Особенности проведения иммуноферментного анализа (ИФА). ИФА на сифилис положительный: что это значит при расшифровке анализа Исследование крови методом ифа

Развитие современной медицины в мире диагностики не перестает удивлять своими достижениями, и теперь врачу нет необходимости высказывать предположения о вероятном диагнозе, опираясь лишь на косвенные признаки. Создание и введение в мир лабораторных исследований иммуноферментного анализа крови (ИФА) позволяет быстро и точно определить не только наличие возбудителя, но и многие другие характеристики заболевания.

История создания и развития ИФА

Данный метод исследования крови стал применяться в практической медицине еще в середине прошлого столетия – где-то в 60-х годах. Изначальной его целью были научные исследования в области гистологии, которые ограничивались поиском и изучением клеточной антигенной структуры биологических видов. Анализ крови методом ИФА основан на взаимодействии родственных антигенов (АГ) и специфических антител (АТ), с формированием комплекса «антиген-антитело», определяемого ферментом.

Такой феномен подтолкнул ученых к решению, что способ можно применять для распознавания белковых соединений различных классов, образующихся в сыворотке крови при попадании в организм возбудителя. Из-за своей непосредственной вовлеченности в функционирование иммунной системы эти соединения получили название иммуноглобулины (ИГ, Ig), а открытие стало величайшим прорывом в лабораторной диагностике.

При этом активно использовать этот высокочувствительный метод стали лишь в 80-х годах, и доступен он был только в узкоспециализированных медицинских учреждениях. Самыми первыми получили возможность пользоваться иммуноферментными анализаторами станции и центры переливания крови, венерологические и инфекционные лечебные заведения. Это было связано со стремительным распространением «чумы XX века» – СПИДа, и требовалось срочное принятие диагностических и терапевтических мер.

Возможности методики

Область применения анализа крови на ИФА довольно широка – на данный момент невозможно и представить, насколько бы усложнились поиски причины множества заболеваний. Такое исследование теперь применяется практически во всех медицинских отраслях, даже в онкологии. Хоть для неосведомленных это сложно понять, но в отдельных случаях проведя его, удалось спасти жизнь пациентам, обнаружив опухоль на ранних стадиях.

Важно! ИФА – анализ крови, который показывает маркеры, характерные для некоторых злокачественных процессов, что позволяет обнаружить заболевание на том временном этапе, когда никакому другому способу это неподвластно.

В современных диагностических центрах, лабораторные обследования представлены не только онкомаркерами – они снабжены внушительным арсеналом панелей для проведения данной диагностики. С их помощью можно определить множество патологических состояний, таких как гормональные отклонения и инфекционные процессы различного происхождения.

Кроме этого, проведение и расшифровка анализа крови ИФА даст возможность отследить действие медицинских препаратов на организм больного человека и даже животного. Последнее широко применяется в ветеринарных клиниках, помогая сохранить здоровье нашим домашним питомцам либо кормильцам, обеспечивающим стабильное поступление мясной, молочной продукции и незаменимых в рационе яиц.

Так, в результате забора всего нескольких миллилитров венозной крови и ее диагностики методикой ИФА, врач, описав материалы исследования, сможет определить:

гормональное состояние, включающее биологически активные вещества половых и щитовидной желез, а также надпочечников;
наличие бактериальной и вирусной инфекции (гепатит В и С, сифилис, герпес, хламидиоз, туберкулез, мико- и уреаплазмоз, ВИЧ, TORCH) и другие заболевания данной природы;
признаки жизнедеятельности возбудителей патологического процесса, завершившегося выздоровлением и перешедшего в стадию образования антител (иммунного ответа).

Такие комплексы гораздо проще распознаются и ликвидируются клетками иммунитета. Остаточные явления в виде антител во множественных случаях содержатся в крови пожизненно, что практически сводит риски повторного заражения к нулю.

Разновидности иммуноглобулинов

Существует несколько видов антител, причем каждый из них вовлекается в процесс иммунного ответа на определенном этапе. К примеру, первыми в ответ на попадание АГ в организм образовываются иммуноглобулины класса М (IgM). Самые высокие их показатели наблюдаются в первые дни заболевания.

Виды используемых при ИФА иммуноглобулинов

Затем иммунная система запускает в плазму ИГ класса G (IgG), ответственные за полное уничтожение антигенов и выздоровление больного. Позже они так и продолжают находиться в крови, тем самым подготавливая иммунитет к повторному попаданию идентичного возбудителя. По такому принципу работает вакцинация. При введении ослабленных антигенов патологических микроорганизмов, в плазме появляется и остается циркулировать много иммуноглобулинов.

Основными интересующими объектами для лабораторной диагностики считаются Ig классов M, G и A. По уровню их концентрации можно определить стадию заболевания и узнать, какими инфекционными болезнями человек болел в своей жизни. Например, можно проверить была ли в анамнезе ветряная оспа или краснуха. Врачу, чтобы узнать присутствует ли определенный вид АТ или АГ в организме пациента или концентрацию какого-либо гормона, нет необходимости назначать множественные лабораторные обследования – достаточно выписать направление на ИФА.

Суть методики

Методика исследования строится на нескольких вариантах (прямой и непрямой – конкурентный и неконкурентный) выполнения поставленных задач, причем каждый из них предназначен для определенных целей. Такой подход позволяет производить целенаправленный поиск, и в кратчайшие сроки выявлять причину той или иной патологии. Для обнаружения Ig разных классовых категорий применяется 96-луночный планшет (полистироловая панель), а в его лунках расположены сорбированные рекомбинантные белки. Они исполняют роль антигенов, и на начальном этапе находятся в твердой фазе.

При попадании в лунку с плазмой крови, антигены или антитела идентифицируют в связи со своей направленностью объект, и формируют комплекс (АГ – АТ). Данное образование закрепляется ферментным соединением (коньюгатом), который впоследствии проявится измененным окрашиванием лунки. ИФА производится на специфических тест-системах, изготовленных в профильных лабораториях и укомплектованных полным набором реагентов.

Данный анализ можно выполнять на вошерах – промывных аппаратах и считывающих спектрофометров, но они требуют ручного труда. Безусловно, лаборанту в несколько раз удобнее и быстрее осуществлять все манипуляции на полностью автоматизированных приборах. При их использовании сотрудники лаборатории освобождаются от большого объема монотонной деятельности – промывания, закапывания и остальной рутины, но не все лечебные учреждения могут себе позволить такую дорогостоящую аппаратуру

Поэтому многие больницы и диагностические заведения продолжают осуществлять ИФА по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация материалов исследования исключительно компетенция специалиста лабораторной диагностики – только ему могут рассказать результаты о специфике и тонкостях протекания заболевания. При этом врач должен обязательно учесть возможность получения ложноотрицательных или ложноположительных ответов.

Расшифровка материалов

Итогом качественной иммуноферментной диагностики должно стать однозначное заключение – найден искомый микроорганизм или нет в данном образце крови. Количественный анализ будет указывать на уровень концентрации и может выражаться двумя способами – значением в цифрах либо количеством знаков «+».

Анализируемые показатели

В процессе исследования производится тщательное изучение основных иммуноглобулинов, вовлеченных в иммунный ответ, таких как:

IgM – обнаружение данного класса означает развитие острой формы инфекционного заболевания. Отрицательный результат по поиску IgM может быть как свидетельством отсутствия искомого возбудителя, так и перехода болезни в хроническое течение.
IgА – определение этого класса при отсутствии IgM в большинстве случаев сигнал о хронической либо скрытой форме развития инфекционной болезни.
IgM и IgА (одновременное наличие) – положительные результаты на оба вида свидетельствует о самом пике острой формы патологии.
IgG – его наличие указывает на трансформацию заболевания в хроническую форму либо на выздоровление и формирование иммунитета к определяемому агенту.

Появление и накопление определенного класса ИГ происходит на разных временных этапах. Так, к примеру, первыми появляются IgM, приблизительно на 5 день от попадания возбудителя. ИГ находятся в крови около 5–6 недель, и затем постепенно пропадают. В это время они доступны к определению посредством ИФА. Ориентировочно через 3–4 недели от начала болезни появляются IgG, которые впоследствии могут оставаться на протяжении нескольких месяцев. Но в анализе их не всегда удается обнаружить.

IgА образуются в крови в период 2–4 недели, при этом 20% их содержится в сыворотке, а 80% – в секрете слизистых оболочек. Как правило, эти иммуноглобулины пропадают на протяжении 2–9 недель, что свидетельствует об уничтожении возбудителя и выздоровлении больного. Если же ИФА все же показывает наличие IgА, то это сигнализирует о переходе процесса в хроническую форму.

Варианты результатов анализа

В зависимости от полученных данных, ответы ИФА могут быть выданы на бланке в виде таблицы с полным списком всех АТ и АГ и указанием положительной либо отрицательной реакции. В определенных ситуациях будет выведено количественное значение – резко положительный, положительный, слабоположительный или отрицательный результат. Второй вариант указывает на количество содержащихся АТ в изучаемом образце крови.

Варианты интерпретации материалов ИФА

Кроме вышеперечисленных значений, в процессе ИФА исследуется еще один количественный параметр – индекс авидности АТ, исчисляющийся в процентах. Он показывает, сколько длится заболевание – то есть чем выше показатель, тем больше времени идет развитие патологии.

Альтернативный способ ИФА

Иммуноферментный анализ крови – достаточно известная и распространенная диагностика. Возможно, о ней никогда и не слышали некоторые, но существует одна еще менее известная широкому кругу людей разновидность данного исследования, при котором берется образец не крови. Эта методика называется анализ кала на скрытую кровь, и во многих случаях она позволяет избежать дополнительных изнуряющих процедур, к тому же еще сопровождающихся неприятными ощущениями.

Анализ ИФА на скрытую кровь (молекулы гемоглобина) дает возможность обнаружить кровотечение органов пищеварительной системы, даже незначительное, признаки которого в стуле больного, как говорится, невооруженным глазом не найти. Иммуноферментный анализ скрытой крови в испражнениях человека за короткое время способен показать язвенную болезнь, полипоз, дивертикулез, опухоли, которые на ранних стадиях не сопровождаются определенной симптоматикой.

На сегодняшний день созданы тысячи разновидностей тест-систем иммуноферментной диагностики, которые предоставляют возможность находить АТ и АГ огромного списка патологий. Поэтому данный анализ применяется почти во всех отраслях медицины, для любой возрастной категории. А абсолютная безвредность позволяет прибегать к нему и при беременности, и для диагностики ослабленных пациентов.

Для проведения комплексной оценки состояния организма применяется ИФА-метод проведения диагностики. Иммуноферментный анализ крови предназначен для диагностирования инфекционных, гематологических, первичных и вторичных иммунодефицитов.

Что такое анализ ИФА

Многие пациенты интересуются методом ИФА: что это, для чего проводится исследование. Иммуноферментный анализ начал использоваться сравнительно недавно. Изначально с его помощью изучались антигенные структуры, и он проводился только в научных целях. Затем ученые пришли к выводу, что при помощи ферментов можно выявить специфические антитела, возникающие в ответ на протекающее заболевание.

Изначально эта методика применялась только узкопрофильными медицинскими учреждениями, в основном на станциях переливания крови. Особое значение имеет метод ИФА для выявления ВИЧ-инфекции.

На сегодняшний день этот метод имеет широкую сферу применения. Современные лаборатории используют его для диагностирования:

опухолей;
гормональных нарушений;
инфекций;
хронических или перенесенных ранее инфекционных процессов;
гельминтов.

Если в организме протекает инфекционный процесс, то этот вид диагностики считается наиболее оптимальным для определения типа заболевания.

Суть метода и его виды

Метод ИФА - что это, какова суть этого вида исследования? Этот и многие другие вопросы интересуют пациентов. Основой этого способа диагностики считается связывание иммунных клеток организма с антигенами возбудителей инфекции. Получившийся комплекс определяют при помощи специального фермента.

Чтобы понять принцип метода ИФА, нужно знать, как проходит реакция антиген-антитело. Антиген - чужеродная для организма молекула белкового происхождения, которая проникает вместе с инфекцией. Частички чужой крови, несовпадающие по группе, также считаются антигенами. В организме они провоцируют иммунную реакцию, направленную на защиту от чужеродных веществ. Поэтому тело человека вырабатывает антитела - иммуноглобулины, способные присоединяться к антигенам, образуя иммунный комплекс. Такие соединения намного легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Реакцию на наличие таких иммунных комплексов проводят в лабораторных условиях, применяя уже готовые соединения, чтобы определить, есть ли в крови подобные им.

Суть метода ИФА достаточно простая, однако из-за того, что анализ крови проводится для выявления многих инфекций и болезней, существует несколько его разновидностей. Каждый отличается схемой проведения и областью применения. Может быть прямой или непрямой ИФА. Прямой метод подразумевает под собой то, что применяются обездвиженные антитела, реагирующие с антигенами. Основным плюсом такого метода является то, что все процессы можно автоматизировать, а значит, диагностика занимает немного времени.

Непрямой метод подразумевает, что применяются антитела вторичного характера. А на твердой фазе обездвиживается антиген. Анализ позволяет определить антитела к различным антигенам. Это помогает достигнуть более точного результата, однако метод отличается сложностью.

Преимущества исследования

Методом ИФА имеют множество преимуществ в сравнении с другими способами диагностики. К основным можно отнести такие:

высокая чувствительность;
стабильность при хранении ингредиентов;
скорость проведения диагностики;
можно применять небольшое количество исследуемого материала;
есть возможность автоматизации всех процессов;
можно выявить инфекцию на самых ранних стадиях.

Этот метод диагностики универсальный, поэтому подходит для проведения массового обследования. При помощи анализа есть возможность проследить динамику протекания инфекционного процесса.

Показания для анализа и забор материала

Проведение исследования при помощи метода ИФА могут назначить при подозрении на множество болезней:

На наличие антител исследуется венозная кровь. Перед проведением анализа из нее выделяют элементы, которые могут осложнять исследование. Может проводиться забор и других биологических жидкостей.

Чтобы получить наиболее точную информацию, забор крови проводится на голодный желудок. Если процедура была назначена для определения скрытой инфекции, то за несколько недель до проведения анализа нужно прекратить принимать антибактериальные и противовирусные препараты. В зависимости от оснащенности лаборатории, где проводился забор материала, результат можно получить в течение суток. В экстренных случаях это время сокращается до нескольких часов.

Анализ на сифилис

Использование метода ИФА помогает определить наличие многих инфекций в организме, в частности и сифилиса. Для проведения исследования берется кровь из вены натощак. Затем осуществляется исследование, помогающее определить не только наличие болезни в организме, но и точные сроки ее начала, так как в течение болезни одни антитела заменяются другими в строго определенном порядке.

При острой фазе, свидетельствующей о продолжительном течении болезни, или при обострении хронической инфекции в крови будут обнаружены иммуноглобулины типа M. Наличие иммуноглобулинов типа A свидетельствует о том, что инфекция обитает в организме более 4 недель. Иммуноглобулины группы G говорят о разгаре болезни или о ранее проведенной терапии.

По степени окраса лунок оценивают интенсивность протекания инфекционного процесса, так как его насыщенность зависит от количества образовавшихся иммунных комплексов.

Анализ на ВИЧ-инфекцию

ИФА-метод применяется и для проведения анализа на в таком случае имеет определенные особенности, которые связаны с протеканием и прогрессированием болезни. Этот метод исследования считается наиболее приемлемым для определения, однако проводить его нужно не ранее чем через месяц после воздействия факторов риска. Это связано с наличием инкубационного периода, протекающего от 45 дней и до 6 месяцев. Именно поэтому анализ нужно повторить через полгода.

аскаридоз;
лямблиоз;
токсоплазмоз и др.

Несмотря на все преимущества, существуют также недостатки метода ИФА. Основным недостатком считается то, что при проведении исследования доктор должен заранее иметь предположение о заболевании.

При нет возможности случайно найти возбудителя и определить его иммуноферментные свойства. Тест только указывает на наличие антител в крови больного. Кроме того, это достаточно дорогостоящий анализ.

Расшифровка анализа

Результатом качественного ИФА будет либо наличие антител, либо их отсутствие в крови. Если проводится количественный анализ, то концентрация антител может выражаться или в цифровом значении, или в определенным количеством знаков +.

Кроме того, анализируются такие показатели, как:

Показатель IgM указывает на протекание острого инфекционного процесса в организме. Полное его отсутствие может говорить об отсутствии возбудителя болезни или переходе ее в хроническую стадию.

Показатель IgA при отрицательном результате теста на IgM говорит о хронической или скрытой инфекции. Одновременное присутствие IgM и IgA свидетельствует о том, что болезнь находится в острой стадии. Наличие IgG говорит о переходе болезни в хроническую стадию или о полном выздоровлении и выработке иммунитета.

Сейчас существуют специальные тесты ИФА, которые можно провести самостоятельно.

Анализ ИФА является современной методикой лабораторной диагностики значительного количества различных заболеваний. Аббревиатура расшифровывается как иммуноферментный анализ. Суть методики заключается в определении титра (активности) антител.

Методика ИФА на сегодняшний день набирает значительную популярность. Она применяется в клинической медицине для диагностики различной патологии, а также в экспериментальных исследованиях, которые требуют точного определения концентрации различных соединений в исследуемых средах.

Принцип методики ИФА

Иммуноферментный анализ является иммунологической реакцией. Она основана на добавлении специфических антител
или антигенов в исследуемую среду (чаще всего исследуемая кровь) с последующим ферментативным определением концентрации образовавшихся комплексов антиген-антитело. По концентрации комплекса можно судить об уровне или активности определяемого соединения в исследуемой среде.

Определение концентрации комплексов антиген-антитело обычно осуществляется при помощи специальной аппаратуры хроматографическим методом.

Показания к проведению

ИФА анализ проводится по различным показаниям, основными из них в клинической медицине являются:

Диагностика инфекционной патологии с преимущественно половым путем передачи (ИППП), к которым относятся хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз, при этом выявляются специфические антитела к возбудителю инфекции.
Диагностика инфекционных заболеваний различной локализации для определения стадии патологического процесса, в первую очередь в процессе диагностики парентеральных вирусных гепатитов и ВИЧ .
Определение концентрации гормонов для диагностики различной патологии органов эндокринной системы (железы внутренней секреции).
Определение различных соединений для диагностики причины интоксикации организма при отравлениях, укусах насекомых или змей.

При этих медицинских показаниях выполняется анализ крови ИФА. Также данная методика активно применяется в экспериментальной медицине во время проведения различных клинических исследований во время разработки новых лекарственных средств, вакцин для иммунопрофилактики.

Как проводится исследование

Анализ крови методом ИФА проводится в условиях специализированной лаборатории. Предварительно для его проведения забирается венозная кровь, обычно из локтевой вены в объеме 5-10 мл, которая затем отправляется в лабораторию. В среднем результат анализа можно получить уже на следующий день, что является важным моментом для скорейшего назначения лечения после установления диагноза заболевания.

Как подготовиться к ИФА

Для получения достоверных результатов исследования методом иммуноферментного анализа следует придерживаться несколько несложных подготовительных рекомендаций, к которым относятся:

За день до сдачи анализа следует отказаться от употребления в пищу жирных продуктов питания (мясо, копчености) и алкоголя.
Материал для исследования необходимо сдавать утром натощак.
В день исследования желательно избегать физических и психоэмоциональных нагрузок.
Перед исследованием необходимо постараться не курить.

Большинство полученных ложноположительных результатов иммуноферментного анализа крови бывает вследствие неправильного выполнения подготовительных рекомендаций. Это в большинстве случаев связано с употреблением в пищу жирных продуктов питания, которые приводят к увеличению концентрации триглицеридов (жиры) в плазме крови, которые снижают специфичность проводимого ИФА.

Расшифровка результатов

Анализ крови на антитела при помощи ИФА имеет 2 модификации - качественное и количественное определение. При
качественном определении антител результат может быть положительным (антитела выявлены, что указывает на возможное наличие патологического процесса, вызванного возбудителем инфекции) или отрицательным (антител нет, что свидетельствует об отсутствии инфекционного процесса).

Отсутствие антител не всегда является стопроцентным показателем отсутствия инфекционного процесса. Это связано с тем, что после заражения антитела образуются не сразу, а в течение определенного периода времени (минимум около 2-х недель). Поэтому для подтверждения отсутствия инфекции проведение ИФА может повторяться через некоторое время.

При количественном ИФА выполняется определение титра (активности) антител, а также их классов. В большинстве случаев для диагностики инфекционных заболеваний проводится определение антител класса IgG (иммуноглобулины G) и IgM (иммуноглобулины М), которые образуются в организме через различные промежутки времени после инфицирования, поэтому расшифровка результата анализа может иметь несколько значений:

Повышение активности IgМ и отсутствие IgG - свидетельство недавнего инфицирования и острого течения инфекционного процесса.
Повышение активности IgМ и IgG - обострение инфекционного процесса при его хроническом течении и давнем заражении.
Высокая активность IgG и отсутствие IgМ - хроническое течение инфекционного процесса на фоне давнего заражения, после которого прошло более полугода (время, необходимое для образования антител класса IgG).

В целом расшифровка результатов ИФА для каждого инфекционного процесса имеет определенные особенности. Более точное определение наличия инфекционного заболевания, а также стадии его течения проводит врач.

ИФА на сегодняшний день является методом выбора диагностики большинства инфекционных заболеваний. На основании результатов такого исследования врач имеет возможность установить точный диагноз и определить стадию течения патологического процесса для назначения последующего адекватного и эффективного лечения.

Представляя собой современный вид лабораторного исследования, ИФА, или иммуноферментный анализ позволяет найти в крови специфические антитела либо антигены к определенным заболеваниям. Это позволяет обнаружить как этиологию болезни, так и определить ее стадию. При этом результаты подобного вида исследования могут выдаваться как количественно, так и качественно. Итак, давайте рассмотрим в подробностях принцип метода иммуноферментного анализа, его методику и суть.

Что такое иммуноферментный анализ

Назначаемый для максимально полной комплексной оценки состояния здоровья, иммуноферментный анализ позволяет оценить общее состояние здоровья и дать оценку его защитным функциям. Данное лабораторное исследование позволяет диагностировать инфекционные, аутоиммунные, гематологические патологии при анализе крови.

Суть иммуноферментного анализа рассмотрена в видео ниже:

Кому его назначают

Данное исследование может быть назначены тем больным, у которых выявляется наличие следующих заболеваний:

болезни вирусного происхождения, к которым относятся гепатиты, ;
заболевания, которые передаются половым путем — хламидиоз, трихомонада, сифилис, уреаплазма, микоплазма;
иммунодефицит;
проведение предоперационного комплексного обследования.

ИФА анализ крови назначается также для определения уровня гормонов и оценки качества проводимого вида терапии.

Врачом может быть назначен данный анализ для установки стадии имеющегося заболевания, что позволяет своевременно вносить корректировки в применяемое лечение. А высокая точность получаемых данных позволяет иметь максимально развернутую картину здоровья. При этом получение данных после проведенного исследования происходит в очень короткий промежуток времени, что позволяет отслеживать динамику развития патологического процесса.

Зачем сдавать такие анализы

Поскольку благодаря ИФА анализу крови можно получить значительное количество информации о состоянии здоровья и патологических процессах, происходящих в организме, именно он дает возможность наиболее полно учитывать исходные данные (общее состояние здоровья, стадия заболевания, динамика развития патологического процесса, показатель эффективность применяемой терапии) при составлении схемы лечения.

По этой причине для получения наиболее выраженного результата лечения и быстрейшего прекращения патологического процесса в организме назначается ИФА анализ крови. Серьезные заболевания иммунной системы, наличие антигенов в крови и причины аллергии на основе полученных данных можно вылечить более быстро, применяя наиболее результативные методы.

Назначение ИФА анализа проводится при множестве патологий, и делать его следует только по назначению врача. Частота проведения анализа также устанавливается врачом, и при сдаче крови для проведения ИФА анализа картина болезни наиболее полная. Поскольку получение динамики течения болезни возможно при сдаче данного анализа более одного раза, наиболее часто может назначаться сдача крови от трех до пяти раз. Это дает возможность сравнить количество антител в крови в различные временные промежутки.

Виды такой процедуры

Существует несколько разновидностей иммуноферментного анализа. Различаются они видом взятой жидкости из организма человека, на основании которой проводится изучение ее состава и наличия определенных антигенов.

При этом для анализа может браться не только кровь человека, но и другие его жидкости:

околоплодные воды,
спинномозговая жидкость,
содержимое стекловидного тела,
мазки,
слизь из уретры и цервикального канала.

Проведение самой операции по взятию определенного вида жидкости стандартный и проводится в условиях дневного стационара.

Показания для проведения

Обычно ИФА анализ назначается врачом при необходимости получения развернутой картины текущего заболевания, проходящего в любой форме: хронической, вялотекущей либо острой. И показаниями к проведению данного вида анализа могут считаться следующие состояния и лечебные цели:

поиск антигенов определенных заболеваний;
определение гормонального статуса;
выявление в организме вируса гепатита;
исследование на ;
поиск антител к любому виду инфекционного заболевания;
обследование на наличие аутоиммунных поражений организма.

О проведении иммуноферментного анализа смотрите в видео ниже:

Противопоказания для проведения

Противопоказаний для иммуноферментного исследования на сегодняшний день не выявлено.

При беременности, когда наблюдается постоянное изменение содержания в крови гормонов, необходимо неоднократное проведение данного анализа для подтверждения полученного результата. Новорожденные и дети грудного возраста могут также иметь некорректные данные анализа: во время внутриутробного развития определенные виды антител могут проникать в кровь плода через плаценту матери. Потому их наличие во взятом анализе не следует считать признаком имеющейся инфекции.

Безопасность анализов

Проведение процедуры взятия любого вида жидкости из организма человека не приносит никакого отрицательного воздействия на организм. Полная стерильность при совершении манипуляций позволяет избежать вероятность заражения любыми видами заболеваний.

Подготовка к проведению

Для получения максимально достоверных результатов исследования следует воздержаться от употребления алкогольных напитков и наркотических препаратов перед взятием крови (либо иной жидкости) на анализ.

Как проходит процедура, ощущения во время нее

Для проведения ИФА анализа кровь у пациента берется строго натощак: следует не принимать пищу в каком-либо виде не менее чем за часов до процедуры. Анализ берется из локтевой вены.

О наличии любых заболеваний и принимаемых лекарствах сообщается врачу заранее, наиболее часто препараты на момент сдачи крови будут отменены. Ощущения во время проведения процедуры сходны со взятием крови для проведения биохимического анализа.

Расшифровка результатов

ИФА-диагностика позволяет определить наличие инфекции в организме, активность патологического процесса и этиологию имеющейся инфекции. Быстрое получение результата проведенного анализа (в течение суток) — одно из преимуществ данного вида исследования.

Процесс расшифровки полученной информации осуществляет врач. При этом следует учитывать, что корректность полученных результатов по динамике любых процессов гарантируется при прохождении анализов в одной лаборатории.

Средняя стоимость процедуры

Средняя цена ИФА-исследования зависит от направленности анализа и определения конкретных величин. Так, определение серологических маркеров инфекционных заболеваний различных видов (anti-HAV IgG, anti-HAV IgM, HBsAg) будет стоить от 200 до 320 рублей и проводится в течение 2 рабочих дней. Показатель стоимости данной процедуры считается также его преимуществом: доступность цен на любые виды исследований позволяет проводить исследование при любом размере бюджета.

Стоимость ИФА-исследования зависит от политики медицинского учреждения, однако его следует считать общедоступной процедурой, позволяющей получить развернутую картину имеющегося заболевания и обеспечить максимально полное лечение.

Про нормы и особенности ИФА-исследования смотрите в видеоролике ниже:

– современное лабораторное исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови либо антигенов к конкретным заболеваниям с целью выявления не только этиологии, но и стадии болезни. Результаты ИФА могут выдаваться качественно и количественно.

В настоящее время ИФА применяется в следующих ситуациях:

1) Поиск специфических антител к любому инфекционному заболеванию;
2) поиск антигенов каких-либо заболеваний (инфекционных, венерологических);
3) исследование гормонального статуса пациента;
4) обследование на онкомаркеры;
5) обследование на предмет наличия аутоиммунных заболеваний.

Преимущества метода ИФА:

1) Высокая специфичность и чувствительность метода ИФА (более 90%).
2) Возможность определения заболевания и отслеживания динамики процесса, то есть сравнивание количества антител в разных временных промежутках.
3) Доступность ИФА-диагностики в любом медицинском учреждении.

Относительный недостаток:

1) Выявление иммунного ответа (антител), но не самого возбудителя.

Основные понятия

Перед тем, как прояснить суть метода ИФА, кратко разберемся в некоторых понятиях.
Антитела (или иммуноглобулины - Ig) – специфические белки, вырабатываемые B -
лимфоцитами (иммунные клетки) в ответ на попадание в организм какого-либо инфекционного патогена (вирусы, бактерии, грибы и др). Выделяют иммуноглобулины А (IgA), иммуноглобулины Е (IgE), иммуноглобулины М (IgM), иммуноглобулины G (IgG), иммуноглобулины D (IgD). Отличаются они друг от друга молекулярной формой и массой, периодом полураспада, участием/неучастием в инфекционных процессах, сроками обнаружения с момента инфицирования. Если рассмотреть молекулярный вес, то больше всего он у IgM – это пентамер (950 000 дальтон) в отличие от остальных Ig (от 150 до 200 000 Да), благодаря чему IgM просто не могут проходить через плацентарный барьер. Поэтому обнаружение IgM у ребенка 1 года жизни всегда является признаком наличия инфекции у плода. В сыворотке крови основная масса иммуноглобулинов представлена именно IgG (75-85%), а самая низкая - IgE (0,003%). В инфекционном процессе непосредственное участие принимают только IgA, M, G. IgE являются признаком аллергических реакций и заболеваний, а IgD – можно обнаружить лишь в ткани лимфоузлов и миндалин, играет роль в формировании местного иммунитета.

Антигены – высокомолекулярные вещества органического происхождения, в частности возбудителей инфекционных и других заболеваний, а также вещества различных измененных клеток, образующихся при той или иной болезни (аутоиммунные заболевания, онкология).

Иммунный комплекс – комплекс антиген-антитело, участвующий в иммунном процессе.

На чем основан метод ИФА.

Выделяют несколько разновидностей ИФА (прямой, непрямой, метод блокирования, конкурентный), однако на практике чаще всего используется гетерогенный твердофазный иммунный анализ или ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)

Основу иммуноферментного анализа составляет иммунная реакция антигена и антитела с образованием иммунного комплекса: антиген-антитело, в результате которого происходит изменение ферментативной активности специфических меток на поверхности антител.

Простым языком этот процесс можно разделить на несколько этапов:

1) На поверхности лунок планшета доктора, проводящего обследование, находится очищенный антиген определенного возбудителя. При добавлении биологического материала (сыворотки крови) пациента происходит специфическая реакция между этим антигеном и искомым антителом (иммуноглобулином). Это соединение будет выступать «особым антигеном» в следующем этапе.

2) На данном этапе идет образование ИК (иммунных комплексов) - реакция между «особым антигеном» и конъюгатом (это иммуноглобулин, меченый ферментом пероксидазой). Добавляется особый хромоген. Результатом такой ферментативной реакции является образование окрашенного вещества в лунке планшета, интенсивность окраски которого зависит от количества содержащихся в материале пациента иммуноглобулинов (антител).

3) Далее происходит оценка результата: фотометрирование с помощью многоканального спектрофотометра, сравнение оптической плотности исследуемого материала с оптической плотностью контрольных проб, математическая обработка результатов. Количество антител у пациента напрямую зависит от высоты оптической плотности данной лунки.

Обычно на практике используют 96 луночные планшеты.

При измерении оптической плотности (ОП) исследуемой жидкости подсчитывается количество (или концентрация) антител в определенной единице объема. Затем результат сравнивается с контрольным образцом.

Нужно помнить: для каждой тест-системы разрабатываются индивидуальные показатели для учета результатов, показатели нормы и патологии (то есть «референтные значения»). Это нужно учитывать при оценке результатов каждого конкретного исследования. Некорректно интерпретировать результаты одной лаборатории по «референтным значениям» другой лаборатории. Также некорректно сравнивать результаты разных лабораторий между собой.

При постановке реакций ИФА имеет значение и такое понятие как авидность антител.
Авидность антител – это прочность связи антитела с антигеном и то количество антигена, находящегося во взаимосвязи с иммноглобулинами (антителами). Авидность имеет большое значение при оценке предполагаемого срока инфицирования, что чрезвычайно важно при диагностике первичного инфицирования у беременных.

Основа теста на авидность антител состоит из обработки иммунного комплекса (антиген-антитело) раствором мочевины с целью разрушения белка. Высокоавидные связи остаются целыми, а низкоавидные разрушаются. Результат выдается в виде индекса авидности, выражаемого в процентах (%).

Какие заболевания выявляются с помощью ИФА-диагностики?

2. Маркеры аутоиммунных заболеваний и показатели иммунитета человека (общий IgE, общий IgG, общий IgA, общий IgM, общий IgD, секреторный IgA, IgG 2, IgG4, ЦИК-циркулирующие иммунные комплексы, IgA и IgG к глиадину и другие)

3. Онкологичсекие маркеры (ФНО – фактор некроза опухоли, РЭА – раково-эмбриональный антиген, ПСА – простатспецифический антиген, ХГ – хорионический гонадотропин, СА 125, альвеомуцин и многие другие)

4. Репродуктивные нарушени я (эстрадиол, прогестерон, пролактин, тестостерон, АФП- альфафетопротеин, ФСГ – фолликулостимулирующий гормон и другие)

5. Заболевания щитовидной железы (свободные и связанные Т3, Т4, тиреоглобулин, тиреопероксидаза – ТПО, тиреотропный гормон - ТТГ).

Данный список представлен далеко не всеми заболеваниями, которые диагностируются с помощью иммуноферментного анализа.

Материал для ИФА анализа и правила его забора

Наиболее распространенный материал для реакции ИФА – это сыворотка крови пациента, взятая натощак. Материалом также могут служить спинномозговая жидкость, околоплодные воды, содержимое стекловидного тела, слизь цервикального канала и уретры, мазки.

Подготовка пациентов к сдаче материала для ИФА

Сроки изготовления ИФА

Иммуноферментный анализ материала проводится быстро, в течение суток. Задержки могут быть в разных лабораториях из-за накопления определенного количества сывороток.

Возможные результаты ИФА-диагностики

При оценке результатов на конкретные инфекции имеет значение класс обнаруженных антител и их количество. От этого зависит не только вопрос этиологии инфекции (есть она или нет), но и предполагаемая стадия заболевания (острая, хроническая), а также наличие активной инфекции (острой или обострения хронической) на момент обследования.

Каковы приблизительные сроки появления антител (иммуноглобулинов - Ig)?

Самыми ранними антителами являются IgM . Выявить их можно через 1-3 недели после возможного инфицирования, что характеризует острую фазу инфекционного процесса. Вторая ситуация появления антител IgM – активация (или обострение) хронического процесса. Антитела IgM циркулируют в среднем около 3х месяцев, затем их количество постепенно исчезает. Однако у некоторых пациентов следовые количества IgM могут обнаруживаться в течение 1-2х лет с момента инфицирования.

Современные тест-системы обладают высокой чувствительностью, вследствие чего встречаются неспецифические ложноположительные результаты (нередко у беременных). Поэтому у данной группы пациентов положительные IgM нужно перепроверять!

Антитела IgA появляются через 2-4 недели после инфицирования, но в количестве, достаточном для обнаружения – через месяц. Сывороточные IgA синтезируются плазматическими клетками селезенки, лимфоузлов и слизистых оболочек,Секреторные IgA концентрируются на слизистых оболочках для выполнения своей защитной функции – участвуют в местном иммунитете.

С 4й недели после инфицирования начинают появляться антитела IgG . При большинстве инфекций титр их постепенно увеличивается с максимумом в разные сроки (в среднем через 1,5-2 мес), далее титр остается на невысоком уровне и указывает на иммунитет. При некоторых заболеваниях (микоплазмоз, хламидиоз, трихомониаз) уровень IgG не бывает высоким, снижается существенно из-за отсутствия иммунитета при данных инфекциях.

Варианты обнаружения антител разных классов:

Изолированное обнаружение антител IgM предполагает наличие первичного
инфицирования.
- Одновременное выявление в крови IgM и IgG характерно для первичного инфицирования
в предыдущие 2-3 месяца, а также при обострении хронического заболевания. Следовательно, при беременности наличие IgM не всегда является признаком первичного инфицирования.
- Выявление изолированно IgG может указывать как на иммунитет к данному заболеванию,
так и на хроническую инфекцию. Во второй ситуации имеет значение и количество антител (титр), и изменение этого титра в динамике. Обычно исследования проводят с интервалом в 2-4-6 недель.
- Обнаружение IgA изолировано или с IgM указывают на первичную инфекцию. При
появлении IgA вместе с IgG предполагается активация хронической инфекции (в среднем 2 недели от момента обострения).

Определение авидности антител IgG является прекрасным дополняющим этапом диагностики первичной инфекции от давнего заражения, что имеет свое клиническое значение, прежде всего, при оценке риска внутриутробного заражения плода. Обнаружение низкоавидных IgG указывает на первичную инфекцию и выявляются в среднем спустя 4-6 месяцев после инфицирования, реже дольше. Низкоавидные IgG требуют других лабораторных подтверждений первичного инфицирования (IgM). Высокоавидные антитела являются либо признаком хронического заболевания и его обострения, либо сформировавшегося иммунитета.

Особенности у детей грудного возраста: у детей до года, а иногда и 1,5 лет в крови циркулируют материнские IgG к разным инфекциям (то есть произошло их проникновение через плаценты от матери к плоду в период внутриутробного развития). Она не являются сами по себе признаком наличия инфекции в настоящем. Если же в такjм возрасте обнаруживаются IgM (напомним, что материнские IgM проникнуть через плаценту не могут), то это признак внутриутробного инфицирования или приобретенной после рождения инфекции.

Количественный ИФА-метод

Результат ИФА-диагностики (с помощью иммуноферментного анализатора) выдается в определенных единицах измерения:
- Оптическая плотность (ОП) пробы – концентрация специфических антител в единице объема. Чем выше ОП пробы, тем выше концентрация антител. В некоторых результатах говорится о коэффициенте позитивности (КП) – это тоже оптическая плотность образца.
- Единицы концентрации антител (нанограмм/ миллилитр или нг/мл).
- В виде титров сывороток: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и так далее. Диагностические титры (при которых ставится диагноз именно болезни, а не факт инфицирования) для разных болезней разные.
- В виде символов – «+», «-», «?» (+, ++, +++, ++++).
- В виде качественной оценки по заданному критерию (положительно или отрицательно).

Правильно оценить количество антител, вариант классового выявления иммуноглобулинов, а, следовательно, выставить стадию болезни и необходимость лечения может только врач.

Нельзя забывать, что для любой тест-системы разрабатываются свои «референтные значения» (варианты нормы), при превышении которых и диагностируется то или иное заболевание (варианты патологии). Для разных тест-систем «референтные значения» различные.

Корректное сравнивание результатов ИФА, взятых в динамике, возможно только в случае их изготовления в одной и той же лаборатории.

Врач инфекционист Быкова Н.И.