Способи поділу соматичних та статевих клітин. Центроміри Будова центроміри
№9, 2007 р.
© Вершинін А.В.
Центромери та теломери хромосом
А.В. Вершинін
Олександр Васильович Вершинін, д.б.н., гл.наук.ст. Інституту цитології та генетики СО РАН.
Що таке хромосоми сьогодні відомо майже кожному. Ці ядерні органели, у яких локалізуються всі гени, і становлять каріотип цього виду. Під мікроскопом хромосоми виглядають як однорідні, витягнуті темні паличкоподібні структури, і навряд чи побачена картина здається інтригуючим видовищем. Тим більше, що препарати хромосом безлічі живих істот, що живуть на Землі, відрізняються хіба що кількістю цих паличок і змінами їх форми. Проте є дві властивості, притаманні хромосом всіх видів. Перше - наявність обов'язкового стиснення (або перетяжки), розташованого або посередині, або зміщеного до одного з кінців хромосоми, що дістала назву центроміру. Друге - присутність кожному кінці хромосоми спеціалізованої структури - теломеры (рис.1). Різні гени, розташовані вздовж плечей (частин хромосоми від центроміри до фізичного кінця) хромосом, разом із регуляторними послідовностями ДНК відповідальні за виконання різноманітних функцій. Це забезпечує унікальність генетичної інформації, закодованої в кожному плечі кожної окремої хромосоми.
Центромірні та тіломірні райони займають особливе становище, бо виконують вкрай важливі, але ті самі функції в хромосомах всіх видів еукаріотів. Численні дослідження поки що не дали чіткої відповіді на питання, які молекулярні структури відповідальні за виконання цих функцій і як вони їх здійснюють, але очевидний прогрес у цьому напрямі останніми роками досягнуто.
До з'ясування молекулярної структури центромір і теломер вважали, що й функції повинні визначатися (кодуватися) універсальними і водночас специфічними даних районів послідовностями ДНК. Але пряме визначення первинної послідовності нуклеотидів (секвенування ДНК) ускладнювалося тим, що ці райони, як правило, є сусідами в хромосомах з ділянками високої концентрації послідовностей ДНК, що повторюються. Що сьогодні відомо про ці функціонально важливі райони хромосом?
Центромери
На середину минулого століття численні цитологічні дослідження показали визначальну роль центроміри у морфології хромосом. Пізніше встановили, що центромір разом з кінетохором (структурою, що складається в основному з білків) відповідальна за правильне розходження хромосом в дочірні клітини в ході клітинного поділу. Напрямна роль центроміри в цьому процесі очевидна: адже саме до неї прикріплюється веретено поділу, яке разом із клітинними центрами (полюсами) становить апарат клітинного поділу. Завдяки скороченню ниток веретена хромосоми рухаються під час поділу до полюсів клітини.
Зазвичай описують п'ять стадій клітинного поділу (мітозу). Для простоти ми зупинимося на трьох основних етапах у поведінці хромосом клітини, що ділиться (рис.2). На першому етапі відбувається поступове лінійне стиснення та потовщення хромосом, потім утворюється веретено поділу клітини, що складається з мікротрубочок. На другому хромосоми поступово просуваються до центру ядра і вишиковуються вздовж екватора, ймовірно, щоб полегшити приєднання мікротрубочок до центромірів. У цьому ядерна оболонка зникає. На останньому етапі половинки хромосом – хроматиди – розходяться. Складається враження, що мікротрубочки, прикріплені до центромірів, як буксир, тягнуть хроматиди до полюсів клітини. З часу розбіжності колишні сестринські хроматиди називаються дочірніми хромосомами. Вони досягають полюсів веретена та збираються разом у паралельному порядку. Утворюється ядерна оболонка. 
Мал. 2.Основні етапи мітозу.
Зліва направо:компактизація хромосом, утворення веретена поділу; вибудовування хромосом уздовж екватора клітини,
прикріплення веретена поділу до центромірів; рух хроматиду до полюсів клітини.
При ретельному спостереженні можна побачити, що у процесі клітинного поділу у кожному хромосомі центроміра перебуває в постійної позиції. Вона підтримує тісний динамічний зв'язок із клітинним центром (полюсом). Розподіл центромір відбувається одночасно у всіх хромосомах.
Розроблені останніми роками методи секвенування дозволили визначити первинну структуру ДНК протяжних ділянок центромір людини, плодової мухи. Drosophilaта рослини Arabidopsis. Виявилося, що в хромосомах і людини, і рослини центромірна активність пов'язана з блоком тандемно організованих повторів (мономерів) ДНК, близьких за розміром (170-180 пар нуклеотидів, нп). Такі ділянки називають сателітною ДНК. У багатьох видів, у тому числі й еволюційно далеких один від одного, розмір мономерів майже не відрізняється: різні види мавп – 171 нп, кукурудза – 180 нп, рис – 168 нп, комаха хірономус – 155 нп. Можливо, це відображає загальні вимоги, необхідні центромірної функції.
Незважаючи на те, що третинна структура центроміру людини і арабідопсис організована однаково, первинні послідовності нуклеотидів (або порядок нуклеотидів) в їх мономерах виявилися зовсім різними (рис.3). Це дивно для району хромосоми, що виконує таку важливу та універсальну функцію. Однак при аналізі молекулярної організації центромір у дрозофіли виявили певну структурну закономірність, а саме наявність ділянок мономерів приблизно одного розміру. Так, у дрозофіли центроміра Х-хромосоми складається в основному з двох типів дуже коротких простих повторів (ААТАТ і ААGАG), що перериваються ретротранспозонами (мобільними елементами ДНК) і "острівцями" складнішої ДНК. Всі ці елементи знайшли в геномі дрозофіли і поза центроміром, проте послідовностей ДНК, характерних для кожної центроміри, у них не виявили. Отже, власними силами центромірні послідовності ДНК недостатні і необов'язкові освіти центроміри. 
Мал. 3.Структура ДНК у центромірах людини та рослини.
Прямокутники відповідають тандемно організованим мономерам з ідентичною послідовністю нуклеотидів усередині (первинна структура ДНК). У різних видів первинна структура ДНК мономерів відрізняється, а вторинна є спіраль. Послідовність мономерів відбиває структурну організацію ДНК вищого рівня.Це підтверджується і проявом центромірної активності поза нормальних центромір. Такі неоцентромери поводяться як звичайні центроміри: утворюють цитологічно помітну перетяжку і формують кінетохор, що зв'язує білки. Однак аналіз ДНК двох неоцентромірів людини і звичайної центроміри загальних послідовностей не виявив, що говорить про можливу роль інших структурних компонентів хромосоми. Ними можуть бути гістонові та негістонові білки, які зв'язуються з ДНК, формуючи нуклеосомну структуру хроматину.
Функціональну роль центромірної структури хроматину підтверджує присутність специфічних кожного біологічного виду варіанта гістону Н3 в центромірному хроматині: в людини вони названі CENP-A, в рослин - CENH3. Серед безлічі білків, що є в кінетохорі, тільки два, СЕNН3 і центромірний білок С (СЕNР-С), безпосередньо зв'язуються з ДНК. Можливо, саме CENH3, взаємодіючи з іншими гістонами (Н2А, Н2В та Н4), формує та визначає специфічний для центромір тип нуклеосом. Такі нуклеосоми можуть бути свого роду якорями для утворення кінетохора. Варіанти гістону Н3 у центромірах різних видів подібні до канонічної молекули гістону Н3 у ділянках взаємодії з іншими гістоновими білками (Н2А, Н2В, Н4). Однак ділянка центромірного гістону Н3, що взаємодіє з молекулою ДНК, мабуть, знаходиться під дією рушійного відбору. Як уже говорилося, первинна структура центромірної ДНК відрізняється між видами, і було висловлено припущення, що центромірний гістон Н3 коеволюціонує разом із центромірною ДНК, зокрема у дрозофіли та арабідопсису.
Виявлення центромірного гістону Н3 породило крайню точку зору, згідно з якою центромірна функція та її повна незалежність від первинної структури ДНК визначається нуклеосомною організацією та цим гістоном. Але чи достатньо цих факторів для повноцінної активності центроміру? Моделі, що ігнорують роль первинної структури ДНК, повинні припускати випадковий розподіл змін у структурі центромірної ДНК у різних популяціях без відбору. Проте аналіз сателітної ДНК у центромірах людини та Arabidopsisвиявив консервативні райони, як і райони з вищою, ніж середня, варіабільністю, що свідчить про тиск відбору на центромірну ДНК. Крім того, штучні центроміри вдалося отримати тільки з a-сателітними повторами людини, ампліфікованими з природних центромірів, але не з a-сателітів прицентромірних районів хромосом.
Менше важливих труднощів для пояснення зустрічають моделі, у яких вирішальним чинником у визначенні позиції центроміри (що зберігається від покоління до покоління) та її функцій служить третинна (чи навіть вищого порядку) структура ДНК. Її консерватизм допускає великі варіації у послідовності нуклеотидів і виключає тонку підстроювання первинної структури.
В останні роки стало очевидним, що універсальних послідовностей ДНК, які безпосередньо визначають функції центромір і теломер, немає. У цих районах хромосом ДНК служить платформою для збирання складних, багатокомпонентних ДНК-білкових комплексів, які забезпечують виконання цих функцій. Більш детально про комплементарну організацію цих комплексів та їх координоване функціонування можна прочитати в нашому огляді. Поряд зі специфічними для центромір і теломер компонентами цих комплексів до їх складу входять такі, що беруть участь у виконанні кількох функцій, іноді навіть протилежних. Наприклад, Ku70/80-гетеродимер входить до складу теломер і працює як позитивний регулятор довжини теломер у дріжджів і негативний регулятор - у рослини арабідопсис. У той же час цей білок бере участь у розпізнаванні розривів хромосом та їх відновленні. Без сумніву, один із найактуальніших напрямів досліджень - виявлення молекулярної природи механізмів регуляції різноманітних молекулярних комплексів, що забезпечують активність центроміру та тіломіру.
Роботу виконано за підтримки Російського фонду фундаментальних досліджень (проект 04-04-48813), INTAS (03-51-5908)
та Програми інтеграційних проектів СО РАН (проект 45/2).
Література
1. Talbert P.B., Bryson T.D., Henikoff S.// J. Biol. 2004. V.3. Article 18 2. Вершинін О.В.// Генетика. 2006. V.42. P.1200-1214. 3. Wu J., Yamagata H., Hayashi-Tsugane M. та ін.// Plant Cell. 2004. V.16. P.967-976. 4. Scott K.C., Merrett S.L., Willard H.F.// Curr. Biol. 2006. V.16. P.119-129. 5. Muller HJ. Further studies на природі і causas gene mutations // Proc. Sixth Int. Congr. Genet. 1932. V.1. P.213-255. 6. Louis E.J., Vershinin A.V. //BioEssays. 2005. V.27. P.685-697. 7.Lange T.de// Genes Dev. 2005. V.19. P.2100-2110.
Є дволанцюжковими, реплікованими хромосомами, які утворюються під час поділу. Основна функція центроміра полягає в тому, щоб бути місцем кріплення волокон веретена поділу. Веретено подовжує клітини та поділяє хромосоми, щоб гарантувати, що кожна нова отримає правильну кількість хромосом при завершенні або .
ДНК у центромірній ділянці хромосоми складається з щільно упакованого, відомого як гетерохроматин, який дуже ущільнений і тому не транскрибується. Через наявність гетерохроматину, область центроміру забарвлюється барвниками більш темний колір, ніж інші частини хромосоми.
Розташування
Центромір не завжди розташований у центральній області хромосоми (див. фото вище). Хромосома складається з короткого плеча (p) та довгого плеча (q), які з'єднуються у центромірній ділянці. Центромери можуть перебувати як поблизу середини, так і в декількох положеннях вздовж хромосоми. Метацентричні центроміри розташовані поблизу центру хромосом. Субметацентричні центроміри зміщені в один бік від центру, так що одне плече довше за інше. Акроцентричні центроміри розташовані поблизу кінця хромосоми, а тілоцентричні центроміри знаходяться на кінці або області теломер хромосоми.
Положення центроміру легко виявляється у каріотипі людини. Хромосома 1 є прикладом метацентричної центроміри, хромосома 5 є прикладом субметацентричної центроміри, а хромосома 13 є прикладом центроміра акроцентрика.
Розбіжність хромосом у мітозі
До початку мітозу клітина входить у стадію, відому як інтерфаза, де вона реплікує свою ДНК під час підготовки до поділу клітин. Утворюються сестринські , які пов'язані у тому центромірах.
У профазі мітозу спеціалізовані області на центромірах, які називають кінетохорами, прикріплюють хромосоми до веретеноподібних волокон. Кінетохори складаються з ряду білкових комплексів, які генерують кінетохірні волокна, що прикріплюються до веретену ділнію. Ці волокна допомагають маніпулювати та розділяти хромосоми під час поділу клітин.
На стадії метафази хромосоми утримуються метафазної пластині рівними силами полярних волокон, натискаючи на центроміри.
Під час анафази парні центроміри в кожній окремій хромосомі починають розходити один від одного, оскільки спочатку центруються щодо протилежних полюсів клітини.
Під час телофази новостворені включають окремі дочірні хромосоми. Після цитокінезу утворюються дві різні.
Розбіжність хромосом у мейозі
У мейозі клітина проходить через дві стадії процесу розподілу (мейоз I та мейоз II). Під час метафази I центроміри гомологічних хромосом орієнтовані протилежні полюси клітин. Це означає, що гомологічні хромосоми будуть прикріплюватися у своїх центромірних областях до волокон веретена поділу, що тягнеться тільки від одного з двох полюсів клітини.
Коли волокна веретена скорочуються під час анафази I, гомологічні хромосоми витягуються до протилежних полюсів клітин, але сестринські хроматиди залишаються разом. У мейозі II волокна веретена, що тягнуться від обох полюсів клітин, прикріплюються до сестринських хроматидів в їх центромірах. Сестринські хроматиди поділяються на анафазі II, коли волокна веретена тягнуть їх у протилежним полюсам. Мейоз призводить до поділу та розподілу хромосом серед чотирьох нових дочірніх клітин. Кожна клітина містить тільки половину числа хромосом від вихідної клітини.
Центроміри - це хромосомні структури відповідальні за напрямок руху хромосом під час мітозу. До функцій центромір відносяться адгезія сестринських хроматид, утворення кінетохора, спарювання гомологічних хромосом та залучення до контролю генетичної експресії. У більшості еукаріотів центроміри не містять певної послідовності ДНК. Зазвичай вони містять повтори (наприклад сателітної ДНК), схожі, але не ідентичні. У нематоди Caenorhabditis elegans і деяких рослин голоцентричні хромосоми, тобто. освіта кінетохора не локалізовано певною ділянкою, а відбувається дифузно по всій довжині хромосоми.
Центромери дріжджів
Центромера Spдовжиною 35-110 тпн (чим хромосома довша, тим центроміра менше) і складається з двох доменів - центральної корової області та зовнішньої області повторів (otr), передстравленої гетерохроматином (рис1). Центральна корова область складається з області неповторної ДНК (cnt) та області інвертованих
повторів (imt) з боків cnt. У центральній коровій області нормальний гістон H3 замінений своїм аналогом (CENP-A у Sc) і в цьому місці збирається кінетохор. Маркерні гени, що вбудовуються в центромірну послідовність, стають транскрипційно неактивними. Їхнє замовчання залежить від положення, наприклад, на зовнішніх повторах воно сильніше, а в центральній області менш виражене. Білки Mis6, Mis12, Mal2 та Sim4 зв'язуються з центральним районом центроміру. Центральний район частково перетравлюється мікрококовою нуклеазою, що вказує на особливу організацію хроматину, причому ця організація не залежить від ДНК (ДНК перенесена в Sp або інші ділянки хромосоми не зберігає таку організацію). Зовнішні повтори упаковані в нуклеосоми з деацетильованими гістонами (за допомогою деацетилаз Clr3, Clr6 і Sir2). Метилтрансфераза Clr4 диметилирует H3K9, який сідає Swi6 (аналог HP1) і Chp1. Таким чином, на центромірі формується гетерохроматин
(Див. огляд Гетерохроматин). Swi6 відповідає за приєднання когезинів до області зовнішніх повторів. otr складаються з dg та dh повторів, розділені іншими повторами. Внутрішні та зовнішні повтори містять кластери генів тРНК. Встановлено, що повтори dg мають першорядну роль у встановленні центромірної активності.
ДНК центральної корової області АТ-багата та складається з трьох ділянок cnt1, cnt3 – гомологічні на 99%, розташовані по кроях від сnt2 гомологічного з ними на 48%. Лівий та правий imr інвертовані та унікальні для кожної центроміри.
Мал. 1
Усі 16 центромір Scмають довжину 90 пн і містять три елементи: CDEI, CDEII та CDEIII (рис.2). CDEII - це АТ-багатий неконсервативний спейсер довжиною 78-90 пн, що розділяє CDEI та CDEIII. CDEI має довжину 8 пн. Ця ділянка не суттєва для центромірної активності, але її делеція підвищує ймовірність неправильного розходження хромосом під час мітозу. СDEII - 78-90 пн, містить ~90% АТ-пар. Делеції у цій ділянці переривають освіту центроміри, не порушуючи розбіжність хромомсом. СDEIII - 26 пн містить недосконалі паліндроми. Поодинока нуклеотидна заміна на цій ділянці повністю перериває центромірну активність.
Мал. 2
Мал. 3 Послідовності центромірної ДНК хромосом Sc
Центроміри людини
Центромера людини представляє ділянку 1-4 Мпн AT-багатого а-сателіту довжиною ~171 пн ( альфоїд). Інші сателіти також є. У межах повторів встановлюється місце утворення центроміру, що називається неоцентроміром. Первинна послідовність ДНК в неоцентромері, що встановилася, не має значення. Не всі а-сателіти стають центроміром, не дивлячись на присутність двох локусів багатих на а-сателіт, активною центромірою стає тільки один з них. Інтактна ДНК, що містить альфоїд і вміщена в ядро, не утворює активної центроміри, тому первинний механізм утворення активної центроміри залишається незрозумілим.
Центромера бере участь у поєднанні сестринських хроматид, формуванні кінетохора , кон'югації гомологічниххромосом і залучена до контролю експресії генів.
Саме в області центроміри з'єднані сестринські хроматиди у профазі та метафазі. мітозута гомологічні хромосоми у профазі та метафазі першого поділу мейоза. На центромірах ж відбувається формування кінетохорів: білки, що зв'язуються з центроміром, формують точку прикріплення мікротрубочок веретена поділув анафазі та телофазі мітозу та мейозу.
Відхилення від нормального функціонування центроміри ведуть до проблем у взаємному розташуванні хромосом у ядрі, що ділиться, і в результаті - до порушень процесу сегрегації хромосом (розподілу їх між дочірніми клітинами). Ці порушення призводять до анеуплоїдії, яка може мати тяжкі наслідки (наприклад, синдром Даунау людини, пов'язаний з анеуплоїдією (трисомією) по 21 хромосомі).
Центромірна послідовність
У більшості еукаріотів центроміра не має певної, відповідної їй нуклеотидної послідовності. Зазвичай вона складається з великої кількості повторів ДНК (наприклад, сателітної ДНК), в яких послідовність всередині індивідуальних елементів, що повторюються, схожа, але не ідентична. У людини основна послідовність, що повторюється, називається α-сателіт, проте в цьому регіоні є кілька інших типів послідовностей. Однак встановлено, що повторів α-сателіту недостатньо для утворення кінетохору, і що відомі функціональні центроміри, що не містять α-сателітної ДНК.
успадкування
У визначенні розташування центроміри у більшості організмів значну роль відіграє епігенетичне успадкування. Дочірні хромосоми утворюють центроміри у тих місцях, як і материнська хромосома, незалежно від характеру послідовності, що у центромірному ділянці. Передбачається, що має бути якийсь первинний спосіб визначення розташування центроміру, навіть якщо згодом її місцезнаходження визначається епігенетичними механізмами.
Будова
ДНК центроміри зазвичай представлена гетерохроматином, Що, мабуть, істотно на її функціонування. У цьому хроматині нормальний гістон H3 заміщений центромір-специфічним гістоном CENP-A (CENP-A характерний для пекарських дріжджів S. cerevisiae, але подібні спеціалізовані нуклеосоми, схоже, є у всіх еукаріотнихклітинах). Вважається, що присутність CENP-A необхідна для збирання кінетохора на центромірі і може відігравати роль епігенетичного успадкування розташування центроміри.
У деяких випадках, наприклад, у нематоди Caenorhabditis elegans , у лускокрилих, а також у деяких рослин, хромосоми голоцентричні. Це означає, що на хромосомі немає характерної первинної перетяжки- специфічної ділянки, до якої переважно кріпляться мікротрубочки веретена поділу. В результаті кінетохор має дифузний характер, і мікротрубочки можуть прикріплюватися по всій довжині хромосоми.
Аберації центромір
У деяких випадках у людини зазначено формування додаткових неоцінтромір. Зазвичай це поєднується з інактивацією старої центроміри, оскільки дицентричніХромосоми (хромосоми з двома активними центромірами) зазвичай руйнуються при мітозі.
У деяких незвичайних випадках було відзначено спонтанне утворення неоцентромірів на фрагментах хромосом, що розпалися. Деякі з цих нових позицій спочатку складалися з еухроматину і зовсім не містили альфа-сателітної ДНК.
Напишіть відгук про статтю "Центромера"
Посилання
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Уривок, що характеризує Центромера
Офіцер знову звернувся до Герасима. Він вимагав, щоб Герасим показав йому кімнати у хаті.– Пан немає – не розумій… моя ваш… – говорив Герасим, намагаючись робити свої слова зрозуміліше тим, що він їх говорив наввиворот.
Французький офіцер, посміхаючись, розвів руками перед носом Герасима, даючи відчувати, що і він не розуміє його, і, накульгуючи, пішов до дверей, біля яких стояв П'єр. П'єр хотів відійти, щоб сховатися від нього, але в цей самий час він побачив з кухні, що відчинилися, висунувся Макара Олексійовича з пістолетом в руках. З хитрістю шаленого Макар Олексійович оглянув француза і, піднявши пістолет, прицілився.
- На абордаж! - Закричав п'яний, натискаючи спуск пістолета. Французький офіцер обернувся на крик, і в ту ж мить П'єр кинувся на п'яного. Коли П'єр схопив і підняв пістолет, Макар Олексійович потрапив, нарешті, пальцем на спуск, і пролунав постріл, що оглушив і обдав усіх пороховим димом. Француз зблід і кинувся назад до дверей.
Забувши свій намір не відкривати знання французької мови, П'єр, вирвавши пістолет і кинувши його, підбіг до офіцера і французькою заговорив з ним.
- Ви не поранені? - сказав він.
- Je crois que non, - відповів офіцер, обмацуючи себе, - mais je l'ai manque belle cette fois ci, - додав він, вказуючи на штукатурку, що відбилася в стіні. - Quel est cet homme? раз близько було. Хто цей чоловік?] – суворо глянувши на П'єра, сказав офіцер.
- Ah, je suis vraiment au desespoir de ce qui vient d'arriver, [Ах, я, право, в розпачі від того, що трапилося,] - швидко говорив П'єр, зовсім забувши свою роль. - C'est un fou, un [Це нещасний божевільний, який не знав, що робив.]
Офіцер підійшов до Макара Олексійовича і схопив його за комір.
Макар Олексійович, розпустивши губи, ніби засинаючи, гойдався, притулившись до стіни.
- Brigand, tu me la payeras, - сказав француз, забираючи руку.
- Розбійнику, ти мені поплатишся за це. Наш брат милосердний після перемоги, але ми не прощаємо зрадникам,] – додав він з похмурою урочистістю в особі і з гарним енергійним жестом.
П'єр продовжував французькою вмовляти офіцера не стягувати з цього п'яного, божевільного людини. Француз мовчки слухав, не змінюючи похмурого вигляду, і раптом з усмішкою звернувся до П'єра. Він кілька секунд мовчки глянув на нього. Гарне обличчя його набуло трагічно ніжного виразу, і він простяг руку.
- Vous m'avez sauve la vie! Vous etes Francais, [Ви врятували мені життя. Ви француз,] - сказав він. Для француза висновок цей був безсумнівний. Здійснити велику справу міг тільки француз, а порятунок життя його, m r Ramball'я capitaine du 13 me leger [мосьє Рамбаля, капітана 13-го легкого полку] - було, без сумніву, найбільшою справою.
Але як не сумнівався цей висновок і засноване на ньому переконання офіцера, П'єр вважав за потрібне розчарувати його.
- Je suis Russe, [Я російська,] - швидко сказав П'єр.
- Ти ти, a d'autres, - сказав француз, махаючи пальцем собі перед носом і посміхаючись. - Charme de rencontrer un compatriote. Eh, bien! [Зараз ви мені все це розповісте. Дуже приємно зустріти співвітчизника. Ну! Що ж нам робити з цією людиною?] - додав він, звертаючись до П'єра, вже як до свого брата. П'єр не був французом, отримавши раз це найвище у світлі найменування, не міг же зректися нього, говорив вираз обличчя і тон французького офіцера. п'яна, божевільна людина потягла заряджений пістолет, який не встигли відібрати в нього, і просив залишити його вчинок без покарання.
Француз виставив груди і зробив царський жест рукою.
– Vous m'avez sauve la vie. Vous etes Francais. Vous me demandez sa grace? Qu"on emmene cet homme, [Ви врятували мені життя. Ви француз. Ви хочете, щоб я пробачив його? у французи П'єра, і пішов із ним до дому.
