Způsob odběru materiálu pro PCR z ucha. Pokyny pro odběr, skladování a přepravu biologického materiálu pro laboratorní výzkum

Provádění výzkumu metodou PCR je povoleno na základě existujících laboratoří za předpokladu, že laboratoř má samostatné pracovní prostory nebo pracovní prostory přidělené v rámci jiných funkčních prostor, které odpovídají fázím analýzy PCR.

Laboratoř PCR musí zahrnovat následující minimální soubor pracovních prostor:

• příjem, evidence, analýza a prvotní zpracování materiálu;
• izolace DNA/RNA;
• příprava reakčních směsí a provádění PCR;
• detekce produktů amplifikace elektroforézou nebo Hyphae.

Je důležité si uvědomit, že při použití metody není potřeba detegovat produkty amplifikace elektroforézou. Proto není potřeba přidělovat v laboratoři pracovní prostor pro elektroforézu.

V laboratořích PČR je také nutné zajistit přítomnost pomocných prostor: archiv (pro účetní doklady), sborovnu, kancelář vedoucího, šatny pro zaměstnance, jídelny, sociální místnosti (WC), technické místnosti ( sklad).

V ideálním případě je nutné mít autokláv pro dezinfekci testovaného materiálu. Může být sdílen s ostatními odděleními instituce, pokud jsou splněny požadavky na biologickou bezpečnost.

Prostory pro provádění prací ve fázích PCR analýzy musí být boxovány (boxy s preboxy). V oblasti příjmu, evidence, analýzy a prvotního zpracování materiálu provádět příjem materiálu, přípravu vzorků (třídění, značení, odstřeďování atd.), skladování a primární inaktivaci zbytků biomateriálu dezinfekčními prostředky. Prostor pro příjem, evidenci, analýzu a prvotní zpracování materiálu je umístěn v místnosti příjmu materiálu nebo v samostatné boxové místnosti. Zde můžete také přijímat a zpracovávat vzorky pro výzkum pomocí jiných metod (např. imunologie), za předpokladu, že je pro analýzu PCR přidělena samostatná vybavená pracovní stanice.

Oblast izolace DNA/RNA umístěn v samostatné místnosti. Při organizování PCR laboratoře na základě existující laboratoře je povolena izolace DNA/RNA v prostorách, kde se provádějí jiné typy výzkumu, s výjimkou prací genového inženýrství. V tomto případě je v místnosti uspořádán pracovní prostor pro izolaci DNA/RNA, ve kterém je umístěn PCR box nebo biologický bezpečnostní box. V PCR boxu pro izolaci DNA/RNA nejsou povoleny žádné jiné typy práce!

V oblasti přípravy reakčních směsí a provádění PCR připravit PCR směs, přidat izolované preparáty DNA/RNA nebo cDNA do PCR zkumavky, reverzní transkripci RNA a amplifikaci DNA nebo cDNA. Prostor pro přípravu reakčních směsí a provádění PCR musí být oddělený. Příprava PCR reakčních směsí se provádí v PCR boxu.

V případě potřeby lze v jedné místnosti spojit fázi izolace DNA/RNA s fází přípravy reakčních směsí a provádění PCR, pokud jsou v ní samostatné PCR boxy - pro přípravu reakčních PCR směsí a pro izolaci DNA/RNA.

Detekční zóna pro amplifikační produkty umístěna v samostatné místnosti, pokud možno vybavené PCR boxem. Pokud je pro detekci amplifikačních produktů nutné současně použít metodu elektroforézy a metodu hybridizační analýzy, měla by být v detekční místnosti vyhrazena samostatná pracovní plocha pro hybridizační analýzu. V tomto případě je zařízení a příslušenství pro každý typ detekce označeno ve vztahu ke každé zóně. Pro hybridizační analýzu není dovoleno používat pipety a skleněné nádobí určené pro elektroforézu.

Plánovací rozhodnutí a umístění zařízení musí zajistit plynulost pohybu studovaného materiálu. Výměna vzduchu mezi místností pro detekci amplifikačního produktu a ostatními místnostmi by měla být zcela vyloučena.

Laboratoř PČR je vybavena vodovodem, kanalizací, elektřinou a topením. Všechny místnosti laboratoře PCR jsou vybaveny dostatečným přirozeným i umělým osvětlením.

Při výstavbě nových nebo rekonstrukci stávajících laboratoří PČR jsou prostory vybaveny přívodní a odsávací nebo odsávací ventilací. Rozdílu tlaku vzduchu v místnostech laboratoře PCR je dosaženo díky rozdílům v rychlosti výměny vzduchu v nich. Kurz výměny vzduchu musí odpovídat hodnotám uvedeným v tabulce:

V případě potřeby lze do laboratoře PCR nainstalovat klimatizaci.

Vnitřní výzdoba prostor se provádí v souladu s jejich funkčním účelem. Povrchy stěn, podlah a stropů v laboratorních prostorách musí být hladké, bez prasklin, snadno zpracovatelné a odolné vůči detergentům a dezinfekčním prostředkům. Podlahy by neměly být kluzké. Laboratorní nábytek musí mít nátěr odolný vůči čisticím a dezinfekčním prostředkům. Povrch stolů by neměl mít praskliny nebo švy. Prostory laboratoře musí být neprostupné pro hlodavce a hmyz. Laboratoř PČR je vybavena hasicím zařízením.

Pokyny pro sběr, skladování a přepravu

biologický materiál pro laboratorní výzkum

Biologický materiál musí být v označených zkumavkách (nádobách) a musí být doprovázen vyplněným individuálním referenčním formulářem v jedné kopii. Doporučení je nutné pečlivě a čitelně vyplnit s uvedením následujících údajů: datum, číslo zkumavky, název zdravotnického zařízení, které odeslalo biomateriál k testování, jméno lékaře, který materiál odebral; Celé jméno, věk a pohlaví pacienta, předběžná diagnóza; během těhotenství - gestační věk. Příjem biologického materiálu: PCR a imunochemické krevní testy- S 09:00 před 18:00 kromě víkendů a svátků. Bakteriologické studie- S 09:00 před 11:00 kromě pátků, víkendů, předsvátků a státních svátků.

pro identifikaci patogenů pomocí metody PCR

1.1.1. Biomateriál je odebrán z podezřelého prostředí mikroorganismů a rozvoje infekce.

1.1.2. Množství shromážděného materiálu by mělo být malé. Nadměrný výtok, hlen a hnis negativně ovlivňují kvalitu extrakce DNA a přispívají k degradaci DNA během skladování a přepravy.

1.1.3. Při zavádění biomateriálu odebraného pacientovi sondou s vatovým tamponem nebo kartáčkem do zkumavky Eppendorf s tlumivým roztokem je nutné:

Udržujte sterilitu;

Před ponořením biomateriálu nasbíraného na tampónu (štětečku) do roztoku jej rozetřete na suchou stěnu zkumavky, poté tampon (štěteček) navlhčete v roztoku a otáčením sondy důkladně opláchněte veškerý materiál ze zkumavky. stěna zkumavky a tampon (štětec);

Je-li to možné, přitlačte tampón ke stěně zkumavky, vyjměte sondu s tampónem (štětečkem) a zkumavku uzavřete.

1.2. Metody sběru biomateriálu pro výzkum PCR

1.2.1. Odřezky. Pro škrábání se používají jednorázové sterilní sondy s vatovým tamponem se zvýšenou adsorpcí nebo „kartáčky“, méně často - lžíce Volkmann, malé ušní lžičky nebo podobné nástroje s mírně tupými okraji. Pomocí škrabacích pohybů sbírejte materiál. Zkoumaný materiál by měl obsahovat co největší počet epiteliálních buněk a minimální množství hlenu, krve a exsudátu. Přidejte materiál do sterilní Eppendorfovy zkumavky s tlumivým roztokem (viz část 1.1.).

Škrábání z cervikálního kanálu: Před odběrem seškrabu je nutné odstranit přebytečný hlen sterilním vatovým tamponem a ošetřit děložní čípek sterilním fyziologickým roztokem. Zaveďte sondu do cervikálního kanálu do hloubky 0,5-1,5 cm, vyhněte se kontaktu se stěnami pochvy, a materiál sesbírejte škrábáním (ne dokud není krev). Malý počet červených krvinek ve vzorku neovlivňuje výsledek analýzy. V přítomnosti cervikální eroze se materiál odebírá z hranice zdravé a změněné tkáně.

Seškrabování z močové trubice: vložte sondu do močové trubice (u mužů - do hloubky 2-4 cm) a několika rotačními pohyby odeberte materiál. Den před odběrem materiálu je povolena provokace (kořeněná jídla, alkohol apod.). Před odběrem vzorku se doporučuje zdržet se močení po dobu 1-2 hodin. Pokud dojde k silnému hnisavému výtoku, seškrábnutí by mělo být provedeno nejpozději 15 minut po močení.

Konjunktivální škrábání odebraná po anestezii oka 0,5% roztokem dikainu. Po obrácení očního víčka použijte sondu s vatovým tamponem (nebo oční skalpel) k odběru epiteliálních buněk ze spojivky.

Rektální škrábání: Zaveďte sondu do řitního otvoru do hloubky 3-4 cm a rotačním pohybem odebírejte materiál.

1.2.2. Mrtvice. Pomocí jednorázové sterilní sondy s vatovým tamponem nebo kartáčkem odeberte malé množství výtoku (z poševní klenby, hltanu, nosohltanu atd.) a přeneste jej do sterilní Eppendorfovy zkumavky s tlumivým roztokem (viz bod 1.1.).

1.2.3. Krev. Pro studie PCR musí být krev rodák(není stočený).

Odeberte krev asepticky, venepunkcí, do speciální zkumavky (2-3 ml) s antikoagulantem EDTA ( Heparin nelze použít jako antikoagulans!), jemně promíchejte a zkumavku jemně otáčejte.

Krev s EDTA je biomateriál pro následující skupiny studií:

- genetický výzkum(nezáleží na okamžiku odběru krve).

- identifikace infekčních agens(nejinformativnější jsou vzorky odebrané při zimnici, horečce, tedy pravděpodobně při virémii nebo bakteriémii).

1.2.4. Moč. První nebo střední ranní moč odebírejte v množství minimálně 10 ml do prázdné sterilní nádobky s pevně přišroubovaným víčkem. Pokud se sběr moči provádí během dne, pak by před tím pacient neměl močit po dobu 1,5-3 hodin.

1.2.5. Sputum. Ráno dezinfikujte ústa a krk (vypláchněte roztokem jedlé sody). Odeberte sputum do prázdné sterilní lahvičky se širokým hrdlem.

1.2.6. Biopsie. Materiál se odebírá z oblasti, kde se má infekční agens nacházet, z poškozené tkáně nebo z oblasti hraničící s poškozením. Bioptický vzorek umístěte do sterilní Eppendorfovy zkumavky s roztokem pufru.

1.2.7. Sliny, žaludeční šťáva, mozkomíšní mok, synoviální tekutina. Sliny (1-5 ml), žaludeční šťáva (1-5 ml), mozkomíšní mok (1-1,5 ml) - vložte do prázdné sterilní zkumavky (nádoby).

1.2.8. Prostatická šťáva. Po masáži prostaty se šťáva odebírá v množství 0,5-1 ml do prázdné sterilní zkumavky (nádoby). Pokud není možné získat šťávu, ihned po masáži odeberte první část moči v množství nejvýše 10 ml (tato část obsahuje šťávu z prostaty).

1.2.9. Výplachy, bronchoalveolární laváž (BAL). Sterilní vatový tampon a 5-7 ml fyziologického roztoku se používá k opláchnutí např. z hrotu endoskopu nebo bronchoskopu a 0,5-5 ml výplachu se umístí do prázdné sterilní zkumavky (nádoby).

1.2.10. Feces. Sonda s vatovým tamponem je umístěna uvnitř stolice a mírně otočena, zachycuje malé množství materiálu. Materiál se poté umístí do sterilní Eppendorfovy zkumavky obsahující roztok pufru.

1.3. Pravidla pro uchovávání biologického materiálu pro výzkum PCR

1.3.1. Šmouhy, škrábance:

V chladničce (+4ºС - +8ºС) po dobu až 7 dnů;

V mrazáku (-20ºС) až 14 dní (je povoleno pouze jednorázové odmrazování!).

1.3.2. Moč: v chladničce (+4ºС - +8ºС) ne déle než 1 den;

1.3.3. Krev s EDTA: v chladničce (+4ºС - +8ºС) - ke stanovení infekčních agens - ne déle než 1 den; pro genetický výzkum – až 4 dny. Nelze zmrazit.

1.3.4. Sputum

1.3.5. Biopsie:

V chladničce (+4ºС - +8ºС) ne déle než 1 den,

V mrazáku (-20ºС) po dobu až 2 týdnů.

1.3.6. Prostatická šťáva: v chladničce (+4ºС - +8ºС) ne déle než 1 den.

1.3.7. Synoviální tekutina: v chladničce (+4ºС - +8ºС) ne déle než 1 den.

2. Pravidla pro odběr, skladování a přepravu krve

pro imunochemické studie

2.1.1. V předvečer odběru krve se vyhněte fyzické aktivitě, stresovým situacím, fyzioterapeutickým procedurám, užívání léků (s výjimkou léků předepsaných lékařem), perorální antikoncepci, pití alkoholických nápojů a tučných jídel. Bezprostředně před testem nekuřte.

2.1.2. Při studiu funkce štítné žlázy během léčby léky obsahujícími hormony štítné žlázy se studie provádí 24 hodin po poslední dávce léku; 2-3 dny před odběrem krve se vyvarujte užívání léků obsahujících jód.

2.1.3. Při studiu PSA týden před testem vylučte jakoukoli manipulaci s prostatou.

2.1.4. Krev se odebírá ráno nalačno (aby se předešlo chylóze, tj. zákalu séra), za podmínek fyziologického klidu. Před odběrem krve musí být pacientovi poskytnut 15minutový odpočinek.

2.1.5. Krev se odebírá na ošetřovně zdravotnického zařízení v poloze „vsedě“ nebo „vleže“ z ulnární žíly při dodržení pravidel asepse a antisepse. Krev se odebírá do sterilní zkumavky, stříkačky monovet nebo systému pro odběr krve (Vacutainer®, Vacuette®).

2.1.6. Pro získání séra se žilní krev nechá usadit, dokud se úplně nesrazí. Po vytvoření fibrinové sraženiny se fibrinová sraženina oddělí od stěn sterilní skleněnou tyčinkou, přísně individuální pro každý vzorek, zkumavka se odstřeďuje při 3000 otáčkách za minutu po dobu 15 minut * .

* Stříkačky Monovet a systémy pro odběr krve (Vacutainer®, Vacuette®) se centrifugují bez předchozí manipulace.

2.1.7. Žlutý supernatant (sérum) se opatrně odpipetuje do prázdné zkumavky s uzávěrem (5 ml).

2.2. Pravidla pro uchovávání krve a séra pro imunochemické studie

2.2.1. NAúroveň: v chladničce (+40C - +80C) po dobu 1 dne.

2.2.2.Sérumkrev:

V chladničce při teplotě +40 ° C - + 80 ° C po dobu 4 dnů;

V mrazáku při -200C po dobu 2 týdnů.

Je povoleno pouze jedno rozmrazování!

POZORNOST! Předmětem vyšetření je sérum, které neobsahuje příměsi červených krvinek, bakteriální výrůstky, chyle, hemolýzu. Pokud je přítomen některý z těchto příznaků, sérum je zničeno a je předepsán opakovaný odběr krve.

2.3. Pravidla pro odběr a skladování krve pro testování lupus antikoagulancia

A koagulační studie

2.3.1. Krev se odebírá ráno na lačný žaludek z ulnární žíly při dodržení pravidel asepse a antisepse v den studie. Aby se zabránilo aktivaci srážení krve, komprese žíly by neměla přesáhnout 1 minutu .

2.3.2. Pokud je studie předepsána při užívání léků, které ovlivňují srážlivost krve, musí to být uvedeno v doporučení.

2.3.3. Krev se odebírá do speciální zkumavky obsahující citrát sodný, na značku. Nedodržení tohoto pravidla mění poměr krev/antikoagulant, což může nepříznivě ovlivnit přesnost výsledku.

2.3.4. Do 1 hodiny po odběru krve musí být zkumavka centrifugována při 3000 otáčkách za minutu po dobu 15 minut.

2.3.5. Skladování plazmy: do 6 hodin při teplotě +40C - +80C nebo do 2 týdnů při teplotě -200C.

2.4. Pravidla pro odběr a skladování krve pro studium glykovaného (glykosylovaného) hemoglobinu

2.4.1. Krev se odebírá ráno na lačný žaludek z ulnární žíly při dodržení pravidel asepse a antiseptik.

2.4.2. Krev se odebírá do speciální zkumavky obsahující EDTA a hladce se promíchá. Neodstřeďovat!

2.4.3. Dodání do laboratoře v den odběru krve.

2.4.4. Skladování: až 2 týdny při -200C.

2.5. Pravidla prenatálního screeningu

2.5.1. Optimální načasování studie: I ​​trimestr - 10-13 týdnů těhotenství; II trimestr – 16-18 týdnů těhotenství.

2.5.2. Při odeslání na studii se vyplňuje speciální směr, ve kterém je nutné uvést individuální údaje těhotné: věk (den/měsíc/rok), hmotnost, výsledky ultrazvuku (CTR, BPR, počet plodů, gestační věk dle UZ (týdny + dny), pokud jsou k dispozici - údaje o velikosti krční rýhy - NT) s povinným uvedením data ultrazvuku a jménem lékaře, který ultrazvuk prováděl; přítomnost dalších rizikových faktorů (kouření, diabetes, IVF), etnická příslušnost.

2.5.3. Pro screening pro druhý trimestr těhotenství můžete použít ultrazvuková data provedená v prvním trimestru.

3. Pravidla pro odběr, skladování a přepravu biomateriálu

pro bakteriologický výzkum

3.1. Biomateriál se odebírá před aplikací kúry antibakteriální terapie nebo ne méně než týden po jejím dokončení.

3.2. Pro zamezení kontaminace vzorku mikroorganismy z vnějšího prostředí se odebraný biomateriál přemístí do prázdného kontejneru nebo zkumavky s transportním médiem za dodržení standardních pravidel sterility: zátka zkumavky (nádoby) se otevře/uzavře tak, že vnitřek zátky zůstává sterilní; sterilní nádoby nezůstávají otevřené dlouho.

3.3. Odebírání biomateriálu k identifikaci mykoplazmata a ureaplazmata, trichomonas, gonokoky, nespecifická mikroflóra, kultury anaerobních bakterií vyrábí se ve značkových trubkách s uhlíkovým transportním médiem:

Otevřete obal na označeném místě podle schématu;

Vyjměte zkumavku a otevřete ji, zlikvidujte víčko;

Použijte sondu k odebrání seškrabu/stěru, vzorku biopsie nebo ponoření sondy do biologické tekutiny;

Ihned vložte sondu s biomateriálem do zkumavky (držadlo sondy je víko zkumavky);

Očíslujte zkumavku a označte číslo ve směru.

3.4. Druhy biologického materiálu pro příjem do transportního uhelného prostředí: stěry/stěry, prostatická šťáva, mozkomíšní mok, synoviální tekutina, biopsie.

3.5. Skladování biomateriálu ve zkumavkách s transportním médiem pro detekci mykoplazmata a ureaplazmata, nespecifická mikroflóra až do okamžiku přepravy -

Dodání do laboratoře do jednoho dne.

3.6. Skladování biomateriálu ve zkumavkách s transportním médiem pro detekci Trichomonas, gonokoky, kultury anaerobních bakterií až do okamžiku přepravy - pokojová teplota.

3.7. Nativní biomateriál: sputum, prostatická šťáva, synoviální tekutina od 1 do 10 ml pro detekci nespecifické mikroflóry, mykoplazmat a ureaplazmat se odebírají do prázdné sterilní nádoby.

Laboratoř je nutné oznámit den předem nebo v den odběru biomateriálu do 11:00.

Skladování nativního biomateriálu až do transportu - v prostoru chladničky (+4ºС - +8ºС).

Dodání do laboratoře v den odběru materiálu.

3.8. Moč pro testování stupně bakteriurie(průměrná ranní porce, 10-20 ml) se odebírá do prázdné sterilní nádoby s víčkem po důkladné toaletě zevního genitálu.

Laboratoř je nutné oznámit den předem nebo v den odběru biomateriálu do 11:00.

Skladování biomateriálu až do transportu - v prostoru chladničky (+4ºС - +8ºС).

Dodání do Laboratoře v den odběru biomateriálu.

3.9. Krev na sterilitu.

Nejinformativnější je odběr krve při zvýšení teploty.

Krev se odebírá do značkových lahví s dvoufázovým transportním médiem (láhev pro dospělé, láhev pro děti). Opatrně otevřete plastový uzávěr lahvičky a vystupující část pryžové zátky otřete 70% alkoholem. Za sterilních podmínek odeberte krev ze žíly injekční stříkačkou a vstříkněte ji přes pryžovou zátku do lahvičky (4 ml do lahvičky pro dospělé, 2 ml do lahvičky pro děti).

Laboratoř je nutné oznámit den předem nebo v den odběru biomateriálu do 11:00.

Uchovávání krve až do transportu - pokojová teplota.

Dodání do Laboratoře v den odběru biomateriálu.

3.10. Mateřské mléko k identifikaci nespecifické mikroflóry se odebírá z každého prsu do samostatného sterilního hermeticky uzavřeného kalíšku. Košíčky označte: „levý prs“, „pravý prs“.

Před odběrem biomateriálu omyjte prsa teplou vodou a mýdlem, otřete čistým ručníkem, bradavky a okolí bradavek pečlivě ošetřete vatovým tamponem navlhčeným v 70% roztoku etylalkoholu a osušte sterilním hadříkem (každý žláza se ošetří samostatným tamponem). Prvních 10-15 ml odsátého mléka se k analýze nepoužívá. Odsajte druhou porci mléka z každého prsu do označeného hrnečku v množství ~ 10 ml.

Laboratoř je nutné oznámit den předem nebo v den odběru biomateriálu do 11:00.

Dodání do laboratoře do 2 hodin v den odběru materiálu.

3.11. Výkaly pro dysbakteriózu.

Před odběrem vzorku je zakázáno 3 dny pít alkohol a 2 týdny brát antibiotika. Stolici je nutné získat bez klystýru nebo laxativ. Pro děti se zácpou lze použít kostku mýdla pro dráždivý účinek. Výkaly se shromažďují v samostatné nádobě, vymyté od dezinfekčního prostředku. Sterilní lžičkou odeberte 3-5 g průměrné části výkalů a umístěte ji do sterilní nádoby.

Laboratoř je nutné oznámit den předem nebo v den odběru biomateriálu do 11:00.

Skladování až do přepravy - nádobu skladujte s biomateriálem zabaleným ve vatě a papíru pro uchování tepla.

Dodání do Laboratoře v den odběru biomateriálu.

4. Pravidla pro odběr, skladování a přepravu biomateriálu

pro mikroskopické studie

4.1. Od každého pacienta - 2 sklenice(jedna sklenička - náhradní). Na každé sklenici - 3 body: vagína ( PROTI), cervikální kanál ( S), močová trubice ( U). Aplikujte tahy tak, aby matný povrch byl vlevo, nahoře a od něj - zleva doprava: v, c, u.

4.2. Označení (č.) na sklenici by se nemělo rozpouštět v alkoholu (na matnou část sklenice se můžete podepsat jednoduchou tužkou). Nátěry by měly být fixovány sušením na vzduchu (30-60 min).

4.3. Sklenice musí být označeny, složeny vedle sebe, zabaleny v jednotlivém sáčku s příslušným doprovodným nápisem (zdravotnické zařízení, celé jméno pacienta, číslo na sklenici).

4.4. Balíček a dokončené doporučení jsou odeslány do laboratoře.

5. Pravidla pro odběr, skladování a přepravu biomateriálu

5.1. 24 hodin před studií je třeba se vyvarovat sprchování, intravaginální terapie a pohlavního styku. Během menstruace nemůžete brát materiál. Nejinformativnější jsou vzorky odebrané 14-20 dní po začátku menstruace.

5.2. Materiál se odebírá před bimanuálním vyšetřením, různými diagnostickými testy a před odběrem materiálu na PCR. Materiál se odebírá bez předběžného ošetření vaginální sliznice.

5.3. Nylonovým kartáčkem na cervex, špachtlí nebo jiným nástrojem se odebere seškrab z vaginální/cervikální sliznice a rovnoměrně se rozetře po skle, přičemž jeden konec skla zůstane čistý (pro označení). Jeden bod se vezme za sklenici a duplikuje se na další náhradní sklenici (celkem dvě sklenice na bod). Nátěry by měly být fixovány sušením na vzduchu (30-60 min).

5.4. Brýle musí být označeny (č. a celé jméno pacienta), složeny vedle sebe, zabaleny v jednotlivém sáčku s příslušným doprovodným nápisem (zdravotnické zařízení, celé jméno pacienta, č. na sklenici).

5.5. Sušené nátěry lze skladovat až 6 dní při pokojové teplotě.

5.6. Balíček a vyplněné pokyny (každý bod má svůj vlastní směr označující typ biomateriálu) jsou odeslány do laboratoře.

Nedávejte směr do sáčku s brýlemi, nebalte brýle po směru!

Výběr klinického materiálu provádí zdravotnický personál v souladu s pravidly protiepidemického režimu, pouze se sterilními jednorázovými nástroji (stříkačky, příslušné sondy, cytokartáče apod.), v jednorázových rukavicích.

Materiál z vybraného lokusu odeberte co nejúplněji, pomocí vhodných aplikátorů – sond, cytobrushů (zajistěte přiměřenost klinického vzorku).

Získaný materiál (DNA/RNA mikroorganismů) zakonzervujte pomocí spolehlivých transportních médií a konzervantů poskytnutých laboratoří PCR. Médium pro transport a skladování klinického materiálu zajišťuje stabilitu RNA a DNA při pokojové teplotě po dobu až 28 dnů.

Odebraný materiál umístěte do vakuet s EDTA (krev), do jednorázových chemicky čistých zkumavek Eppendorf (stěry, mozkomíšní mok, biopsie atd.). Hlavní podmínkou při odběru materiálu je zabránit tomu, aby se DNAázy a ribonukleázy dostaly do vzorku, protože Ribonukleázy a DNAázy jsou enzymy pro degradaci RNA a DNA. Jsou extrémně stabilní v prostředí a vydrží i delší var. Hlavním zdrojem nukleáz je kůže a prachové částice. Plastové zkumavky a špičky musí být označeny „DNase, RNase-free“.

Ihned po odběru zkumavky a lahvičky s klinickým materiálem těsně uzavřete, aniž byste se dotkli jejich vnitřního povrchu nebo vnitřního povrchu uzávěrů.

Při práci s klinickým materiálem, při otevírání zkumavek, lahviček, neprovádějte prudké pohyby a vyvarujte se rozstřikování a potřísnění, které může vést ke kontaminaci vzorků a pracovních ploch.

Aby se zabránilo vzájemné kontaminaci, uchovávejte a přepravujte vzorky v samostatném plastovém sáčku nebo stojanech. Pokud je nutný přenos vzorku, použijte automatické mikropipety s vyměnitelnými jednorázovými špičkami s aerosolovými bariérami.

Před transportem do PCR laboratoře by měl být vybraný biomateriál skladován při teplotě 2–4 °C po dobu nejvýše 48 hodin. Je nutné minimalizovat dobu od odběru vzorku do PCR analýzy. Přeprava vzorků se provádí v chladicích sáčcích, termonádobách, termoskách s termosáčky, ledem nebo suchým ledem.

Krev, plazma, sérum

Doporučuje se odebírat krev pomocí vakuových systémů. Zavedení takových systémů umožňuje standardizovat manipulaci s krví, má pozitivní vliv na všechny fáze laboratorního výzkumu a celkově posouvá práci laboratoře na jinou, vyšší úroveň kvality. Jejich použití zaručuje ochranu personálu před infekcí, zkracuje dobu strávenou odběrem krve, je mnohem méně pravděpodobné, že bude doprovázeno hemolýzou a umožňuje udržovat vzorky krve sterilní a hermeticky přepravovat.

Doporučuje se provést venepunkci nalačno z ulnární žíly do speciální vakuové hadičky s antikoagulantem, po které se hadička několikrát převrátí pro promíchání. Zkumavky s krví skladujeme v chladničce při +4 °C – +8 °C. Maximální trvanlivost krve je 1 den (nezmrazovat!). Při nutnosti dlouhodobého skladování je nutné odebrat 1 ml séra nebo krevní plazmy a skladovat při teplotě -16 o -20 o C nejdéle 2 týdny.

Charakteristika vakuových systémů používaných pro diagnostiku PCR:

Vakuety s EDTA (6%) - používají se pro kvalitativní a kvantitativní výzkum. EDTA antikoagulant dobře fixuje buněčné nukleové kyseliny.

Vakuety s citrátem sodným (3,8 %) – používají se pro kvalitativní a kvantitativní výzkum. Není vhodné pro dlouhodobou přepravu, protože citrát je dobré živné médium pro cizí mikroflóru.

Vacuettes bez antikoagulancií (krevní sérum) - používá se pro kvalitativní výzkum. Použití krevního séra pro kvantitativní studie je nežádoucí, protože část infekčního agens se usazuje v krevní sraženině, čímž se snižuje možnost stanovení jeho kvantitativního obsahu v krvi.

Vakuety s heparinem nejsou absolutně vhodné pro PCR reakce. Heparin je polyanion, stejně jako DNA, a proto soutěží s DNA v reakci PCR.

Pravidla pro odběr krve pro stanovení mutací v lidských genech PCR diagnostika

Krev pro diagnostiku PCR. Krev se odebírá nalačno z ulnární žíly jednorázovou jehlou (průměr 0,8-1,1 mm) do jednorázové injekční stříkačky o objemu 2-5 ml a přenese se do zkumavky s EDTA nebo speciálním vakuovým systémem jako „Veccuette ” (s EDTA s lila uzávěrem), zkumavka se uzavře zátkou a převrátí se několikrát (pro smíchání s antikoagulantem).

Před testováním je zkumavka s krví uložena v chladničce při +4°C — +8 °C. Maximální trvanlivost: Krev odebraná do zkumavky s EDTA, k určení mutací v genechBRCA1/2, lze uložit na+4°С – +8°С 2 dny.

Pravidla pro odběr krve pro PCR testování - výzkum infekce

Pro získání plazmy se krev odebírá nalačno nebo 3 hodiny po jídle z ulnární žíly jednorázovou jehlou (průměr 0,8-1,1 mm) do speciálního vakuového systému (lila uzávěry - 6% EDTA). Zkumavka se uzavře a opatrně několikrát převrátí dnem vzhůru, aby se krev ve zkumavce důkladně promíchala s antikoagulantem (jinak se krev srazí a izolace DNA/RNA nebude možná).

Heparin nelze použít jako antikoagulans!

Podmínky pro skladování a přepravu materiálu a předzpracovaných vzorků

Vzorky plné krve: -při teplotě 20-25ºС – po dobu 2 hodin; - při teplotě 2-8ºС – do 6 hodin od okamžiku odběru materiálu pro kvantitativní stanovení nukleových kyselin; do 12 hodin – pro kvalitativní stanovení nukleových kyselin;

Zmrazování vzorků plné krve je zakázáno!

Odběr materiálu pro PCR infekcí HPV

K testování na HPV je nutný dostatečný počet epiteliálních buněk, protože virus je intracelulární agens. Mírná přítomnost nečistot ve formě cervikálního hlenu a krve je přijatelná. V některých případech je možné odebrat materiál pomocí univerzální gynekologické sondy, ale v tomto případě bude objem škrábaného výtoku menší a počet buněk může být nedostatečný.

Odstraňte hlen a vaginální výtok z povrchu děložního čípku sterilním gázovým tamponem, vložte pracovní část cytokartonu do cervikálního kanálu a udělejte dvě až tři plné otáčky ve směru hodinových ručiček. Cytobrush se vyjme a jeho pracovní část obsahující odebraný materiál se vloží do zkumavky s transportním médiem. Pracovní část cytobrush se odlomí ne více než 1 cm od plastové základny cytobrush a ponechá se ve zkumavce s transportním médiem.

Pokud není možné odlomit pracovní část cytobrush nebo univerzální sondy, klinický materiál by měl být co nejúplně smyt z jejich pracovní části do zkumavky s transportním médiem, přitlačením k vnitřku zkumavky a otočením 5-10krát ve směru a proti směru hodinových ručiček.

Je nepřijatelné používat opakovaně použitelné nůžky pro stříhání pracovní části cytobrushu nebo univerzální sondy – to může vést ke křížové kontaminaci klinickým materiálem a v důsledku toho k falešně pozitivním výsledkům.

Zkumavky s biologickým materiálem jsou až do testování skladovány v mrazáku při -16°C.

Odběr materiálu pro PCR diagnostiku u mužů

škrábání (rozmazávat). Materiál se odebírá pomocí univerzální sondy z močové trubice. V případě potřeby se materiál pro výzkum odebírá z genitálních vředů (test na HSV-II). Pracovní část sondy obsahující testovaný materiál se odřízne nebo odlomí a vloží do jednorázové Eppendorfovy zkumavky s konzervačním roztokem nebo se důkladně promíchá rotačním pohybem, vytlačí se zbývající kapalina na sondě proti stěnám zkumavky, vyjměte sondu (hoďte ji do nádoby s dezinfekčním roztokem).

Zkumavky s biologickým materiálem jsou až do testování skladovány v mrazáku při -18°C.

Spermie. Sbírejte do jednorázové suché Eppendorfovy zkumavky. Maximální trvanlivost je 1 den v chladničce při teplotě +4°C - +8°C; při -18°С - -20°С ne déle než 2 týdny.

Prostatická šťáva . Po dokončení masáže prostaty se šťáva v množství 0,5-1 ml odebere do jednorázové suché Eppendorfovy zkumavky. Pokud není možné šťávu získat, ihned po masáži odeberte první porci moči (obsahující prostatickou šťávu) v množství 10 ml.

Maximální trvanlivost je 1 den v chladničce při teplotě +4°C - +8°C; při -18°С - -20°С ne déle než 2 týdny.

Rozhodnutí o nutnosti vyšetřit konkrétní místo (vagínu, močovou trubici, cervikální kanál atd.) pro analýzu činí ošetřující lékař na základě souhrnu stížností pacienta a klinického obrazu onemocnění. K získání objektivního výsledku , je nutné, aby studovaný klinický materiál obsahoval co největší počet epiteliálních buněk a minimální množství hlenu a krevních nečistot (mírná přítomnost nečistot ve formě krve a hlenu je přijatelná). Nesprávný odběr biomateriálu může vést k nemožnosti získání spolehlivého výsledku a v důsledku toho k nutnosti opakovaného odběru biomateriál.

Postup odběru klinického materiálu do zkumavky s transportním médiem:

1. Otevřete víko zkumavky.

2. Pomocí jednorázové sterilní sondy získejte příslušný výboj

biotop (vagina, močová trubice, cervikální kanál).

3. Přeneste sondu s klinickým materiálem do zkumavky s transportním médiem o objemu 1,5 ml, když sonda spočívá na dně zkumavky, ohněte tenkou část sondy další silou do zářezu a poté zlomte Pokud je nutné získat klinický materiál z několika biotopů, postup zopakujte, pokaždé odeberte klinický materiál s novou sondou do nové zkumavky.

3. Zkumavku pevně uzavřete víčkem a označte ji.

Vlastnosti odběru klinického materiálu z cervikálního kanálu:

1. Klinický materiál cervikálního kanálu se získá po zavedení gynekologického zrcátka do pochvy pomocí uretrální sondy nebo cervikálního cytobrush (k testování HPV je nutný dostatečný počet epiteliálních buněk!).

2. Před odběrem klinického materiálu je nutné pečlivě vyčistit otvor cervikálního kanálu pomocí sterilního gázového tamponu a následně ošetřit čípek sterilním fyziologickým roztokem.

3. Po zavedení uretrální trubice 1,5 cm do cervikálního kanálu se několikrát pootočí (2-3 plné otáčky ve směru hodinových ručiček) a vyjme se. Při vyjímání sondy je nutné zcela zabránit jejímu dotyku s poševními stěnami.

4. Získaný klinický materiál se umístí do zkumavky s transportním médiem (viz výše).

Vlastnosti odběru klinického materiálu z pochvy:

V den vyšetření by ženy neměly provádět toaletu genitálií ani vaginální výplach.

1. Klinický materiál z pochvy se získává ze zadního nebo laterálního fornixu pomocí vaginální nebo uretrální sondy seškrabem z povrchu epitelu.

2. Klinický materiál je nutné získat PŘED provedením manuálního vyšetření.

3. Před manipulací lze gynekologické zrcátko navlhčit teplou vodou, použití antiseptik k ošetření zrcátka je kontraindikováno.

4. U dívek (panna) se klinický materiál získává ze sliznice poševního vestibulu bez použití gynekologického zrcátka.

5. Získaný klinický materiál se umístí do zkumavky s transportním médiem (viz výše).

Vlastnosti odběru klinického materiálu z močové trubice u žen:

1. Klinický materiál z močové trubice se získá pomocí uretrální sondy.

2. Před odběrem klinického materiálu se pacientovi doporučuje zdržet se močení po dobu 1,5–2 hodin.

3. Pokud je uretrální výtok volný, měl by být vnější otvor uretry vyčištěn vatovým tamponem.

4. Pokud není volný výtok, lze provést lehkou uretrální masáž.

5. Po zavedení nástroje do uretry do hloubky 1 cm je nutné jej posouvat k zevnímu otvoru, lehce zatlačit na zadní a boční stěny uretry (rotační pohyby jsou bolestivé).

6. Získaný klinický materiál se umístí do zkumavky s transportním médiem (viz výše).

Pro studium materiálu získaného z několika biotopů se postup opakuje, pokaždé s novou sterilní sondou a novou zkumavkou!!!

Je nepřípustné mísit materiál z cervikálního kanálu, vaginálního obsahu a močové trubice v jedné zkumavce!

Vlastnosti odběru klinického materiálu z močové trubice u mužů:

1,5–2 hodiny. Pro vyloučení zkreslení výsledků stanovení složení mikroflóry urogenitálního traktu mužů v důsledku přítomnosti přechodné mikroflóry v urogenitálním traktu po dobu tří dnů před užitím biomateriálu se doporučuje sexuální abstinence nebo použití chráněného sexuálního kontaktu.

1. Před provedením seškrabu z močové trubice ošetřete hlavu penisu v oblasti vnějšího otvoru močové trubice tamponem navlhčeným sterilním fyziologickým roztokem.

2.Masírujte močovou trubici. Pokud výtok volně vytéká z močové trubice, odstraňte jej suchým tamponem.

3. Sonda se zavede do močové trubice do hloubky 1-2 cm, epiteliální buňky se seškrábou několika rotačními pohyby a sonda se přenese do zkumavky s transportním médiem, odlomí se a ponechá. Výtok se shromažďuje v dostatečném množství. Mírná přítomnost nečistot ve formě hlenu, krve a hnisu je přijatelná.

Odběr klinického materiálu Spředkožka žaludu penisu (GPP):

Před užitím biomateriálu se pacientovi doporučuje zdržet se močení

1,5–2 hodiny.

1. Pomocí jednorázové sondy se seškrábnou epiteliální buňky z odpovídajícího biotopu (předkožka žaludu penisu, prepuciální vak) a sonda se přenese do zkumavky s transportním médiem, odlomí se a ponechá.

Podmínky pro skladování a přepravu biomateriálu:

1. Zkumavky se získaným klinickým materiálem musí být označeny.

2. Doprovodný doporučující dokument musí obsahovat: celé jméno, věk pacienta, klinický materiál, navrhovanou diagnózu, indikace k vyšetření, datum a čas odběru vzorku, název instituce (jednotky) odesílající klinický materiál.

3. Pokud doba přepravy klinického materiálu od okamžiku odběru do okamžiku jeho doručení do laboratoře není delší než 24 hodin, pak musí být zkumavka s klinickým materiálem skladována a doručena do laboratoře při teplotě domácí lednice (+ 4 + 10 ° C), bez mrazu.

4. Pokud není možné dodat klinický vzorek do laboratoře do 24 hodin, je povoleno jednorázové zmrazení a uchování klinického vzorku při teplotě -20°C po dobu až jednoho měsíce.