující vnitřní orgány jiné než plíce);
Salmonella septikémie, opakující se;
HIV dystrofie (vyhublost, náhlá ztráta hmotnosti).

Tabulka 1 (viz zdrojový odkaz výše) uvádí nemoci definující AIDS a jejich etiologické agens.

Existuje mnoho klasifikací AIDS.

Podle nové klasifikace navržené Centrem pro kontrolu nemocí v USA (tabulka 2 - viz odkaz na zdroj výše) je diagnóza AIDS stanovena u osob s počtem CD4 lymfocytů nižším než 200/μl, a to i v r. nepřítomnost nemocí definujících AIDS.

Kategorie B zahrnuje různé syndromy, z nichž nejvýznamnější jsou bacilární angiomatóza, orofaryngeální kandidóza, recidivující vulvovaginální kandidóza, obtížně léčitelná, cervikální dysplazie, cervikální karcinom, idiopatická trombocytopenická purpura, listerióza, periferní neuropatie.

Protilátky proti HIV-1 a HIV-2 v krvi

Protilátky proti HIV-1 a HIV-2 normálně v krevním séru chybí.

Stanovení protilátek proti HIV je hlavní metodou laboratorní diagnostiky infekce HIV. Metoda je založena na enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) - senzitivita je více než 99,5 %, specificita je více než 99,8 %. Protilátky proti HIV se objeví u 90-95% infikovaných lidí do 1 měsíce po infekci, u 5-9% - po 6 měsících, u 0,5-1% - později. Během stadia AIDS se může počet protilátek snižovat, až úplně vymizí.

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně: pozitivní nebo negativní.

Negativní výsledek testu indikuje nepřítomnost protilátek proti HIV-1 a HIV-2 v krevním séru. Laboratoř vydá negativní výsledek okamžitě, když je připravena. Pokud je získán pozitivní výsledek - průkaz protilátek proti HIV - aby se zabránilo falešně pozitivním výsledkům v laboratoři, analýza se opakuje ještě 2krát.

Imunoblotting na protilátky proti virovým proteinům HIV v krevním séru

Protilátky proti virovým proteinům HIV v krevním séru normálně chybí.

Metoda ELISA pro stanovení protilátek proti HIV je screeningová metoda. Při pozitivním výsledku se k potvrzení jeho specifičnosti používá metoda imunoblotování - Western-blot - protisrážení v gelu protilátek v krevním séru pacienta s různými virovými proteiny, podrobeno separaci podle molekulové hmotnosti pomocí elektroforézy a aplikováno na nitrocelulózu. Stanoví se protilátky proti virovým proteinům gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17 atd.

Dle doporučení Ruského centra pro prevenci a kontrolu AIDS je třeba za pozitivní výsledek považovat průkaz protilátek proti některému z glykoproteinů gp41, gpl20, gpl60. Pokud jsou detekovány protilátky proti jiným virovým proteinům, výsledek je považován za pochybný, takový pacient by měl být vyšetřen dvakrát - po 3 a 6 měsících.

Absence protilátek proti specifickým HIV proteinům znamená, že metoda enzymové imunoanalýzy poskytla falešně pozitivní výsledek. Zároveň je při praktické práci při posuzování výsledků metody imunoblotování nutné postupovat podle návodu dodávaného firmou k použitému „Immunoblotting Kitu“.

Pro laboratorní diagnostiku infekce HIV se používá metoda imunoblotování.

Antigen p24 v krevním séru

Antigen p24 normálně v krevním séru chybí.

Antigen p24 je stěnový protein nukleotidu HIV. Stádium primárních projevů po infekci HIV je důsledkem nástupu replikačního procesu. Antigen p24 se objevuje v krvi 2 týdny po infekci a může být detekován metodou ELISA v období 2 až 8 týdnů. Po 2 měsících od okamžiku infekce antigen p24 z krve zmizí. Následně je v klinickém průběhu HIV infekce pozorováno druhé zvýšení hladiny proteinu p24 v krvi. Klesá při vzniku AIDS. Pro včasnou detekci HIV u dárců krve a dětí, stanovení prognózy průběhu AIDS a sledování terapie u pacientů s AIDS se využívají stávající testovací systémy ELISA pro detekci antigenu p24. ELISA má vysokou analytickou citlivost, která umožňuje detekovat antigen HIV-1 p24 v krevním séru v koncentraci 5-10 pkg/ml a HIV-2 - méně než 0,5 ng/ml a specificitu. Je však třeba poznamenat, že hladina antigenu p24 v krvi podléhá individuálním odchylkám, což znamená, že pouze 20–30 % pacientů lze tímto testem detekovat v časném období po infekci (Rose N.R. et al., 1997).

Protilátky proti antigenu p24 třídy IgM a IgG se objevují v krvi od 2. týdne, dosáhnou vrcholu během 2-4 týdnů a zůstávají na této úrovni různě dlouho: Protilátky třídy IgM - několik měsíců, vymizí do jednoho roku po infekce a IgG protilátky mohou přetrvávat roky.

Algoritmus diagnostiky HIV infekce závisí na fázi onemocnění a je charakterizován změnami v dynamice detekce protilátek různých tříd (obr. 1, 2 - viz odkaz na zdroj výše).

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně - pozitivní nebo negativní. Negativní výsledek testu indikuje nepřítomnost protilátek proti HIV-1 a HIV-2 a antigenu p24 v krevním séru.

Laboratoř vydá negativní výsledek okamžitě, když je připravena. V případě pozitivního výsledku – průkaz protilátek proti HIV-1 a HIV-2 a/nebo antigenu p24 – aby se předešlo falešně pozitivním výsledkům v laboratoři, se analýza ještě 2x opakuje.

Bez ohledu na výsledky studie odešle laboratoř vzorek krve pacienta a výsledky 3 studií do regionálního AIDS centra k potvrzení pozitivního výsledku nebo ověření neurčitého výsledku. V takových případech konečnou odpověď na tuto studii vydává regionální AIDS centrum.

Detekce HIV pomocí polymerázové řetězové reakce (kvalitativní)

Detekce HIV pomocí polymerázové řetězové reakce - PCR (kvalitativní) se provádí za účelem:

rozlišení sporných výsledků imunoblotování;
pro včasnou diagnostiku infekce HIV;
sledování účinnosti antivirové léčby;
stanovení stadia AIDS (přechod infekce v nemoc).

Během primární infekce HIV může metoda PCR detekovat HIV RNA v krvi 10-14 dní po infekci.

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně: pozitivní nebo negativní. Negativní výsledek testu indikuje nepřítomnost HIV RNA v krvi.

Pozitivní výsledek - detekce HIV RNA - naznačuje, že pacient je infikován.

Detekce HIV pomocí polymerázové řetězové reakce (kvantitativní)

Normálně v krvi není žádný HIV.

Přímá kvantifikace HIV RNA pomocí PCR umožňuje přesněji předpovídat rychlost rozvoje AIDS u lidí infikovaných HIV než stanovení počtu buněk CD4, a tedy přesněji posoudit jejich přežití. Vysoké hladiny virových částic obvykle korelují se závažným poškozením imunity a nízkým počtem buněk CD4. Nízké hladiny virových částic obecně korelují s lepším imunitním stavem a vyšším počtem buněk CD4. Obsah virové RNA v krvi nám umožňuje předpovědět přechod onemocnění do klinického stadia. Když je obsah HIV RNA-1 >74 100 kopií/ml, téměř u všech pacientů se rozvine klinický obraz AIDS (Senior D., Holden E., 1996).

Pravděpodobnost rozvoje AIDS je 10,8krát vyšší u osob s krevními hladinami HIV-1 > 10 000 kopií/ml než u osob s krevními hladinami HIV-1<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Skupina amerických expertů vyvinula indikace pro léčbu pacientů s HIV. Léčba je indikována u pacientů s nízkým počtem CD4 buněk v krvi<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20 000 kopií/ml (PCR). Výsledky antiretrovirové terapie u lidí infikovaných HIV jsou hodnoceny snížením hladiny HIV RNA v séru.

Při účinné léčbě by se hladina virémie měla během prvních 8 týdnů snížit 10krát a měla by být pod limitem citlivosti metody (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.

Dnes je tedy k diagnostice infekce HIV zavedeno mnoho výzkumných metod, které se používají v klinické praxi, stejně jako u všech ostatních virových infekcí. Mezi nimi hrají hlavní roli sérologické studie. Hlavní metody diagnostiky infekcí HIV jsou uvedeny v tabulce 3 (viz zdrojový odkaz výše), kde jsou rozděleny do čtyř úrovní v závislosti na důležitosti každé metody pro detekci virů:

A - test se obvykle používá k potvrzení diagnózy;
B - test je za určitých okolností užitečný pro diagnostiku určitých forem infekce;
C - test se pro diagnostické účely používá zřídka, ale má velký význam pro epidemiologické průzkumy;
D test není obvykle používán laboratořemi pro diagnostické účely.

Protože pro diagnostiku virových infekcí je kromě výběru optimální analytické metody stejně důležitá i správná identifikace a sběr biomateriálu pro výzkum, tabulka 4 (viz odkaz na zdroj výše) poskytuje doporučení pro výběr optimálního biomateriálu pro studium HIV infekce.

Pro sledování HIV infikovaných osob je třeba využít možností komplexního studia imunitního stavu – kvantitativního a funkčního stanovení všech jeho vazeb: humorální, buněčné imunity a nespecifické rezistence obecně.

V moderních laboratorních podmínkách vícestupňový princip hodnocení imunologického stavu zahrnuje stanovení subpopulace lymfocytů a krevních imunoglobulinů. Při hodnocení indikátorů je třeba vzít v úvahu, že HIV infekce je charakterizována poklesem poměru T-buněk CD4/CD8 na méně než 1. Index CD4/CD8 1,5-2,5 ukazuje na normergní stav, více než 2,5 znamená hyperaktivita, méně 1,0 – svědčí o imunodeficienci. Také poměr CD4/CD8 může být menší než 1 v závažných případech zánětlivého procesu.

Tento poměr má zásadní význam při hodnocení imunitního systému u pacientů s AIDS, protože HIV selektivně infikuje a ničí CD4 lymfocyty, v důsledku čehož poměr CD4/CD8 klesá na hodnoty výrazně nižší než 1.

Hodnocení imunologického stavu je také založeno na identifikaci obecných nebo „hrubých“ defektů v buněčném a humorálním imunitním systému: hypergamaglobulinémie (zvýšené koncentrace IgA, IgM, IgG) nebo hypogamaglobulinémie v terminálním stadiu; zvýšená koncentrace cirkulujících imunitních komplexů; snížená produkce cytokinů; oslabení odpovědi lymfocytů na antigeny a mitogeny.

Porušení poměru populací v obecném fondu B-lymfocytů je charakteristické pro insuficienci humorální imunity. Tyto změny však nejsou specifické pro infekci HIV a mohou se objevit i u jiných onemocnění. Při komplexním hodnocení řady dalších laboratorních parametrů je třeba vzít v úvahu, že HIV infekce je také charakterizována: anémií, lymfo- a leukopenií, trombocytopenií, zvýšenými hladinami β2-mikroglobulinu a C-reaktivního proteinu a zvýšenou hladinou transamináz. aktivita v krevním séru.

... diagnostika jakéhokoli infekčního onemocnění je založena na srovnání epidemiologických, klinických a laboratorních údajů a zveličování významu jedné ze skupin těchto údajů může vést k diagnostickým chybám.

Diagnostika infekce HIV zahrnuje dvě fáze:
já etapa - zjištění skutečného faktu infekce HIV ;
II etapa - určení stadia onemocnění .

STANOVENÍ SKUTEČNOSTI HIV INFEKCE

Zjištění skutečného faktu o infekci HIV (to znamená identifikace osob infikovaných HIV) také zahrnuje dvě fáze:
Fáze I- spojený imunosorbentní test(ELISA): metoda ELISA je screeningová (výběrová) metoda - výběr pravděpodobně infikovaných jedinců, to znamená, že jejím cílem je identifikovat podezřelé jedince a eliminovat zdravé jedince; Protilátky proti HIV se detekují pomocí jiných protilátek proti požadovaným protilátkám (protilátky proti jiným protilátkám). Tyto „pomocné“ protilátky jsou značeny enzymem. Všechny screeningové testy musí být vysoce citlivé, aby nezmeškaly pacienta. Z tohoto důvodu není jejich specificita příliš vysoká, to znamená, že ELISA může dát pozitivní odpověď („pravděpodobně nemocná“) u neinfikovaných lidí (například u pacientů s autoimunitními chorobami: revmatismus, systémový lupus erythematodes atd.). Frekvence falešně pozitivních výsledků při použití různých testovacích systémů se pohybuje od 0,02 do 0,5 %. Pokud test ELISA osoby dává pozitivní výsledek, je nutné další vyšetření, aby se potvrdila skutečnost, že jde o infekci HIV. Při provádění ELISA jsou falešně negativní výsledky možné ve 3–5 % případů – pokud k infekci došlo relativně nedávno a hladina protilátek je stále velmi nízká, nebo v terminálním stadiu onemocnění, charakterizovaném závažným poškozením imunitního systému s hlubokým narušením procesu tvorby protilátek. Pokud tedy existují důkazy o kontaktu s lidmi nakaženými virem HIV, provádějí se opakované studie obvykle po 2 - 3 měsících.
Etapa II - imunoblotování(upravený Western Blot, Western Blot): je složitější metoda a slouží k potvrzení faktu infekce. Tato metoda nedetekuje komplexní protilátky proti HIV, ale protilátky proti jeho jednotlivým strukturním proteinům (p24, gp120, gp41 atd.). Výsledky imunoblotu jsou považovány za pozitivní, pokud jsou detekovány protilátky alespoň proti třem proteinům, z nichž jeden je kódován geny env, druhý geny gag a třetí geny pol. Pokud jsou detekovány protilátky proti jednomu nebo dvěma proteinům, je výsledek považován za sporný a vyžaduje potvrzení. Ve většině laboratoří je diagnóza HIV infekce stanovena, pokud jsou současně detekovány protilátky proti proteinům p24, p31, gp4l a gpl20/gp160. Podstata metody: virus je zničen na složky (antigeny), které se skládají z ionizovaných aminokyselinových zbytků, a proto mají všechny složky navzájem odlišný původ; pak pomocí elektroforézy (elektrického proudu) jsou antigeny distribuovány na povrch proužku - pokud testované sérum obsahuje protilátky proti HIV, pak budou interagovat se všemi skupinami antigenů, což lze detekovat.

Je třeba mít na pamětiže protilátky proti HIV se objeví u 90-95 % nakažených do 3 měsíců po infekci, u 5-9 % nakažených se protilátky proti HIV objeví po 6 měsících a u 0,5-1 % nakažených se protilátky proti HIV objeví v pozdějších termínech. Během stadia AIDS se může počet protilátek snižovat, až úplně vymizí.

V imunologii existuje takový koncept jako "sérologické okénko" - doba od infekce do objevení se takového množství protilátek, které lze detekovat. U HIV toto období obvykle trvá od 2 do 12 týdnů, ve vzácných případech déle. Během „sérologického okna“ je podle testů člověk zdravý, ale ve skutečnosti je infikován HIV. Bylo zjištěno, že DNA HIV může zůstat v lidském genomu po dobu nejméně tří let bez známek aktivity a protilátky proti HIV (markery infekce HIV) se neobjevují.

Během tohoto období („sérologické okno“) je možné identifikovat osobu infikovanou HIV a dokonce i 1-2 týdny po infekci pomocí polymerázová řetězová reakce(PCR). Jedná se o extrémně citlivou metodu – teoreticky lze detekovat 1 DNA na 10 ml média. Podstata metody je následující: pomocí polymerázové řetězové reakce se získá mnoho kopií nukleové kyseliny (virus je nukleová kyselina - DNA nebo RNA - v proteinovém obalu), které jsou následně identifikovány pomocí značených enzymů nebo izotopů a také jejich charakteristickou strukturou. PCR je nákladná diagnostická metoda, proto se nepoužívá pro screening ani rutinně.

STANOVENÍ STÁDIÍ ONEMOCNĚNÍ

Rozvoj AIDS je založen na, především destrukce T-lymfocytů-pomocníků, označených monoklonálními protilátkami - diferenciačními shluky - jako CD4. V tomto ohledu je diagnostika a sledování progrese onemocnění nemožné bez sledování subpopulace pomocných T buněk, což se nejvýhodněji provádí pomocí laserového třídiče buněk.

Pro mírnou infekci HIV Počet T-lymfocytů je extrémně variabilní ukazatel. Obecně lze říci, že pokles počtu CD4 buněk (absolutní i relativní) je zjišťován u jedinců, u kterých došlo k infekci HIV alespoň před rokem. Na druhé straně je v časných stádiích infekce často prudce zvýšený počet supresorových T buněk (CD8) jak v periferní krvi, tak ve zvětšených lymfatických uzlinách.

S těžkým AIDS Absolutní většina pacientů má snížený celkový počet T-lymfocytů (méně než 1000 v 1 μl krve včetně CD4 lymfocytů - méně než 22 v 1 μl, přičemž absolutní hodnota obsahu CD8 zůstává v mezích normy). V souladu s tím se poměr CD4/CD8 prudce snižuje. Reakce T buněk in vitro na standardní antigeny a mitogeny jsou sníženy v přísném souladu s relativně sníženým počtem CD4.

Pro pozdní stadia AIDS Charakterizovaná celkovou lymfopenií, neutropenií, trombocytopenií (respektive snížením počtu lymfocytů, neutrofilů a krevních destiček), anémií. Tyto změny mohou být důsledkem centrální inhibice krvetvorby v důsledku poškození krvetvorných orgánů virem a také autoimunitní destrukce buněčných subpopulací na periferii. Kromě toho je AIDS charakterizován mírným zvýšením množství gama globulinů s dominantním zvýšením obsahu IgG. Pacienti se závažnými příznaky AIDS mají často zvýšené hladiny IgA. V některých stádiích onemocnění se výrazně zvyšuje hladina markerů AIDS, jako je 1-mikroglobulin, acidorezistentní interferon, 1-thymosin. Totéž se děje se sekrecí volného neopterinu, metabolitu makrofágů. Relativní význam každého z uvedených testů, jejichž počet neustále narůstá, zatím nelze posoudit. Proto by měly být zvažovány v interakci s markery HIV infekce, a to jak imunovirologickými, tak cytologickými. Klinický krevní test je charakterizován leukopenií, lymfopenií (respektive snížením počtu leukocytů a lymfocytů).

Fáze 1 - " inkubační fázi» - protilátky proti HIV dosud nebyly zjištěny; diagnóza infekce HIV v této fázi je stanovena na základě epidemiologických údajů a musí být laboratorně potvrzena průkazem viru lidské imunodeficience, jeho antigenů a nukleových kyselin HIV v krevním séru pacienta;
Fáze 2 - " stádium primárních projevů» - v tomto období již dochází k tvorbě protilátek:;
Fáze 2A – “ asymptomatické» - HIV infekce se projevuje pouze tvorbou protilátek;
Fáze 2B – “ akutní infekce HIV bez sekundárních onemocnění» - široké plazmatické lymfocyty - v krvi pacientů lze detekovat „mononukleární buňky“ a často je pozorován přechodný pokles hladiny CD4 lymfocytů (akutní klinická infekce je pozorována u 50-90 % infikovaných jedinců v prvních 3 měsíce po infekci; začátek období akutní infekce zpravidla předchází sérokonverzi, tj. výskyt protilátek proti HIV);
Fáze 2B – “ akutní infekce HIV se sekundárními chorobami» - na pozadí poklesu hladiny CD4 lymfocytů a z toho vyplývající imunodeficience se objevují sekundární onemocnění různé etiologie (angína, bakteriální a Pneumocystis pneumonie, kandidóza, herpetická infekce atd.);
Fáze 3 - " latentní» - v reakci na progresi imunodeficience dochází k modifikaci imunitní odpovědi v podobě nadměrné reprodukce CD4 buněk s následným postupným snižováním hladiny CD4 lymfocytů v průměru rychlostí 0,05-0,07x109/l za rok; protilátky proti HIV jsou detekovány v krvi;
Fáze 4 - " stádiu sekundárních onemocnění» - deplece lymfocytů populace CD4, výrazně klesá koncentrace protilátek proti viru (v závislosti na závažnosti sekundárních onemocnění se rozlišují stadia 4A, 4B, 4B);
Fáze 5 - " terminální fáze» - typicky pokles počtu CD4 buněk pod 0,05x109/l; koncentrace protilátek proti viru výrazně klesá nebo protilátky nemusí být detekovány.